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益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究
目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1.缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加，与正常对照组比较具有显著差异(P<0.01)；2.益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增高，组间比较呈显著差异(P<0.01)。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达，益气通络方含药血清可增强其表达，可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞，发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。
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通冠胶囊对冠心病PCI术患者外周血内皮祖细胞数量的影响
目的 探讨通冠胶囊对冠心病患者经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)术后外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量的影响.方法 选择2010年3-10月广东省中医院ICU和心脏中心收治的冠心病行PCI术患者60例,按照随机数字法分为通冠胶囊治疗组(治疗组)和安慰剂对照组(对照组),每组30例.手术当天开始服用通冠胶囊或安慰剂3粒,每天3次,连续3个月.检测PCI术前及术后1个月患者外周血CD34 及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)阳性细胞数目.于PCI术前和术后3个月行超声心动图检查,测定左室舒张末容积(LVEDV)、左室收缩末容积(LVESV)、每搏输出量(SV)、每分输出量(CO)、左室射血分数(LVEF),评价两组患者"壁运动指数"(wall motion score index,WMSI).结果 术前两组患者EPCs数量、LVEF、WMSI及SV比较,差异无统计学意义(P >0.05),两组术后1个月较术前外周血中EPCs数量均有所上升(P <0.05),且治疗组明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);术后3个月两组患者LVEF升高(P <0.05,P <0.01),治疗组WMSI降低(P <0.05),SV 升高(P <0.05),治疗组LVEF及WMSI改善程度优于对照组(P <0.05).结论通冠胶囊可以上调冠心病患者PCI术后外周血EPCs的数量,改善患者的心功能.
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新正天丸对偏头痛患者血小板膜粘附分子表达的影响
目的:研究新正天丸对偏头痛患者血小板膜粘附分子表达的影响.方法:将68例患者分为两组,治疗组(35例)口服新正天丸,对照组(33例)口服氟桂嗪胶囊,疗程均为30天.应用流式细胞仪检测患者治疗前后全血血小板膜粘附分子GPⅡb/Ⅲa(CD41)和P-选择素(CD62P),并与健康人作对照.结果:治疗组疗效(显效率和总有效率)优于对照组(P＜0.05和P＜0.01).偏头痛患者发作期、间隙期血小板膜粘附分子表达均较健康人为高(P＜0.01),而新正天丸能明显降低其表达(P＜0.01).结论:新正天丸可降低血小板膜粘附分子的表达,并能抑制血小板的活化.
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中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响
目的:研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法:运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡.结果:雄性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡加速,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡率.结论:中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡,可能阻抑了过量核酸抗原释放,从而抑制了B细胞的异常增生活化,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的.
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CD38在慢性B淋巴细胞白血病细胞上表达的临床意义
为探讨CD38在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)细胞上表达的临床意义,用流式细胞仪检测了78例慢性B淋巴细胞白血病细胞上CD38的表达.结果显示,CD38的表达与患者年龄、骨髓中白血病细胞比例、外周血白细胞数目、血红蛋白含量、血小板数和脾肿大无关(P＞0.05),而与Binet 分期(C期)、外周血白血病细胞比例、淋巴结肿大和肝肿大有关(P值分别为0.017、0.037、0.039、0.038),并有明显缩短的生存期(P=0.032).结论:CD38高表达是B-CLL患者预后差的一个可靠指标.
关键词： 慢性B淋巴细胞白血病 CD38 流式细胞仪 预后 -
FCM检测标记细胞凋亡方法的建立及应用
采用流式细胞仪(FCM)测定BXSB狼疮鼠发病组、正常对照组和中药治疗组的脾脏组织中CD4+、CD19+细胞凋亡的水平,结果显示,BXSB狼疮鼠发病组CD4+、CD19+细胞凋亡水平显著高于正常对照组和中药治疗组(P＜0.05).此法需样本量少,操作简便,结果可靠,可在临床及科研中推广使用.
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自配COULTER流式细胞仪试剂稳质期的探讨
探讨自配美国Coulter 流式细胞仪试剂的稳质期,以便更好地进行推广应用.将自配全血溶解试剂、鞘液及清洗液保存1个月、2个月、6个月、1年,分别从其外观、理化性质、准确度、精密度和相关性等方面与进口原装试剂进行系统的比较,确定自配试剂的稳质期.自配试剂保存1年,其外观无变化,理化性质与原装试剂基本一致;连续10天测定质控品淋巴细胞亚群表达率,其CV值均小于5%;分别检测20例样本中T细胞亚群表达率,与原装试剂比较,两者结果差异均无统计学意义(P＞0.05),并且两者结果呈高度正相关,r均大于0.930.这表明自配全血溶解试剂、鞘液及清洗液试剂的稳质期至少在一年.
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自配试剂在COULTER流式细胞仪检测NK细胞和B细胞中的应用
探讨美国COULTER流式细胞仪试剂国产化问题.将自配全血溶解试剂、鞘液及清洗液的理化性质、精密度、准确度、稳定性与原装试剂进行对比分析.分析结果显示自配试剂与原装试剂理化性质一致,采用自配试剂测定20份病人标本NK细胞和B细胞并与原装试剂对比,差异无统计学意义(P＞0.05),两者呈高度正相关r＞0.95.自配试剂稳定性好,放置1年后,与原装试剂分别测定15份标本,结果差异无统计学意义(P＞0.05),两者呈高度正相关r＞0.91,说明自配试剂完全可以代替美国COULTER流式细胞仪原装进口试剂进行NK细胞和B细胞的检测.
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细胞表面抗原的定量测定方法
介绍了用流式细胞仪定量测定细胞表面抗原的方法, 测定了淋巴细胞表面CD4分子的数量. 该法操作简单, 结果可靠.
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多色流式细胞术对40例急性白血病免疫分型的研究
白血病的形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学分型已成为现代白血病诊断所必需,其中流式细胞术免疫分型已成为急性白血病(AL)诊断和分型的重要依据,具有重要的临床诊断意义.我们采用流式细胞仪四色荧光标记技术,CD45/SSC双参数散点图设门方法,可全面地与特异地检测出白血病细胞抗原的分布,使白血病免疫分型的结果更为准确和客观[1].
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流式细胞术检测SLE患者甲强龙冲击前、后淋巴细胞亚群的变化
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,累及多器官系统,临床表现复杂,病程迁延反复,已证实SLE患者存在免疫功能紊乱.应用大剂量甲基强的松龙(甲强龙)冲击治疗SLE获得较理想效果[1].本文应用流式细胞仪(FCM)观察SLE患者使用甲强龙冲击前及冲击后第3天、第10天外周血淋巴细胞表型,了解其T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞的变化.探讨冲击疗法对SLE患者免疫细胞及免疫功能的影响.
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高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响
有文献报道高温诱导细胞凋亡有两个独特的模型: 慢死亡和快死亡.慢死亡是指细胞受热后,在失去再生能力之前能够维持生理活动几天.快死亡是指细胞受热后几天内发生的死亡,其特征是细胞脱离其培养表面.关于快死亡的机制可能与热诱导细胞凋亡有关[1].目前随着对凋亡机制研究的深入,已从细胞质膜转向线粒体.线粒体是促进能量转换、参与细胞凋亡的重要细胞器.由于细胞膜上各种生物泵的作用,使细胞膜内外维持着不同梯度的离子浓度,产生了线粒体膜电位.几乎所有诱导剂引起的各种类型的细胞凋亡均出现线粒体膜电位下降,提示线粒体膜电位下降为早期凋亡[2] .本文建立一种高温诱导ECV-304细胞凋亡的方法,并应用流式细胞仪采用AV-FITC/ PI 双染法和荧光探针JC-1 法,对高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响进行分析.
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口服左旋精氨酸对血小板胞浆内钙离子浓度的影响
为观察口服左旋精氨酸对正常人血小板胞浆内钙离子浓度的影响并探讨其作用机制,选择了10名至少2周内未服用任何药物,不吸烟、喝酒的健康男性志愿者.受试者服药前做1次检测,然后口服左旋精氨酸4天,前3天每天服20克,分3次服用,第4天服用1次,服7克,3小时后抽血测试.结果表明,服用左旋精氨酸后,血小板胞浆内cGMP浓度(1.91±0.20pmol/109血小板vs 2.14±0.34pmol/109血小板,P＜0.05)、血清一氧化氮代谢产物NO-3浓度(32.66±14.31μmol/L vs 49.02±9.75μmol/L,P＜0.05)升高.ADP诱导的血小板[Ca2+]i升高幅度(A/B值0.45±0.14 vs 0.32±0.09, P＜0.01)降低.研究结果表明,口服左旋精氨酸可以通过促进血管内皮细胞和血小板合成NO来降低血小板胞浆内钙离子浓度的升高,从而抑制正常人血小板的活化.
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不同年龄、性别的健康成年人21项淋巴细胞亚群分析
建立健康成年人外周血21项淋巴细胞亚群正常参考值,并分析不同年龄、性别健康成年人淋巴细胞亚群之间的差异.用三标荧光抗体对102例健康成年人外周血进行标记,流式细胞仪检测并分析结果,SPSS 10.0软件进行统计学处理.结果显示:21～89岁健康成年人外周血中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比值、NK、NKT、CD19+、CD29+、CD25+、CD4+CD29+、CD4+CD25+、HLA-DR+、CD3+HLA-DR+、CD3+HLA-DR-、45RO+、45RA+、CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD28+、CD8+CD28+和CD8+CD28- 细胞百分比的正常参考范围分别为68.59±9.06、38.82±7.11、25.78±7.81、1.82±1.15、7.01±5.02、13.58±8.49、10.77±4.30、59.13±9.40、9.78±3.47、17.86±5.39、8.26±3.12、12.80±4.21、3.48±10.81、66.44±9.93、56.75±13.15、44.43±12.07、16.14±7.86、25.40±6.70、54.45±9.14、14.77±5.07和15.68±7.21;NK、CD29+、45RO+、CD4+CD45RA+、CD28+、CD8+CD28-在不同性别间的差异具有统计学意义(P＜0.05),而CD3+、CD3+CD8+、NK、CD29+、CD4+CD29+、CD4+CD25+、CD3+HLA-DR-、45RO+、45RA+、CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD28+和CD8+CD28+在不同年龄间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:本研究初步建立了健康成年人外周血21项淋巴细胞亚群的正常参考值,能更全面地反映机体细胞免疫的状况,可为临床实践提供更有效的帮助.
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流式细胞仪进行干细胞绝对计数的方法
干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗技术为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。本文介绍利用流式细胞仪进行干细胞绝对计数的原理、方法及意义。 1 流式细胞仪简介 流式细胞仪是对悬浮状态的细胞逐个计数并记录其有关参数的细胞分析仪器，因其测量速度快，在很短时间内可以分析大量细胞，并能测出多个参数，在临床上有广泛的应用。流式细胞仪能测量细胞的五个参数：前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC)、绿色荧光(FL-1)、黄色荧光(FL-2)和红色荧光(FL-3)。FSC和SSC是细胞对激发光的散射信号，分别反映了细胞的大小和细胞的粒度：细胞越大，胞内颗粒越多，则FSC和SSC越强。例如在外周血中，根据细胞大小及胞内所含颗粒性物质的多少，可区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。粒细胞有较大的核或较多的颗粒，细胞直径也比淋巴细胞大，因而其FSC和SSC均比淋巴细胞强。
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缩胆囊素和谷氨酸对大鼠大脑皮质细胞内游离钙浓度的影响
为探讨胆囊收缩素八肽(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)及中毒剂量谷氨酸(glutamate,Glu)对大鼠大脑皮质细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响及相互关系,以10-10、10-8、10-6mol/L等浓度CCK-8和1mmol/L Glu分别或共同作用于大鼠大脑皮质细胞,以流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测[Ca2+]i,并探讨其变化机制.①10-10 mol/L CCK-8可增加[Ca2+]i(P<0.05),10-8、10-6mol/L CCK-8无此作用;②10-10mol/L CCK-8与1mmol/L Glu共同作用可增加[Ca2+]i(P<0.05),而10-6mol/L CCK-8不引起[Ca2+]i增加;③当抑制细胞内钙库释放时,10-10mol/L CCK-8加1mmol/L Glu不能增加[ Ca2+]i.结果提示CCK-8生理浓度时可增加[Ca2+]i,而高浓度时无此作用;CCK-8在增加[Ca2+]i的同时有拮抗Glu引起的细胞外钙内流作用.
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干预离子通道联合密度梯度离心富集胎儿有核红细胞
目的 探讨干预膜表面K-CI同向转运体(KCC)离子通道联合密度梯度离心对富集脐血中胎儿有核红细胞(NRBC)的效果.方法 用KCC特异激活剂尿素(Urea)干预细胞膜,建立大限度缩小细胞体积的干预条件；用佳干预条件干预脐血后进行不同密度介质下离心富集NRBC,用流式细胞仪计数NRBC的富集效果.结果 比较传统1.077淋巴细胞分离液离心后的单个核细胞层流式细胞仪计数NRBC为8.6％,干预脐血后用1.065密度介质离心后下层NRBC达69.9％,未干预组中用1.099密度介质离心的单个核细胞层NRBC达55.9％,提高了富集量.结论 尿素干预联合密度梯度离心能有效提高NRBC的富集率.
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三氧化二砷诱导肺癌上皮细胞株凋亡
采用碘化丙啶和FITC-TUNEL标记法,经流式细胞仪和透射电镜观察As2O3对肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用和形态学变化.结果发现1及2.5μmol/L As2O3对肺癌A549细胞株24h的凋亡诱导率为22.80%及30.15%,48h的凋亡诱导率为41.75%及60.04%,72h的凋亡诱导率为56.38%及73.30%,均分别高于相应时间点的5-FU的作用;透射电镜下见细胞体积缩小,核膜完整,核染色质聚集于核膜边缘的典型凋亡细胞.结果表明,As2O3能够诱导肺癌A549细胞株的凋亡.
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脑穿刺伤灶愈合过程中大胶质细胞的变化
作者采用免疫组化、免疫荧光染色、流式细胞计数等方法研究脑穿刺损伤灶愈合过程中伤灶组织中大胶质细胞的形态和比例的变化及其规律，阐明大胶质细胞在脑损伤后胶质瘢痕增生中的作用。结果发现，脑穿刺损伤后, 大量的胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色阳性细胞聚集在伤灶周围，呈典型的反应性胶质化改变；流式细胞计数结果证实，GFAP阳性细胞比例显著增高，在伤后2w达高峰，为46%；半乳糖脑苷脂(GC)阳性细胞的形态与比例无明显变化。作者提出，星形胶质细胞是胶质瘢痕中增生的主要胶质细胞，少突胶质细胞在这个过程中，不是一种反应活跃的细胞成分。
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原代培养大鼠海马细胞随培养时间早期凋亡和死亡增加
神经细胞在原位组织已经完成分裂和分化,培养的神经元将不会分裂、增殖,其数目也会随着培养时间的延长而减少,但目前还没有见到对原代培养过程中神经细胞凋亡以及死亡情况的研究.利用Annexin Ⅴ-PI双染法可以将凋亡早期与凋亡晚期和死亡细胞区分开,本研究将分别收获第0、1、3、5、8、11及18d细胞进行Annexin Ⅴ-PI染色,利用流式细胞仪来研究在原代培养过程中神经元的早期凋亡和死亡.
