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醉酒对大鼠重型颅脑创伤后水通道蛋白-4表达的影响
目的 观察醉酒对大鼠重型颅脑创伤后脑组织水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠70只,随机分为假手术(SO组)、颅脑创伤(TBI组)、乙醇预处理(ETH组).ETH组给予白酒3 g/kg灌胃.除SO组外,其余两组采用自由落体打击法制作颅脑创伤模型.分别于伤后不同时间点,采用干湿重法检测脑组织含水量,应用免疫组织化学法检测AQP4表达.结果 与TBI组相比,ETH组脑组织含水量及AQP4表达水平显著升高(P＜0.05),且通过相关性分析发现,大鼠脑损伤后脑组织AQP4表达水平与脑水肿呈正相关(r=0.684,P=0.001).结论 醉酒加重颅脑创伤后脑水肿与其升高AQP4表达有关.
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电针对脑缺血再灌注大鼠水通道蛋白-4的调节作用
目的:探讨电针、脑水肿和水通道蛋白-4(AQP4)之间的变化关系.方法:选用健康SD雄性大鼠,阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO),制作缺血性脑水肿模型,分为正常对照组、模型组和电针处理组,电针处理组电针人中、百会,0.8-1.0mA,电针30分钟.用神经功能缺损评分、免疫组化、western blot和RT-PCR分别观察大鼠神经功能缺损程度、AQP4蛋白和mRNA在脑组织中表达变化.结果:MCAO 12 h后,AQP4蛋白和mRNA的表达开始上升,随着梗塞时间的延长,AQP4表达逐渐增加,在72h均达到高峰.而电针组能够明显减轻大鼠神经功能缺损程度,降低AQP4蛋白和mRNA的表达.结论:电针可减轻脑缺血后脑水肿导致的神经功能缺损程度,促进神经功能恢复.电针的这种保护作用可能与AQP4表达下调有一定的关系.
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补阳还五汤对实验性脑缺血大鼠水通道蛋白-4表达的影响
目的:观察补阳还五汤对大鼠脑缺血后AQP-4表达和患肢恢复功能的影响.方法:100只SD大鼠分为损伤组和中药组,均手术致脑缺血.中药组术后即给予补阳还五汤口服液灌胃;损伤组给予等量蒸馏水灌胃.术后1、3、7、14及21天分别对大鼠进行BBB评分和斜板实验检查患肢功能,然后处死,应用免疫组织化学技术检测脑组织AQP-4的表达.结果:脑缺血后第1天,两组受损伤脑灰质、白质中可见到AQP-4的表达明显增加;第3天时达到高峰,损伤组更明显(P<0.05);第7、14及21天,中药组AOP-4表达的减少几乎与神经功能的改善平行,与损伤组比较差异有非常显著性(P<0.01).结论:补阳还五汤可能通过抑制脑缺血后AQP-4表达,消除脑水肿,减轻脑损伤,从而使残存脑组织保存并促进肢体功能恢复.
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电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠水通道蛋白-4的调节作用
目的:探讨电针、脑水肿和水通道蛋白-4(AQP4)之间的变化关系.方法:选用健康SD雄性大鼠,阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO),制作缺血性脑水肿模型.动物分为正常对照组、模型组和电针处理组,每组大鼠36只.电针处理组电针"水沟""百会"穴,0.8-1.0 mA,疏密波,电针30 min.用CV染色法测定脑水肿肿胀率,用IgG免疫组化法测定脑组织中的IgG来反映血脑屏障(BBB)的通透性,采用免疫组化和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别观察AQP4蛋白和mRNA在脑组织中表达的变化.结果:MCAO 12 h后,模型组脑水肿所引起的缺血侧脑半球开始肿胀,IgG开始外渗,AQP4蛋白和mRNA的表达开始上升,随着梗塞时间的延长,肿胀和外渗逐渐加重,AQP4的表达进一步增多,在72 h均达到高峰.而电针能够明显减轻脑水肿所引起的缺血侧脑半球的肿胀,减少IgG外渗,降低AQP4蛋白和mRNA的表达.结论:电针可减轻脑缺血后脑水肿肿胀率,同时改善BBB的损伤程度.电针的这种保护作用可能与AQP4表达下调有一定的关系.
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通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠相关微小RNA调控机制的研究
目的:观察通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠相关微小RNA(microRNA,miRNAs)、水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP 4)表达的影响,探讨通督调神针灸预处理脑保护的作用机制.方法:Wistar大鼠随机选取10只作为空白组,其余120只分为电针预处理组、艾灸预处理组、阿司匹林预处理组及模型组各30只.采用Longa线栓法制备脑缺血再灌注模型.电针和艾灸预处理组取“百会”“风府”“大椎”穴.电针预处理组进行电针治疗,艾灸预处理组用清艾条悬灸治疗,阿司匹林预处理组用阿司匹林10 mg/kg灌胃治疗,治疗7d后各组造模,并于再灌注24 h后,运用实时荧光PCR和Western blot法分别检测皮质区相关miRNAs、AQP 4的表达.结果:与空白组相比,模型组miRNA 290、miRNA 494相对表达量均明显降低(P＜0.01);与模型组相比,各预处理组miRNA 290、miRNA 494相对表达量均显著提高(P＜0.01);与阿司匹林预处理组相比,电针预处理组和艾灸预处理组miRNA 290、miRNA 494相对表达量均显著提高(P＜0.01);与艾灸预处理组相比,电针预处理组相对表达量显著提高(P＜0.05).与空白组相比,模型组AQP 4相对表达量显著提高(P＜0.01);与模型组相比,各预处理组AQP 4相对表达量均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);与阿司匹林预处理组相比,电针预处理组和艾灸预处理组AQP 4相对表达量均显著降低(P＜0.01,P＜0.05);与艾灸预处理组相比,电针预处理组相对表达量降低更明显(P＜0.05).结论:通督调神针灸预处理是预防脑梗死的有效方法,通督调神针灸预处理脑保护机制之一可能是通过提高miRNA 290、miRNA 494的表达,降低AQP 4相对表达量,诱导脑缺血耐受,减轻脑水肿实现的.
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大鼠脑缺血/再灌注后AQP4的表达与脑水肿的关系
目的:探讨在大鼠脑缺血/再灌注脑水肿中水通道蛋白-4(AQP4)表达水平的动态变化与脑含水量之间的关系.方法:50只SD大鼠,随机分为假手术组和6,12,24,48 h脑缺血/再灌注模型组,Western blot法测定AQP4的表达,干湿重法测定脑含水量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑含水量和AQP4的表达水平随着时间的推移不断增加,均在24 h时达到高峰；12～24 h时间段脑含水量显著增加(P＜0.01),以及AQP4表达水平升高,48 h时两者均稍有下降.而健侧脑含水量和APQ4的表达水平各时间点之间差异不显著.采用Spearman相关性分析结果显示,脑含水量和AQP4表达水平相关性显著(P＜0.05).结论:大鼠脑缺血/再灌注后脑含水量和AQP4表达水平变化趋势基本一致,两者呈时相正相关性.
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水通道蛋白-4在脑转移瘤表达及其中医研究进展
脑转移瘤是常见的颅内肿瘤,其发生不仅代表恶性程度高,往往也是治疗失败、预后差的主要因素.水通道蛋白-4作为一类具有高选择性特异性蛋白家族成员,与脑转移瘤的发生发展密切相关.传统中医将脑转移瘤的病机归结为风、痰、毒、瘀等方面,治则以醒脑开窍、活血化瘀、化湿利水为主.近年来,以AQP4为靶点的抗瘤中药已成为研究热点并逐渐受到关注.因此,对AQP4作用机制的具体探讨,有望为脑转移瘤的中医治疗提供新途径.
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活血、利水中药对脑出血大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α、核转录因子-κB及水通道蛋白-4表达的影响
目的 探讨活血、利水中药对脑出血急性期大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-al-pha,TNF-α)、核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)及水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响及其治疗脑水肿的可能机制.方法 自体股动脉血注入脑尾状核建立大鼠脑出血模型,SD雄性大鼠随机分为假手术组(42只)、模型组(42只)、活血组(42只)和利水组(42只),其中活血组予活血中药复方(每毫升含生药量分别为:大黄0.2 g、水蛭0.02 g、三七0.3 g)10mL/kg灌胃,1次/日；利水组予利水中药复方(每毫升含生药量分别为:茯苓0.2 g、泽泻0.2g、石菖蒲0.2 g)10 mL/kg灌胃,1次/日.模型组和假手术组予生理盐水4.0mL/kg灌胃,1次/日.1、3、5d取材,免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR法检测大鼠脑组织TNF-α、NF-κB p65和AQP-4 mRNA和蛋白的表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠各时间点脑组织TNF-α、NF-κBp65和AQP-4蛋白及mRNA表达明显增加(P ＜0.01,P＜0.05)；与模型组比较,活血组和利水组各时间点AQP-4和NF-α表达显著降低(P＜0.05)；活血组NF-κB p65表达亦明显低于模型组(P＜0.05),利水组NF-κB p65表达差异无统计学意义(P＞0.05)；与模型组比较,活血组和利水组各时间点脑组织含水量均有不同程度的降低,活血组与利水组间比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 活血、利水中药均可抑制炎性因子TNF-α的释放,下调AQP-4的表达,减轻大鼠血肿周围脑水肿,但作用强度和作用环节有差异.
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大黄改善急性脑出血大鼠血脑屏障损伤的水通道蛋白-4机理研究
目的探讨大黄改善急性脑出血血脑屏障损伤的水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP-4)机理.方法采用立体定向注射自体无肝素动脉血制作大鼠脑出血模型,对神经功能缺损、脑含水量进行观察,伊文思蓝染色观察血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier tight junction,BBBTJ)的损害,电镜观察不同时间点BBB和神经星形胶质细胞足突改变,用RT-PCR和Western blot检测AQP-4 mRNA和蛋白表达.结果脑出血后,与模型组比较,大黄可明显减轻脑水肿;伊文思蓝染色结果显示血脑屏障从12h开始明显损害;电镜结果提示出血后12 h血脑屏障紧密连接被破坏,而且神经星形胶质细胞足突肿胀;大黄可有效使血脑屏障紧密连接的破坏减少、神经星形胶质细胞足突肿胀减轻.脑出血模型组大鼠AQP-4表达出现增高(P＜0.05);脑出血后1天AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表达增强,第3天达峰值,其后逐渐有所下降.大黄可抑制AQP-4基因转录和翻译.结论大黄可通过改善血脑屏障损伤减轻脑水肿;大黄改善血脑屏障破坏的作用可能是通过抑制AQP-4基因转录和翻译实现的.
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通过测定78例视神经脊髓炎患者血清中NMO-IgG水平判断其临床诊断价值
目的 通过测定视神经脊髓炎(NMO)患者血清中的NMO-IgG水平,判断NMO-IgG对视神经脊髓炎的临床诊断价值.方法 选取本院2006年9月至2014年6月NMO患者78例,长节段横惯性脊髓炎(LETM)患者32例,多发性硬化(MS)患者54例,以及40名健康志愿者,收集其血清,采用ELISA法检测血清NMO-IgG水平.结果 NMO组NMO-IgG阳性率为61.5％ (48/78),LETM组阳性率为43.8％ (14/32),MS组阳性率为9.3％(5/54),对照组阳性率为0(0/40).NMO组与LETM组的血清NMO-IgG阳性率均显著高于MS组(P＜0.05),支持两者都属于视神经脊髓炎疾病谱(NMOSD).其中男性患者NMO-IgG阳性率为14.5％ (9/62),女性患者NMO-IgG阳性率为56.9％ (58/102),女性患者的NMO-IgG阳性率显著高于男性患者.单相病程组血清NMO-IgG阳性率为26.3％ (5/19),多相病程组血清NMO-IgG阳性率为72.9％ (43/59),多相病程与NMO-IgG呈正相关,单相病程与NMO-IgG呈负相关.血清NMO-IgG诊断NMO的灵敏度为61.5％ (48/78),以MS为对照,其诊断NMO的特异度为90.7％ (49/54),以MS同对照组一起为对照,其诊断特异度为94.7％ (89/94).结论 利用血清NMO-IgG检测来诊断NMO具有较高的敏感性及很强的特异性,可以有效的鉴别NMO与MS,从而有助于病人的确诊及临床合理用药,应该在临床上推广使用.
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兔脑缺血再灌注磁共振弥散加权成像与水通道蛋白-4表达的相关性
目的 分析兔脑急性缺血组织磁共振弥散成像(DWI)的影像学表现及其与水通道蛋白-4(AQP-4)表达的关系,探讨DWI成像的病理生理基础. 方法 58只新西兰大白兔随机分为永久缺血组(A组)和再灌注组(B组),线栓法制作大脑中动脉缺血和缺血1h后再灌注模型.其中A组(A1～A6)分为缺血1h、3h、6h、12h、24h、48h组;B组(B1～B6)又分为再灌注0h、2h、5h、11h、23h和47h组.每组分别于各自时间点进行MRI弥散成像,分别测量表观弥散系数(ADC),并计算相对表观弥散系数(rADC)值.显微镜下观察并记录双侧大脑皮层和纹状体区AQP-4阳性细胞数.结果 缺血1h时DWI高信号区内平均ADC值95%可信区间上限为58.75×10-5 mm2/s.缺血组DWI高信号区面积随时间延长逐渐增大,rADC值呈先下降后上升的趋势.再灌注组rADC值于再灌注2h趋于正常化,DWI高信号区面积减小;5h rADC值低;以后rADC值逐渐升高,DWI高信号区面积逐渐扩大.缺血组AQP-4阳性细胞数6h内呈下降趋势,6h后缓慢上升,与rADC值的变化关系密切(r＝0.943,P=0.005);再灌注5h内AQP-4变化平稳,之后也出现上升趋势. 结论 AQP-4表达水平的高低受缺血程度和持续时间的影响,永久缺血组rADC值的变化趋势与AQP-4表达水平的高低有明显的相关性.
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水通道蛋白-4表达变化与急性高眼压视网膜损伤的相关性研究
目的 观察不同高眼压作用下,水通道蛋白-4(AQP4)及其mRNA在大鼠视网膜内的表达变化.以探讨AQP4与眼压异常性疾病的关系.方法 采用前房加压灌注法.分别制作75cm、125cm和150cm水柱不同压力急性高眼压大鼠模型;通过HE和尼氏染色了解视网膜病理改变和神经节细胞数目变化;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、原位杂交以及RT-PCR等技术检测不同高眼压作用下,AQP4及其mRNA在视网膜内的表达变化.结果 与对照组相比,各实验组大鼠视网膜晕不同程度水肿样改变,其内层厚度增加,神经节细胞数目明显减少;AQP4及其mRNA在视网膜内的表达明显增强,其表达上调水平与眼压升高程度呈正相关,并与视网膜内层厚度增加以及节细胞数目减少相关(P<0.01).结论 急性高眼压作用下,大鼠视网膜内AQP4及其mRNA的表达明显增强,呈压力依赖性,其异常高表达可能与急性高眼压的病理损伤过程以及眼内水、电解质代谢失衡有关.
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水通道蛋白-4在大鼠大脑中的定位研究
目的观察水通道蛋白-4(AQP4)在大脑实质和室管膜、脉络丛、后区、神经垂体、腺垂体和松果体中的分布,为研究脑组织中水分子运输和平衡以及内分泌腺体的分泌和调节机制提供形态学基础. 方法免疫组织化学漂洗法(LAB-SA、BCIP/NBT法). 结果 AQP4主要分布于软脑膜、脑室和导水管系统的室管膜、脉络丛等与脑脊液(CSF)直接接触的组织中及脑实质的血管周围;在脑实质内可见阳性细胞体;在海马的锥体细胞层、齿状回的颗粒细胞层和多形细胞层细胞呈阳性;在脑室周围器官如神经垂体、后区(AP)及松果体和腺垂体(包括中间部)各种腺细胞膜表面均可见AQP4的阳性标记. 结论 AQP4不仅与水分子的转运及平衡调节有关、同时与电解质代谢和内分泌活动有关,还可能与下丘脑的神经内分泌活动有关.
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水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达
目的 观察水通道蛋白-2(AQP-2)和水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用.方法 免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达.结果 AQP-2在胚龄17 d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内.体视学测量发现,从胚龄17 d开始表达到生后1 d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化.AQP-4在胚龄14 d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1 d达到大水平,以后随着日龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量.AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜.结论 推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要.
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C57BL/6小鼠EAE模型的建立及Foxp3、CD4~+CD25~+调节性T细胞检测
目的 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOG~(Igd))为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并检测CD4~+CD25~+T细胞、Foxp3 mRNA等指标的表达.方法 采用分子克隆技术诱导表达MOG~(Igd)-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)、生理盐水免疫小鼠分别作为阴性、阳性及正常对照组.双盲法连续早晚观察30 d,通过评估动物的临床神经功能、组织病理(HE染色和Kluver-Barrera法髓鞘染色、免疫组化法)情况,评价模型的质量.流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞;real-time PCR检测Foxp3 mRNA的相对表达水平,并分析两者相关性.结果 MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异均无统计学意义(P>0.05).TrxA组及正常对照组无一动物发病.模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累.免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P<0.05);MOG组CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组和正常对照组(P<0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P<0.01).MOG组标准化Foxp3 mRNA的表达量为2.26±1.97,GPSCH组为1.44±1.20,均低于TrxA组的8.58±3.34(P<0.01);但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义(P>0.05).相关性分析显示,模型组小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞与Foxp3 mRNA表达水平间存在相关性(r=0.849,P<0.05).结论 用MOG~(Igd)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究多发性硬化的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础.
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依达拉奉对心肺复苏后脑水通道蛋白-4表达的影响
目的 探讨大鼠心肺复苏后脑水通道蛋白-4(AQP4)表达与脑水肿动态变化的关系,评价依达拉奉的干预作用.方法 72只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(A组,6只),假手术组(B组,6只),复苏组(C组,按ROSC后1 h,6 h、12 h、24 h、72 h各时点分5亚组,各6只),依达拉奉处理组(D组,亚组同C组),复苏即刻予以依达拉奉干预.分别测定脑组织含水量,免疫组化法检测其AQP4蛋白表达,行神经功能缺损评分(neurodeficit score,NDS)及脑组织病理形态学观察.结果 C组大鼠ROSC后脑组织含水量呈上升趋势,24 h达高峰,各时点均高于B组(P<0.01).AQP4表达呈现与脑含水量同样趋势改变,积分光密度(iOD)、显色面积比(△S)增加(P<0.01),相关性分析表明iOD(r=0.858,P<0.01)、AS(r=0.870,P<0.01)与脑组织含水量呈正相关.与C组相比,依达拉奉干预处理后脑组织含水量明显下降(P<0.05);AQP4蛋白iOD、△S显著下调(P<0.01);病理学损伤程度减轻,NDS评分显著提高(P<0.05).结论 大鼠心肺复苏后脑AQP4表达上调,与脑水肿变化正相关,AQP4可能参与心肺复苏后脑水肿形成.依达拉奉可抑制AQP4表达,减轻大鼠心肺复苏后脑水肿,具有脑保护作用
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小剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后炎症反应及水肿的影响
目的：观察小剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复、水肿及巨噬细胞反应的影响，并探讨其作用机制。方法56只Sprague-Dawley大鼠分为3组。假手术组(n=8)暴露硬脊膜后，不予打击，直接缝合；模型组(n=24)采用Allen打击法建立大鼠脊髓损伤(SCI)模型，不给予任何治疗；超短波组(n=24)在SCI后第2天开始给予受损部位小剂量超短波(大输出功率40 W，实际输出功率11.58 W)治疗，7 min/次，1次/d，至取材前。于造模后1周、2周、3周、4周采用BBB评分评定大鼠的后肢运动功能，免疫组织化学染色检测水通道蛋白-4(AQP-4)、巨噬细胞-小胶质细胞胞质抗原(ED-1)的表达。结果治疗后，BBB评分逐渐增加；术后1~4周，与模型组相比，超短波组评分明显增加(t>3.368, P<0.01)。术后1周起，模型组、超短波组的AQP-4及ED-1阳性表达较假手术组增加，且呈下降趋势；与模型组相比，超短波组各时间点的AQP-4及ED-1表达均减少(t>3.156, t>4.466, P<0.05)。结论脊髓损伤后超短波治疗可以减轻损伤处继发性水肿，减少炎症细胞的活化及浸润，促进神经功能恢复。
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脊髓损伤后水通道蛋白-4在脊髓白质中的表达
目的：探讨脊髓挫伤(SCC)后水通道蛋白-4(AQP-4)在脊髓白质中的表达变化。方法成年健康雌性Sprague-Dawley大鼠88只，随机分为假手术组(Sham)和SCC组。Allen打击法建立SCC模型，BBB评分评价大鼠运动功能变化情况；免疫组织化学染色检测AQP-4在脊髓白质中不同时间点的定位情况；Q-PCR检测AQP-4 mRNA含量变化。结果 SCC组BBB评分明显降低，损伤后7 d和14 d明显升高(t>5.061, P<0.01)。Q-PCR结果显示，术后1 d和3 d AQP-4 mRNA表达显著下降(t>50.44, P<0.001)，损伤后5 d，AQP-4 mRNA表达水平较3 d明显上升(t=-3.968, P=0.001)，直至28 d仍明显高于3 d(t=-4.227, P=0.001)。免疫组织化学染色结果显示，AQP-4主要定位于脊髓白质的血管内皮细胞和神经胶质细胞的突起。结论 SCC后，AQP-4可能在脊髓损伤后不同时期发挥不同的病理生理作用。
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亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用
目的探讨亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注引起血脑屏障破坏的保护作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和亚甲基蓝组(n=6)。用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉栓塞1 h再灌注模型。亚甲基蓝组于再灌注即刻及再灌注2 h分别静脉给予亚甲基蓝3 mg/kg、1.5 mg/kg；模型组给予相同体积的生理盐水；假手术组手术操作与模型组相同，不插入线栓，不静脉注射药物。再灌注47 h后HE染色观察大鼠脑缺血周边皮层组织学结构，白蛋白免疫组化染色法检测血脑屏障通透性的变化，免疫组化染色法和免疫荧光双标染色法检测胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和水通道蛋白-4(AQP-4)的表达。结果 HE染色显示，模型组缺血周边大脑皮层的细胞和血管形态不完整，而亚甲基蓝组病理变化减轻；模型组白蛋白、GFAP和AQP-4表达均明显高于假手术组(P<0.01)，亚甲基蓝组白蛋白、GFAP、AQP-4表达均低于模型组(P<0.05)。免疫荧光双标染色显示，AQP-4与GFAP在星形胶质细胞上共定位。结论亚甲基蓝可能是通过减轻胶质细胞增生及下调AQP-4表达来改善局灶性脑缺血再灌注损伤引起的血脑屏障破坏。
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大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响
目的 探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制.方法 将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只.采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复.术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA和蛋白表达.结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P<0.05),E组佳(P<0.05).术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P<0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P<0.05),E组低于D组(P<0.05);B组EB含量高于A组(P<0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P<0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 mRNA和蛋白表达均低于B组(P<0.05),E组低(P<0.05).结论 大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关.
