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DNA含量测定在乳腺癌预后判断中的意义
目的 应用流式细胞仪(flow cytometry, FCM )回顾性分析预后差的早期乳腺癌及预后好的晚期乳腺癌患者的DNA含量特点,并探讨FCM对预后的应用价值,为临床选择治疗方法 提供参考.方法 将手术后常规治疗且10年内出现复发、转移甚至死亡的Ⅰ期乳腺癌11例以及术后10年内健在且淋巴结转移10枚以上的Ⅲ期乳腺癌16例分别作为实验组,再从同期患者中选取术后无病生存的Ⅰ期乳腺癌14例以及预后差且淋巴结转移10枚以上的Ⅲ期乳腺癌14例分别作为对照组,应用FCM对各组患者进行DNA含量检测,包括DNA指数(DNA index,DI)、S期分数(SPF)以及DNA倍体.分析比较Ⅰ期及Ⅲ期乳腺癌实验组与对照组DNA含量的特点,并对Ⅲ期乳腺癌患者淋巴结及结外软组织转移水平进行亚组分析.成组设计的计量资料比较采用t检验,多组间的比较采用单因素方差分析,小样本率的比较采用Fisher精确概率法.结果 (1) Ⅰ期乳腺癌实验组中异倍体出现率为6/11,二倍体出现率为5/11;Ⅰ期对照组异倍体出现率为0,二倍体出现率为14/14,两组间差异有统计学意义(P＝0.003 ).(2)分别比较Ⅰ期及Ⅲ期乳腺癌实验组与对照组的DI和SPF,差异均无统计学意义(P>0.050).(3)Ⅲ期乳腺癌实验组与对照组的DNA倍体间的差异也无统计学意义(P>0.050).(4)Ⅲ期乳腺癌患者第三水平淋巴结转移组二倍体含量高于第一、二水平组,第一、二水平组SPF值低于第三水平组,但组间差异均无统计学意义(P>0.050).(5)Ⅲ期乳腺癌患者软组织不同转移水平组间DNA倍体分布的差异无统计学意义(P>0.050).结论 应用FCM研究早期以及晚期乳腺癌肿瘤的生物学特性,进行DNA含量测定,对临床判断预后,选择治疗方法 有一定的指导意义.
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CacyBP编码基因对胃癌细胞多药耐药性形成的影响
目的探讨CacyBP在胃癌多药耐药机制中的作用.方法构建CacyBP正义核酸真核表达载体pcDNA3.1 /hCacyBP+,以脂质体将其导入胃癌药敏细胞SGC7901.以RT-PCR检测hCacyBP mRNA水平的变化;以MTT检测SGC7901及转染细胞对ADR的药物敏感性;以流式细胞仪(FCM)检测SGC7901及转染细胞内ADR的蓄积浓度及细胞周期.结果转染pcDNA3.1/hCacyBP+的SGC7901,其hCacyBP mRNA表达水平显著高于空载体转染及未转染之SGC7901,且细胞生存率亦有所增高.未转染之SGC7901及分别转染空载体或pcDNA3.1 /hCacyBP+之SGC7901细胞,平均ADR蓄积浓度分别为5.64,5.49和5.17.与未转染之SGC7901相比,转染pcDNA3.1/hCacyBP+和空载体的SGC7901细胞G1期减少,G2期及S期增高.结论 CacyBP在胃癌MDR机制中可能有一定作用.
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人脂肪间充质干细胞的分离培养及冻存前后生物学变化
目的 有效地分离并扩增人脂肪间充质干细胞(hADSCs),并观察冻存前后hADSCs的一般生物学特征.方法 采用Ⅰ型胶原酶消化的方法从抽脂手术废弃的脂肪组织中分离hADSCs,接种在人脂肪间充质干细胞完全培养基中培养.采用胰酶消化法传代扩增,取处于生长对数期的第3代细胞,以液氮冻存6个月.复苏后以台盼蓝染色检测细胞存活率,MTT法描绘细胞生长曲线；以流式细胞仪检测冻存前后细胞表面分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD31、HLA-DR的表达水平.结果 细胞大小均等,呈长梭形漩涡状生长.复苏后细胞存活率可达(91.25±3.02)％；冻存前后细胞生长曲线无明显差别,均呈“S”形；经过2～3 d潜伏期后进入增殖期,7d后进入平台期.冻存前CD44、CD105双阳性细胞占(99.850±0.001)％,CD29、CD73双阳性细胞占(92.600±0.028)％,CD31阳性细胞占(4.186±0.010)％,HLA-DR阳性细胞占(1.02±0.007)％；冻存后CD44、CD105双阳性细胞占(98.060±0.028)％,CD29、CD73双阳性细胞占(91.224士0.041)％,CD31阳性细胞占(3.832±0.009)％,HLA-DR阳性细胞占(1.514±0.006)％.冻存前后上述6种hADSCs表面分子表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 来源于人的脂肪间充质干细胞易于体外培养扩增和冻存,复苏后存活率高,一般生物学特征无明显变化,可用作组织工程的种子细胞.
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重症肌无力患者周围血中CD4+T淋巴细胞亚群的研究
目的研究CD4+ T淋巴细胞的功能亚群在重症肌无力(myasthenia gravis, MG)发病中的作用.方法采用免荧光双标记技术和流式细胞仪对39例MG患者和18例健康对照者周围血中CD4+ T淋巴细胞的两个亚群(CD4+CD45RA+、CD4+CD45RA-)的百分率进行测定.结果 CD4+CD45RA+亚群的百分率在MG组和AChRAb阳性组明显低于对照组和AChRAb阴性组;而CD4+CD45RA-细胞的百分率在MG组和AChRAb阳性组显著高于对照组和AChRAb阴性组.结论表明CD4+T淋巴细胞的两个功能不同亚群在MG患者体内发生了异常改变,与AChRAb的产生有关.
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多发性硬化患者自然杀伤细胞表达及相关刺激因子研究
多发性硬化(MS)是以中枢神经系统(CNS)多灶性炎症性脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病.一些证据表明不仅与一些特异性细胞因子(CK)有关,且非特异性免疫如自然杀伤(NK)细胞也参与MS的免疫病理过程,尤其对被病毒感染细胞起直接杀伤作用.我们采用流式细胞仪(FACS)及酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测MS患者外周血(PB)中NK细胞表达及刺激前后白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ) 及肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌,探讨其在MS发病机制中的作用.
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重症肌无力患者外周血Bcl-2基因mRNA与蛋白的表达及其意义
重症肌无力(myasthenia grasis,MG)是一种重点累及神经-肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体(AChR)的自身免疫性疾病.近年来有研究表明,细胞凋亡缺陷与MG的发生、发展有着密切的关系,我们采用逆转录-PCR(RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA在MG患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达,流式细胞仪测定T、B淋巴细胞Bcl-2蛋白表达,旨在探讨其与MG发病的关系.
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湖北成人CD4、CD8T淋巴细胞计数正常值调查及CD4与总淋巴细胞数的相关性分析
目的了解中国湖北成人CD4抗原阳性的T淋巴细胞(CD4)、CD8抗原阳性的T淋巴细胞(CD8)、CD3抗原阳性的T淋巴细胞(CD3)及CD4/CD8、CD4/CD3正常值参考范围,以及总淋巴细胞计数(TLC)与CD4之间的关系.方法选取120例15～60岁健康人不同年龄组的血标本,用Becton Dickinson公司生产的FACSCount自动化仪检测CD4、CD8、CD3、CD4/CD8、CD4/CD3,计算相关数据的正常值参考范围,并将其与国外数据作比较.用美国雅培CEILDYN(R)3700血液全自动分析仪作全血总淋巴细胞计数.结果CD4值为681±21/mm3(-x±Sd,以下相同),CD8值为510±26/mm3,CD3值为1 299±38/mm3,CD4/CD8值为1.43±0.06,CD4/CD3值为0.54±0.10,TLC值为1 752±48/mm3.CD4、CD8、CD3计数及CD4/CD8、CD4/CD3在不同性别、年龄组之间差别无显著性.CD4与TLC之间有显著的直线正相关性,r=0.647,回归方程为√CD4=0.422√TLC+8.444.结论CD4、CD3、CD8等正常值在不同性别、年龄间相近.中国湖北成人CD4值与中国上海成人之间无差别,但显著低于国外值.在无条件检测CD4计数的情况下,可用TLC推测CD4的值.中国现有的治疗标准需要进一步探讨.
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应用流式细胞术和原位杂交技术检测HIV-1感染者T淋巴细胞内病毒的初步研究
目的建立检测艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血单核细胞内HIV-1的方法,并初步探讨其临床应用价值.方法应用流式细胞仪和荧光原位杂交半定量检测记忆性T细胞(CD+4CD45RO+)内的HIV-1,同时测定HIV-1感染者外周血CD+4T淋巴细胞绝对数和血浆病毒载量.结果7例病人中6例有阳性结果,波动范围0～6.29%.细胞内病毒含量的结果与血浆病毒载量完全一致.结论荧光原位杂交检测细胞内HIV-1的方法敏感性高,重复性好,检测速度快,可以成为评价艾滋病病程进展和抗病毒治疗的重要方法.
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两种机型的流式细胞仪测定CD4T细胞计数的比较研究
目的多种流式细胞仪机型应用于艾滋病防治工作中,比较不同机型间的免疫数据乃是当前迫切需要解决的问题.方法应用BD FACS Calibur和Beckman Coulter XL两种主流机型流式细胞仪,对阜阳市现场采集的183份标本[正常人41份,艾滋病病毒(HIV)阳性感染者142份]进行平行检测,观察上述两种机型对检测同一标本CD4绝对计数的影响.结果 BD和XL两种机型的绝对计数结果比较显示,正常人CD4绝对计数在两种机型间的差异范围:≤10%的占57%,而＞10%占43%;检测142份HIV阳性标本,CD4绝对计数差异≤10%的占84%;而差异＞10%的占16%.在正常人标本组两机型数据间相关系数r＝0.97;HIV阳性标本组数据间相关系数r＝0.98,回归方程X系数均接近1.统计学检验显示,两种机型检测数据无显著性差异(P＞0.05).结论两种机型间数据高度相关且数值相近,所测定的HIV感染者CD4细胞绝对计数可以互用.
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Beckman和BD两种机型流式细胞仪检测CD+4 T淋巴细胞数比较研究
目的 比较两种机型(Beckman Coulter FC500和BD FAC-S Calibur)流式细胞仪、两种"设门"方法平行检测艾滋病病毒(HIV)感染者CD+4 T淋巴细胞绝对数. 方法 用两种机型流式细胞仪、前向与侧向散射光和CD45两种"设门"方法,分3批次平行检测48份HIV感染者血标本. 结果 两种机型流式细胞仪、两种"设门"方法检测CD+4 T淋巴细胞计数结果差异无统计学意义(P＞0.05),并存在高度的相关性(P＜0.05),相关系数分别为0.941、0.966和0.970. 结论 两种机型、两种"设门"方法检测CD+4 T淋巴细胞计数结果接近,且高度相关,可以互为参考.
关键词： CD+4 T淋巴细胞计数 艾滋病病毒 流式细胞仪 -
三种流式细胞仪CD4+T淋巴细胞数检测结果比较分析
目的 比较三种机型(Beckman Coulter FC500、DxFLEX和BD FASCCalibur)流式细胞仪,平行检测CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)的绝对数,并进行相关性、一致性和方差分析.方法 用三种机型流式细胞仪平行检测75份艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人(简称HIV/AIDS病人)的血标本,使用SPSS 17.0和Excel软件进行分析.结果 共检测75例HIV/AIDS病人.三种机型流式细胞仪检测CD4细胞计数结果的Pearson相关系数分别为:0.969、0.958和0.975.对CD4细胞数的检测结果的平均偏差,FASCCalibur和FC500为-80个/μL,95％可信区间(CI)内上下限分别为44个/μ L和-204个/μ L;FASCCalibur和DxFLEX为-77个/μ L,95％CI内上下限分别为54个/μL和-208个/μL;FC500和DxFLEX为3个/μL,95％ CI内上下限分别为79个/μ L和-72个/μL.将CD4细胞计数结果按＞499、350～499、＜350个/μ L分层分析,三种机型流式细胞仪判定结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 三种机型流式细胞仪对CD4细胞检测结果有高度相关性,FC500和DxFLEX检测结果一致程度高.
关键词： CD4+T淋巴细胞计数 艾滋病病毒 流式细胞仪 -
湖北省健康青少年及成人外周血T淋巴细胞正常值研究
目的 建立湖北省健康青少年及成人外周血T淋巴细胞正常参考值.方法 用MultiTEST 4色荧光抗体对342例10～59岁湖北健康青少年及成人外周血进行标记,用BD公司FACSCalibur流式细胞仪检测并分析结果,SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果 湖北10～59岁健康青少年及成人外周血CD+3、CD+4CD+3和CD+8CD+3绝对数及CD+4/CD+8比值均值分别为(1 427.94±481.93)/mm3,(865.73±289.97)/mm3,(556.64±249.70)/mm3,1.72±0.65;CD+3、CD+4CD+3和CD+8CD+3百分率分别为(67.88±8.56)%,(41.40±6.53)%,(26.48±7.15)%.T淋巴细胞绝对数在不同性别间差异无统计学意义,但CD+3和CD+4CD+3百分率差异有统计学意义.10～18岁青少年T淋巴细胞正常值与19～59岁成人的相比较有统计学意义.结论 初步建立了湖北省健康青少年及成人外周血T淋巴细胞正常参考值.应分别建立青少年和成人的T淋巴细胞正常参考值及抗病毒治疗标准,为艾滋病防治工作提供参考.
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采用流式细胞仪检测艾滋病病毒1型膜蛋白小鼠免疫后IFN-γ的表达
目的通过流式细胞技术检测艾滋病病毒1型(HIV-1)Gp120膜蛋白免疫小鼠后的IFN-γ的表达.方法构建表达HIV-1gp120基因的复制型重组痘苗病毒.与DNA疫苗联合免疫小鼠,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达.结果获得表达中国HIV-1流行株gp120基因的重组痘苗病毒rVVgp120、rWM304,能正确表达Gp120蛋白,与DNA疫苗p120-VRC、pM304-VRC联合免疫小鼠后,用流式细胞仪检测到小鼠脾淋巴细胞能特异性的表达IFN-γ.结论用流式细胞检测技术成功检测到免疫小鼠的脾淋巴细胞特异性的表达IFN-γ,用此方法可方便快捷地检测小鼠的细胞免疫效果.
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广西壮族自治区健康成年人T淋巴细胞亚群分类绝对计数及CD4/CD8比值调查
目的初步建立广西壮族自治区健康人群外周静脉血CD3、CD4、CD8T淋巴细胞绝对数值和CD4/CD8比值的参考范围.方法用流式细胞仪(FACSCalibur,FCS)、三色免疫荧光试剂和绝对计数管(TnTEST/TruCOUNT),检测110名广西健康成年人(16～56岁)静脉全血CD3、CD4、CD8T淋巴细胞绝对数值和CD4/CD8比值,并观察T淋巴细胞亚群分类计数在性别、年龄和民族上的差别.结果 110名健康成年人检测结果平均值:CD3为524±541,CD4为823±305,CD8为601±248,CD4/CD8为1.49±0.53.进一步分析发现,CD4和CD4/CD8在民族分布上(汉族79名、壮族31名)的差异有显著的统计学意义(P＜0.05).结论这次初步建立CD3、CD4、CD8T细胞绝对数值和CD4/CD8比值正常参考范围,对于指导广西的艾滋病诊断及治疗工作有重要意义.
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新乡市268例HIV/AIDS病人样本的流式细胞仪检测数据分析
目的 了解河南省艾滋病(AIDS)流式细胞仪实验室间、检测试剂间的能力差异.方法 在河南省和新乡市的两家流式细胞仪检测实验室,同时对268例艾滋病病毒(HIV)感染者/AIDS病人(简称HIV/AIDS病人)的血液样本分别进行T淋巴细胞亚群检测,对比分析各组T淋巴细胞亚群检测数据总体、实验室间、试剂间的差异.结果 检测结果总体比较显示,CD3、CD8、CD4、CD4/CD8各参数差异均无统计学意义(P＞0.05).实验室间检测能力比较发现,新乡市、河南省两个流式细胞仪实验室CD4+T淋巴细胞分别为432(267～623)个/μL、507(276～698)个/μL,差异有统计学意义(Z=2.21,P=0.03).而CD3、CD8及CD4/CD8其他T淋巴细胞亚群差异无统计学意义(P＞0.05).进口试剂与国产试剂检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 河南省各流式细胞仪实验室间检测能力存在部分差异,有待继续加强室间考评的频度和力度,及时发现存在的问题,进一步提高流式细胞仪检测质量.
关键词： 艾滋病病毒感染者/艾滋病病人 流式细胞仪 检测能力 -
CD4淋巴细胞计数在HIV感染中的地位和重要性
CD4淋巴细胞属于T细胞中的一种,现通常将免疫细胞分为免疫活性细胞、辅佐细胞和其它细胞三类,而免疫活性细胞又包括T细胞及B细胞两类.1983年起,经国际会议商定,以分化群(cluster of differentiation CD)抗原统一命名T细胞,目前已发现的CD抗原有100多个,CD4即为其中之一,目前多用流式细胞仪以CD4单克隆抗体进行检测.由于人类免疫缺陷病毒(HIV)主要攻击CD4细胞,而该细胞在免疫功能又有极重要的作用,所以CD4细胞的检测在HIV感染的各方面均有重要意义.
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T淋巴细胞亚群在梅毒血清固定患者外周血表达及对患者发病机制影响分析
目的:探讨功能不同的T淋巴细胞亚群在梅毒血清固定患者外周血中表达情况以及自然杀伤细胞与梅毒血清固定发病机制的相关性分析.方法:选取2013年12月至2016年12月在青岛市市立医院、青岛市胶州中心医院和山东大学齐鲁医院接受治疗的103例梅毒血清固定患者作为试验组,103例身体健康的人群作为对照组.使用流式细胞仪检测Ts、Tc、CD～ Th1、Th2、CD3、CD4～+、CD8～+淋巴细胞亚群在外周血中表达情况与自然杀伤细胞的水平,使用两样本的检验方法t检验判断试验组与对照组的表达水平是否有差异.结果:健康对照组与试验组中的梅毒血清固定患者外周血CD8～+、CCD3相比,两者的差异无统计学意义(P＞0.05);相比于健康对照组,自然杀伤细胞、Tc、Th1与CD4～+的表达水平在试验组中的梅毒血清固定患者较低,差异具有统计学意义(P＜0.05),Ts、Th2的表达水平在试验组中的梅毒血清固定患者较高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:梅毒血清固定患者和健康者的CD～ +T淋巴细胞与总T淋巴细胞在梅毒血清固定患者外周血中表达情况比较没有差异;梅毒血清固定患者细胞的Tc细胞、自然杀伤细胞的数量下降,导致其杀害清除病原体的功能下降.
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白癜风自体表皮移植联合光疗与调节性T细胞水平的关系
目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平在白癜风自体表皮移植联合光疗中的变化.方法 用流式细胞仪直接免疫荧光检测稳定期自体表皮移植联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗前后的20例白癜风患者及19例正常人外周血CD4+CD25+调节性T细胞转录因子Foxp3+的表达水平.结果 稳定期白癜风移植患者接受照光前的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞百分率比正常人稍低,差异无显著性(P>0.05),联合NB-UVB治疗后的患者CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞百分率较照光前明显增加,差异有显著性(P<0.05),与正常组相比差异无显著性(P>0.05).结论 CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能在白癜风光疗中起一定的作用,NB-UVB光疗可能通过增加调节性T细胞数量来促进移植后复色.
关键词： 调节性T细胞 翼状螺旋/叉头转录因子 流式细胞仪 窄谱中波紫外线 白癜风 -
未治和血清固定梅毒患者外周血淋巴细胞亚群的比较研究
目的检测未治和血清固定梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群及NK淋巴细胞,比较两组患者之间细胞免疫的差异.方法应用流式细胞仪检测40例未治梅毒患者和32例血清固定梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群及NK淋巴细胞,并与30例健康人群的检测结果相对照.结果未治梅毒患者CD3、CD4及NK淋巴细胞与对照组的检测结果相比差异无显著性(P＞0.05),而CD8淋巴细胞高于对照组(P＜0.001);血清固定梅毒患者组外周血CD3、CD4及CD8淋巴细胞均低于对照组的检测结果(P＜0.05),而NK淋巴细胞高于对照组(P＜0.001);两组患者外周血CD3、CD4、CD8及NK淋巴细胞相比,差异有显著性(P＜0.05).结论未治和血清固定梅毒患者存在细胞免疫不平衡和免疫抑制.
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高三尖杉酯碱和血栓通对人翼状胬肉成纤维细胞周期性变化的影响
目的:研究高三尖杉酯碱和血栓通对培养人翼状胬肉成纤维细胞周期性变化的影响.方法:对翼状胬肉组织中的成纤维细胞进行培养并传代为第3代～5代.用高三尖杉酯碱(10-5mol/L)及血栓通(1.5g/L)分别处理24h,对照组用生理盐水.应用PI DNA荧光染色及流式细胞仪检测和分析细胞周期的变化.结果:高三尖杉酯碱组和血栓通组G1群体细胞明显增多,S期细胞明显减少.与对照组比较差异均有明显意义(P＜0.01),其中高三尖杉酯碱更为明显.结论:高三尖杉酯碱和血栓通对翼状胬肉成纤维细胞的增生均有明显抑制作用,以高三尖杉酯碱更显著.其作用机理可能与抑制细胞DNA合成有关.
