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芪蛎消瘿汤对NOD.H-2h4小鼠甲状腺IL-23/IL-17轴的调控影响
目的:从辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的调控角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制.方法:雌性8周龄NOD.H-2h4小鼠,随机分成4组.正常组(NC)饲以双蒸水,模型组(MC)、常规剂量中药组(ZY1)和3倍剂量中药组(ZY3)自由饮用含0.05％碘化钠水8周成模后,再灌胃给药8周.RIA法测血清TT3、TT4,IRMA法测血清TSH;光镜下观察甲状腺细胞形态;免疫组化法及RT-PCR法分别检测甲状腺IL-6、TGF-β表达;Western Blot法检测甲状腺RORγt、RORα、STAT3蛋白表达.结果:各组间血清TT3、TT4及TSH值比较无统计学差异;与NC组比较,MC组AIT的发生率,IL-6、TGF-β mRNA及蛋白表达,RORγt、RORα、STAT3表达显著升高(P＜0.01);与MC组比较,ZY1组IL-6、TGF-β、RORα、STAT3、RORγt表达均明显下降(P＜0.01),ZY3组IL-6、TGF-p的整合光密度值及RORα、STAT3表达明显下降(P＜0.01),ZY3组RORγt表达下降(P＜0.05).结论:芪蛎消瘿汤可能通过下调IL-6、TGF-β、RORγt、ROR α、STAT3的表达而调控IL-23/IL-17炎症轴起到治疗AIT的作用.
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载脂蛋白AⅤ研究
载脂蛋白AⅤ对血浆三酰甘油浓度起重要调节作用.内皮细胞过氧化物酶体增生物活化受体α(PPARα)和核转录因子(RORα)可影响载脂蛋白AⅤ的转录.载脂蛋白AⅤ通过对极低密度脂蛋白(VLDL)和脂蛋白脂肪酶(LPL)活性的调节参与血脂的转运与代谢,降低血浆中三酰甘油的浓度.
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小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的核受体Rev-erbα及Rorα
背景:孤儿核受体Rev-erbα及Rorα已经被广泛证实与糖代谢、脂肪代谢等密切相关,但与骨代谢的关系尚不明确.目的:探讨孤儿核受体Rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用.方法:采用全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察和成脂、成骨诱导分化,采用油红O染色,茜素红染色对其分化能力进行鉴定.在骨髓间充质干细胞成骨诱导分化第0,7，14天,采用Real Time PCR及Western Blot分别检测孤儿核受体Rev-erbα及Rorα的mRNA及蛋白表达变化.结果与结论:①骨髓间充质干细胞形态以梭形为主,呈典型的漩涡样生长.油红O染色及茜素红染色呈阳性;②在成骨诱导的第0,7,14天,Rev-erbα的mRNA及蛋白表达均呈下降趋势,而Rorα的mRNA及蛋白表达均呈上升趋势,提示Rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中可能发挥了一定的作用.
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RORα高表达对二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响
背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗肿瘤的作用.该研究在DADS上调人胃癌MGC803细胞RORα的基础上,观察DADS与RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响.方法:相差显微镜观察MGC803细胞形态的影响.采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT相关分子表达.裸鼠实验检测对移植瘤生长的影响.结果:相差显微镜显示,DADS组与RORα高表达组细胞大小较MGC803细胞一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞少见,异型性降低.RORα高表达加DADS后,上述改变更为明显.Western blot检测结果显示,DADS组与RORα高表达组Snail蛋白表达明显下调,DADS+RORα高表达组更明显(P<0.05).RT-PCR与Western blot检测显示,DADS与RORα高表达可明显下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA与蛋白表达,DADS+RORα高表达组更为显著(P<0.05).免疫荧光显示,DADS组与RORα高表达组细胞Snail与Vimentin表达较对照组明显减弱和E-cadherin表达显著增强,DADS+RORα高表达组更为显著,与Western blot结果一致.裸鼠实验显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),并且,移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率分别为15.07%、26.55%与49.27%(P<0.05).免疫组织化学检测结果显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组较对照组的Ki-67、CD34与Vimentin表达均明显降低,E-cadherin表达明显增强.结论:RORα高表达可增强DADS体内外抑制人胃癌细胞EMT的作用.
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RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化
目的 在构建RORα高表达人胃癌MGC803细胞的基础上,观察RORd高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响.方法 采用相差显微镜观察RORα高表达对MGC803细胞形态的影响.RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化法检测EMT相关分子表达.裸鼠实验检测RORα高表达对移植瘤生长的影响.结果 相差显微镜显示,RORα高表达细胞较MGC803细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,异型性降低.Western blot检测结果显示,RORα高表达可明显下调MGC803细胞Snail蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR与Western blot检测结果显示,RORα高表达可下调vimen-tin和上调E-cadherin mRNA与蛋白表达.免疫荧光检测结果显示,RORα高表达组细胞Snail与vimentin阳性信号表达较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强.RORα高表达组移植瘤较对照组生长减慢(P＜0.05),移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率为26.55％ (P ＜0.05).RORα高表达组较对照组癌细胞异型性降低.RORα高表达组较对照组的Ki-67、CD34与vim-entin阳性表达均明显降低,而E-cadherin阳性表达明显增强.结论 RORα高表达可体内外抑制人胃癌细胞EMT.
关键词： 胃肿瘤 RORα 人胃癌MGC803细胞 上皮-间质转化 -
胃癌中RORα蛋白的表达及临床病理意义
目的 观察维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related Orphan Receptor α,RORα)蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据.方法 应用组织芯片技术及免疫组化SP法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα的表达,研究RORα与胃癌发生、发展的关系.结果 RORα蛋白在胃癌组织中表达下调,正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性率分别为83.36%(19/22),56.25%(27/48)和24.44%(22/90),3者相比差异有显著性(P＜0.05).高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中,RORα阳性率分别为45.00%(9/20)、27.59%(8/29)、14.29%(3/21)、11.11%(1/9)和9.05%(1/11).高分化腺癌RORα阳性率高于低分化腺癌(P＜0.05).结论 RORα蛋白下调与胃癌的发生、发展相关,且可能与胃癌的分化程度有关.
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二烯丙基二硫上调RORα抑制人胃癌细胞Wnt/β-catenin通路靶基因
目的 观察DADS上调RORα对人胃癌MGC803细胞Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达的影响.方法 RT-PCR、Western blot与免疫共沉淀检测Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达.荧光素酶报告基因检测c-Myc基因启动子活性.结果 RT-PCR 与Western blot显示,DADS处理后各组RORα mRNA与蛋白表达上调(P<0.05),而沉默RORα较对照组明显下调(P<0.05).DADS处理后各组Wnt1 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05).沉默RORα较对照组Wnt1 mRNA与蛋白明显上调(P<0.05).DADS处理前后各组β-catenin mRNA与蛋白表达差异无显著性(P>0.05).免疫共沉淀显示,DADS处理组RORα与β-catenin结合明显增加,而沉默组与β-catenin结合明显减少(P<0.05).DADS可明显下调核内β-catenin与p-β-catenin(P<0.05),而沉默RORα可明显上调β-catenin与p-β-catenin(P<0.05).同时,DADS可明显下调TCF-4表达(P<0.05),而沉默RORα可明显上调TCF-4(P<0.05).DADS可明显下调Axin、c-Myc、c-Jun mRNA与蛋白表达(P<0.05),而沉默RORα作用相反(P<0.05).荧光素酶报告基因检测显示,DADS处理后,各组c-Myc启动子活性明显低于处理前(P<0.05).沉默组c-Myc启动子活性明显高于对照组(P<0.05).结论 DADS可上调RORα抑制Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达.
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RORα与REV-ERBα在人胃癌组织表达情况及其临床意义
目的 研究维甲酸相关孤儿受体(RORα)与孤儿核受体(REV-ERBα)在人正常胃组织和胃癌组织中的表达情况、相关性及其临床病理意义.方法 收集50例不同临床病理分期的胃癌患者的石蜡切片,运用免疫组织化学染色技术检测RORα与REV-ERBα在人正常胃组织及不同临床病理分期胃癌组织中的表达,同时Western blot研究RORα与 REV-ERBa在人正常胃组织及不同TMN分期人胃癌组织中的表达情况.结果 免疫组织化学染色结果显示,RORα与 REV-ERBα在人胃癌组织中表达明显降低,同时RORα与 REV-ERBα的表达水平与胃癌患者TMN分期(P =0.013、 0. 010)及有无淋巴结转移(P=0.001、0. 002)密切相关,与患者年龄、性别及肿瘤大小无相关性.McNemar检验显示 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中的表达呈正相关性(Kappa =0. 377, P =0. 007). 同时 Western blot 结果显示 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达明显下降,且与 TMN分期有显著相关性(P<0.05).结论 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达降低与人胃癌组织的TMN分期及有无淋巴结转移有密切关联,并且RORα与REV-ERBα可能在人胃癌组织中存在协同表达及调控,从而影响胃癌的发生与发展.
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RORα高表达对人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响
目的 观察RORα高表达对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响.方法 构建高表达RORα人胃癌MGC803细胞.Real-time PCR或RT-PCR和Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3 mRNA和蛋白表达.MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验检测RORα高表达对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响.结果 RORα高表达MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达显著上调.在48、72与96 h,RORα高表达细胞的增殖活性明显低于对照组和空载体组(P＜0.05).RORα高表达G2/M期细胞明显高于对照组和空载体组(P＜0.05).高表达组细胞的迁移距离较对照组与空载体组明显减少(P＜0.05).高表达组穿膜细胞数较对照组与空载体组明显减少(P＜0.05).RORα高表达可明显下调MMP-9和上调TIMP3mRNA与蛋白.结论 成功构建RORα高表达MGC803细胞,RORα高表达可抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,将细胞阻滞于G2/M期,其机制可能与下调MMP-9和上调T1MP3有关.
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孤核受体RORα的研究进展
孤核受体RORα作为核受体超家族成员,广泛分布于机体各组织,近年来国外学者对结构、功能做了大量研究,不断发现其通过对目的基因转录调控,在许多重要生理活动发挥重要的调节功能,在对抗心血管疾病、慢性炎症、免疫功能不全、骨代谢障碍、肿瘤等一些病理过程中发挥重要作用.
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DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭
目的研究二烯丙基二硫( DADS)是否通过上调维甲酸相关孤核受体α( RORα)表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭。方法实验组分为6组,对照组,空载体组, RORα干扰组( miR-RORα),DADS组,空载体联合DADS组,miR-RORα联合DADS组。 Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3蛋白表达。 MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验分别检测细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭的改变。结果 DADS处理细胞24 h后,与对照组和空载体组比较,DADS上调RORα和TIMP3、下调MMP-9蛋白表达。干扰组较对照组与空载体组RORα表达明显下调。与DADS处理组比较,干扰RORα表达上调MMP-9、下调TIMP3蛋白表达。 MTT实验显示,DADS抑制MGC803细胞增殖,而干扰RORα表达促进增殖。流式细胞术显示,DADS诱导G2/M期阻滞,下调RORα削弱其作用。迁移实验显示,DADS处理组迁移距离明显减少。 RORα干扰组迁移距离明显高于对照组和空载体组。侵袭实验显示,DADS处理组较对照组和空载体组穿膜细胞明显减少。干扰组穿膜细胞明显多于对照组和空载体组。干扰RORα表达降低DADS对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 DADS上调TIMP3表达,下调MMP-9表达,抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,其作用机制与上调RORα表达有关。
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二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响
目的 研究二烯丙基二硫( DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)蛋白表达变化情况.方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达；半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24h后,细胞形态学发生明显改变；RORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调；半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P ＜0.01或P＜0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DAD5处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和( 0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα蛋白表达有关.
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沉默RORα体内外对人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响
目的 在构建RORα沉默人胃癌MGC803细胞的基础上,探讨沉默RORα对MGC803细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 4周龄雄性稞鼠,分为MGC803细胞组与RORα沉默组,每组5只.相差显微镜观察RORα沉默MGC803细胞形态的改变.RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测EMT相关分子表达.裸鼠实验检测沉默RORα对移植瘤生长的影响.结果 相差显微镜显示,沉默RORα细胞大小与形状差异更明显,纤维母细胞样长梭形细胞增多,异型性更为显著.Western blot显示,沉默RORα可明显上调MGC803细胞Snail蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR与Western blot检测显示,沉默RORα可上调Snail与Vimentin和下调E-cadherin mRNA与蛋白表达.免疫荧光显示,RORα沉默细胞Snail与Vimentin阳性表达较MGC803细胞组明显增强,而E-cadherin阳性表达显著减弱.裸鼠移植瘤实验显示,R0Rα沉默纽移植瘤校对照组生长加快(P＜0.05),RORα沉默组移植瘤体重较对照组增加14.12％ (P＜0.05).RORα沉默组移植瘤组织的Ki-67、CD34与Vimentin阳性表达较MGC803细胞组明显增加,而E-cadherin阳性表达明显降低.结论 沉默RORα可体内外促进人胃癌MGC803细胞EMT.
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胃癌患者外周血nuocytes相关因子的检测及其免疫病理意义
目的 检测转录因子维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptor α,RORα)、细胞表面受体T1/ST2和IL-17RB以及IL-5和IL-13等细胞因子的表达水平;了解胃癌患者外周血中nuocytes细胞的极化状态,探讨其与胃癌发生发展的关系.方法 常规Ficoll-泛影葡胺密度梯度离心法分离外周血单个核细胞；实时荧光定量PCR检测30例胃癌患者PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA表达水平.结果 胃癌患者外周血PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5 mRNA表达水平明显高于健康对照组,而IL-13的表达水平则明显低于健康对照组.相关性分析结果表明,胃癌患者RORα mRNA水平与IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA水平呈正相关.结论 胃癌患者机体存在着nuocytes极化状态,可能是构成胃癌患者Th1/Th2细胞平衡失调的基础,也与MDSC、M2巨噬细胞参与的免疫抑制微环境有着密切的关系.
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RORα基因rs782931、rs11639084和rs7172342位点多态性与四川汉族人群精神分裂症的关联性研究
目的 探讨RORα基因单核苷酸多态性与四川汉族人群精神分裂症(schizophrenia,SCZ)发病风险的关联性.方法 采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术,对143例四川汉族SCZ患者(病例组)和284例正常人群(正常对照组)进行RORα基因3个SNPs位点(rs11639084、rs782931和rs7172342)的基因分型试验.结果 与正常对照组相比,病例组rs11639084位点CT基因型频率和rs782931位点GG基因型频率比较,差异有统计学意义(rs11639084 CTvsTT:95％CI=2.31～6.63;rs782931GGvsAA:95％CI=0.01～0.56).未发现rs7172342与SCZ发病间存在关联.结论 RORα基因多态性可能与SCZ的发病相关,但该结论有待多中心、大样本试验进一步证实.
