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利用BD CANTO II流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势
目的:探讨利用BD CANTO II流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势.方法:选取慢性淋巴细胞白血病患者(病例组)、健康人群(对照组)各20例用于模型建立,采用BD CANTO II流式细胞仪鉴别69例粒细胞增多的非急性白血病的患者反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势.结果:流式细胞仪检测鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的灵敏度、特异性分别为96.00％、95.45％.结论:BD CANTO II流式细胞仪可有效鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势.
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石蜡切片厚度对流式细胞仪分析细胞周期的影响
目的探讨石蜡组织制备单细胞悬液过程中,细胞碎片产生的原因,及其对流式细胞仪检测结果的影响.方法以小型猪的肠系膜淋巴结为实验对象,将淋巴结分别制成新鲜组织单细胞悬液和石蜡组织块;石蜡组织块切割成不同厚度的薄片,再制成单细胞悬液;流式细胞仪分别检测其DNA含量;采用MultiCycle for Windows 分析软件分析它们之间的差异.结果新鲜组织的G0/G1期、S期、G2/M期细胞所占比例、G0/G1峰的CV值及Debris值与石蜡组织之间存在差异;而不同厚度石蜡切片组织间制备的样本所测结果亦不相同.结论不同厚度石蜡切片组织制备的细胞悬液,对流式细胞仪检测细胞周期分析的结果有影响;以采用60μm厚的切片组织制备细胞悬液为佳.
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羟基磷灰石纳米粒子对细胞系Bel-7402细胞周期的影响
目的探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子对肝癌细胞系Bel-7402细胞周期的影响.方法通过化学合成法制备稳定单分散的HAP纳米粒子,应用透射电镜、电位粒度仪进行表征.采用体外细胞培养和流式细胞术测定HAP纳米粒子对人肝癌细胞系Bel-7402细胞周期的影响.结果稳定的HAP纳米粒子在体外使肝癌细胞增殖周期发生改变,G1期细胞数量明显增加,S期细胞减少.结论 HAP纳米粒子阻滞Bel-7402肝癌细胞于G1期,使DNA的合成受阻,终使癌细胞从G1期脱离细胞周期而死亡.
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SARS患者早期外周血T淋巴细胞亚群的变化
目的研究严重急性呼吸综合征患者早期外周血T淋巴细胞亚群的变化.方法采用流式细胞术与血细胞分析仪结合的双平台检测方法进行绝对计数,比较SARS患者、疑似患者和正常人外周血T淋巴细胞亚群.结果 SARS患者在病程早期外周血中淋巴细胞总数、CD3+、CD4+及CD8+T淋巴细胞,均较正常人明显下降,P＜0.05.而疑似组与正常对照组差异无显著性.结论 SARS患者在病程早期外周血淋巴细胞及各亚群均受到破坏,CD3+、CD4+及CD8+T淋巴细胞计数可以作为辅助诊断标准之一.
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应用流式细胞仪检测自身免疫性溶血性贫血的临床观察
目的 应用流式细胞仪进行自身免疫性溶血性贫血所发挥的检测价值.方法 选择我院在2016年3月～2017年7月确诊为自身免疫性溶血贫血患者26例作为研究组,并同期选择健康体检者26例作为对照组,对两组检测者均进行同样检测,将红细胞进行单克隆抗体标记,并采用流式细胞仪检测红细胞表面标记物的百分数.结果 对照组检测者红细胞表面仅有少量免疫标记物,研究组红细胞膜表面不同免疫成分标记物的数量显著多于对照组(P<0.05).结论 选择流式细胞仪检测技术来测定红细胞膜表面标记物不同免疫成分的百分比能够显著提升自身免疫性溶血性贫血的确诊率和鉴别率,具有特异性强、灵敏度高等特点,临床价值价值高,可推广.
关键词： 流式细胞仪 自身免疫性溶血性贫血 检测分析 -
流式细胞术在医学检验专业实习带教的体会
流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)是以激光为光源,集电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆技术为一体的的新型高科技仪器[1].流式细胞术(flow cytometry,FCM)是应用流式细胞仪,对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速(每秒可达1000～10000个)的定量分析和分选(纯度可达99％以上)的技术[2].近年来,随着流式细胞仪以及流式细胞技术的不断发展和完善,其在医学科学研究以及临床医学检验中的作用越来越重要.作为学校的教学医院,广西医科大学第一附属医院检验科承担着临床教学带教的重任.根据多年的临床带教积累的经验,对流式细胞术在医学检验专业实习带教体会以及碰到的问题加以总结概述.
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头孢美唑体外抗生素后效应期间大肠埃希菌膜通透性和膜电位变化研究
[目的]研究头孢美唑体外抗生素后效应(postantibiotic effect,PAE)期间E. coli ATCC25922的膜通透性和膜电位动态变化,以期深入探讨头孢美唑PAE形成机制.[方法]采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)技术与荧光探针碘化丙啶和DiBAC4(3)结合,检测低浓度(4MIC)和高浓度(128MIC)的头孢美唑体外PAE期间E.coli ATCC25922的膜通透性和膜电位动态变化特征.[结果]头孢美唑PAE期间E.coli膜电位及膜通透性与空白对照组比较显著增高,且高浓度(128MIC)组较低浓度(4MIC)组增高更明显.[结论]不同浓度的头孢美唑PAE期间E.coli呈现不同的膜通透性和膜电位变化,从而显示了不同浓度的头孢美唑PAE期间对E.coli具有不同的作用靶位.流式细胞仪是研究PAE机制的理想手段.
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135例SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化
[目的]研究重症急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome SARS)患者的外周血T淋巴细胞亚群的变化.[方法]采用三色流式细胞仪进行T细胞亚群绝对计数.[结果]135例SARS患者发病初期外周血CD+3、CD+4、CD+8细胞数分别为724.8±539.2个/μl、409.5±340.5个/μl和289.1±193.8个/μl,三者均明显低于健康对照组(P均＜0.01),重症患者比普通型患者下降的更明显.发病后2～3周,SARS患者外周血的CD+3、CD+4、CD+8细胞数逐渐上升,9例重症患者的CD+3、CD+4、CD+8细胞数到第4周仍明显低于正常水平,其中5例死亡.[结论]SARS患者外周血T淋巴细胞亚群绝对数明显的减少,存在明显的细胞免疫损伤.
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食管鳞癌组织CD44V6蛋白表达与临床病理的关系
[目的]探讨CD44V6蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义.[方法]用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别检测10例食管切缘粘膜组织及52例食管鳞癌组织的CD44V6蛋白表达.[结果]食管切缘粘膜组织CD44V6蛋白表达平均n值为0.82±0.21,均阴性表达;45例食管鳞癌组织CD44V6蛋白表达平均FI值为1.85±0.33,呈阳性表达,其中CD44V6蛋白阳性表达在肿瘤浸润深度3期之间、有无淋巴结转移两组之间差异均有显著性(P＜0.05),而在患者性别、肿瘤部位、病理类型及病理分级中差异均无显著性(P＞0.05).[结论]提示CD44V6蛋白表达检测对判断肿瘤生长转移状况及预后有一定重要意义.
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慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达的研究
[目的]探諧D4+CD25+调节性T细胞在慢性乙型肝炎发病中的作用.[方法]用流式细胞仪测定临床确诊的60例慢性乙型肝炎患者外周血中的CD4+CD25+调节性T细胞.[结果]e系阳性组CD4+CD25+调节性T细胞明显高于e系阴性组,e系阴性组明显高于正常对照组.[结论]慢性乙型肝炎患者存在免疫无能和免疫抑制特性,导致细胞免疫功能失调,提示CD4+CD25+调节性T细胞在慢性乙型肝炎的病程中起着重要作用.
关键词： CD4+CD25+调节性T细胞 慢性乙型肝炎 流式细胞仪 -
流式细胞仪检测中国人外周血淋巴细胞亚群正常值
[目的]建立健康成人外周血淋巴细胞亚群正常参考值.[方法] 用Coulter-Immunotech三标荧光抗体对345例健康成人外周血进行标记,Beckman-Coulter公司的 EPICS XL2型流式细胞仪检测并分析结果,SPSS 10.0软件进行统计学处理.[结果] 18～82岁健康成人的CD+3 细胞为69.53±6.47,CD+3CD+4 细胞为37.11±4.83,CD+3CD+8 细胞为26.32±4.23,CD-3CD+19 细胞为12.06±3.87,CD-3CD+(16+56) 细胞为16.92±5.75,CD+3CD+4 与CD+3CD+8 比值为1.44±0.24.年龄大于60岁组的NK细胞明显高于其他年龄组(P＜0.05),其他T、B淋巴细胞分群未见明显差异.[结论] 在相同地域、种族,可以建立健康成人外周血淋巴细胞亚群正常参考值.
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雷公藤红素体外抑制血管内皮细胞增殖的研究
背景与目的:恶性胶质瘤多具有丰富的间质血管,抗肿瘤血管形成是当前胶质瘤治疗研究的热点之一.本研究探讨雷公藤红素体外抑制血管内皮细胞增殖的机理.方法:通过生长曲线、细胞涂片、HE染色后光镜下观察、以及流式细胞仪研究雷公藤红素抑制血管内皮细胞株ECV304体外增殖的机理.结果:生长曲线表明,在体外雷公藤红素能够明显抑制内皮细胞株ECv304增殖.内皮细胞经流式细胞仪分析表明,低浓度时(5μg/ml、10μg/ml和15μg/ml)的雷公藤红素主要引起内皮细胞S期受阻,高浓度时(20μg/ml)同时还表现为细胞毒作用,引起内皮细胞坏死.结论:雷公藤红素通过阻碍DNA合成及细胞毒作用抑制内皮细胞的体外增殖.
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沙培林对鼠癌性腹水瘤细胞凋亡的实验研究
目的:研究沙培林对鼠癌性腹水作用的机制.方法:40只癌性腹水昆明鼠,随机分成4组,腹水内分别注射1ml生理盐水,0.1KE、0.5KE、1.OKE沙培林.8天后取腹水作流式细胞仪检测.结果:肿瘤细胞的凋亡百分数,治疗组与对照组差异显著(P＜0.01及P＜0.05).G2～M期细胞百分比高剂量组与对照组差异显著(P＜0.01).结论:沙培林对癌性腹水鼠有肯定的抑癌作用,可促进肿瘤细胞的凋亡,抑制其分化和增殖.
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急性脑梗死患者自体外周血造血干细胞水平及其与神经损伤的关系
目的:动态观察急性脑梗死患者自体造血干细胞水平的变化及其与神经损伤等因素间的关系.方法:选择急性脑梗死患者和年龄、性别组成具有均衡性的正常人各40名,分别在发病后或入组后第3d、7d、10d、14d取肝素抗凝血,采用Ficoll密度梯度离心法提取单个核细胞,流式细胞术检测CD34+CD38-细胞百分率;各采血点同时用适用于脑梗死急性期的Fugl-Meyer量表对患者的神经功能进行评定.结果:脑梗死发病后两周内随着病程的增加,CD34+CD38-细胞水平升高;神经功能损伤越严重,CD34+CD38-细胞水平越高,反之亦然;两性间及不同年龄患者CD34+CD38-细胞水平均无差别.结论:急性脑梗死患者外周血造血干细胞水平在病程两周内呈现逐渐升高的趋势;神经功能损害严重者的外周血造血干细胞水平较高.外周血造血干细胞很可能参与了脑梗死的病理生理过程.
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缺血再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡的动物实验研究
目的:探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时相心肌细胞凋亡和缺血再灌注的关系.方法:64只SD大鼠随机分为5组:对照组(假手术45min、105min、165min、225min,各时间点n=8),心肌缺血45min组(I45min,n=8),再灌注1h、2h、3h组(I/R1h、I/R2h、I/R3h各时间点n=8),分别在各时点处死大鼠取材.应用流式细胞术和透射电镜手段检测心肌细胞凋亡的改变.结果:流式细胞仪分析发现,I45min组细胞凋亡百分率与对照组相比无显著差异.I/R1h组、I/R2h组、I/3b组的细胞凋亡百分率与对照组相比均有显著差异(P＜0.01).透射电镜结果显示,对照组、I45min组、I/R1h组均未见到凋亡的心肌细胞,I/R2h组、I/R3h组心肌细胞显示出典型的凋亡特征.结论:心肌缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡,心肌细胞凋亡因缺血再灌注不同时相而变化;心肌细胞凋亡在大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用;大鼠心肌缺血后再灌注可促发或加速心肌细胞凋亡.
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FACSCount流式细胞仪常见故障及排除
在艾滋病的监测和防治过程中,T淋巴细胞亚群检测对于判断HIV感染者病情和评价疗效具有重要的临床价值,全国已有近千台各型流式细胞仪应用于此,BD FACSCount小流式细胞仪由于结构简单,操作方便,功能单一,性能稳定,重复性好,正被越来越多的医疗、疾控机构接受和应用.但流式细胞仪并非是完全自动化的仪器,准确的实验结果还需要精湛的人工技术配合,我们在使用美国Becton Dickinson(BD)公司生产的FACSCount流式细胞仪过程中,认为人为因素是影响FACSCount 流式细胞仪检测的主要原因.本文就应用过程中的常见故障、影响因素及解决办法做一简单阐述,以供同仁商榷.
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祁连圆柏对人胃癌细胞增殖抑制作用的影响
目的 研究祁连圆柏体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖和抑制的生物学效应.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法,检测不同浓度祁连圆柏醇提物作用不同时间后对SGC-7901细胞生长的影响,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡百分率,免疫组化法检测SGC-7901细胞Ki-67与P53表达.结果 祁连圆柏能抑制SGC-7901 细胞生长,诱导细胞凋亡,并具有明显量效关系.结论 祁连圆柏具有抑制SGC-7901细胞增殖并可通过诱导该细胞系凋亡发挥抗肿瘤作用.
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大肠息肉患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及研究
目的 通过分析大肠息肉患者外周血CD4+CD25+T细胞水平与患者细胞免疫状态,分析息肉对患者外周血CD4+CD25+T细胞水平变化的影响,评价大肠息肉患者机体细胞免疫功能状态及其临床意义.方法 随机选择我院大肠息肉患者57例,其中管状腺瘤伴轻、中度不典型增生者17例,管状绒毛状腺瘤伴轻、中度不典型增生者10例,炎性息肉患者30例,健康体检者25例,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+T细胞分布情况,分析息肉对患者外周血CD4+CD25+T细胞水平变化的影响,评价大肠息肉患者机体细胞免疫功能状态及其临床意义.结果 腺瘤伴不典型增生组CD4+CD25+调节性T细胞水平(18.34±4.1 8)％,明显高于炎性息肉组(10.34±4.03)％和健康体检患者外周血(9.53±5.26)％(P＜0.05),炎性息肉组和健康体检患者外周血差异无统计学意义(P＞0.05).腺瘤伴不典型增生组外周血T淋巴细胞中CD4/CD8比值、CD4+和NK细胞水平低于健康组(P＜0.05).结论 腺瘤伴不典型增生组患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平明显升高,可能息肉的恶变及复发与机体免疫功能有密切关系.
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应用流式细胞仪评价3种全瓷材料的细胞毒性研究
目的 :对掺杂3种口腔修复常用全瓷材料(二硅酸锂基的铸瓷 、氧化铝基 、氧化硅基)的生物安全性进行初步评价.方法 :采用流式细胞仪毒性评价方法,用3种口腔修复常用全瓷材料浸提液体外培养小鼠L929细胞;1d、3d、5 d,于倒置相差显微镜下观察细胞形态;用流式细胞仪测定不同全瓷材料浸提液中的小鼠L929细胞不同增殖周期时相的DNA百分含量,计算细胞的增殖指数百分比.结果 :铸瓷的增殖指数大,其次为氧化铝 、氧化锆.结论 :3种全瓷材料无细胞毒性,具备体内应用的生物安全基础.
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102例急性白血病流式细胞仪免疫分型结果分析
为了探讨急性白血病的免疫表型特征与诊断价值,各系相关抗体的敏感性和特异性,利用流式细胞仪进行三色免疫荧光标记技术检测白血病患者,根据抗体体积分系统进行分型.结果显示,三染色标记检测急性白血病患者中,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者除均表达淋系抗原外,同时伴髓系抗原(CD13、CD33)的表达,其中cCD79a敏感性和特异性均较高.急性髓细胞性白血病(AML)患者除表达髓系抗原外,同时伴淋系抗原(CD19、CD7)表达,其MPO、CD117中特异性较高.结论:流式细胞仪三色免疫荧光直接标记法进行白血病免疫分型能够确诊一些特殊类型的白血病,对于急性白血病的诊断治疗和预后判断均有帮助.
