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2002至2003年广州及周边地区1O32例登革热的临床特征
目的探讨自2002年5月至2003年11广州及周边地区暴发流行登革热(DF)的临床特征.方法对我院收治的1032例DF的临床资料进行回顾性分析,用细胞培养和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行登革病毒(DEV)分离和鉴定.结果主要l临床表现为发热(100%)、头痛(90.9%)、全身肌痛(68.4%)、骨痛(48.8%)、疲乏(79.3%)、皮疹(60.1%)、束臂试验阳性(45.3%);白细胞及血小板减少分别占63.3%和60.8%;丙氨酸转氨酶(ALT)升高(71.8%)、天门冬氨酸转氨酶(AST)升高(86.9%)、乳酸脱氢酶(LDH)升高(44.7%)、肌酸磷酸激酶(CK)升高(31.3%)和低钾血症(19.2%).临床分型仅2例为登革出血热(DHF),其余均为典型DF.从54份发病5 d内急性期患者的血清标本中分离病毒19份,经RT-PCR和基因测序证实为DEV-Ⅰ型感染;检测30份急性期血清DEV RNA阳性率为83.3%.结论近年广州地区流行的登革热为DEV-Ⅰ型所致.多数病例符合典型登革热的临床表现,肝损害较多,部分病例出现低钾血症,DHF发生率低.
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登革病毒2型广东省分离株的鉴定及NS1基因序列分析
目的明确广东省南海市1998年夏、秋季一批发热、出疹患者的诊断，并从基因水平分析其流行株的来源。方法收集疑似登革热(DF)患者血清52份，应用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)、病毒分离和间接免疫荧光技术分别进行了病原学和血清学检测；同时采用分子克隆技术将PCR扩增产物克隆到T载体，并进行序列测定。结果从25份发病早期患者血标本中分离病毒10份，经用单克隆抗体间接免疫荧光检测和RT-PCR检测证实为登革病毒2型感染。基因序列分析表明，1998年广东分离的登革2型病毒与ThNH-P28/93、C0166、16681、NGC、JAM、04、GD06/93和S1株核苷酸的同源性分别是：98％、97％、96％、96％、93％、92％、93％、91％。结论此次南海市登革热暴发流行为登革病毒2型感染所致。基因序列分析提示：1998年广东省南海市分离的登革病毒2型可能来源于泰国。
关键词： 登革热病毒 逆转录-聚合酶链反应 序列分析 DNA 序列同源性 -
固相放射免疫法检测疑似登革热早期患者血液中登革病毒抗原的研究
采用细胞培养和新生小白鼠分离登革热病毒需长时间才能得到肯定结果.为了快速检测患者早期血清中的登革病毒抗原,以应用于病原学诊断和流行病学调查,我们建立了固相放射免疫法.经过实践,证明具有较高的灵敏性和特异性,可以作为一种早期快速诊断和鉴定登革热病毒的方法.
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2型登革病毒临床分离株感染Balb/c小鼠后Th2类主要细胞因子的动态变化
目的 观察3种细胞因子在登革病毒(DEN)2两次感染过程中的整个消涨动态,以探讨DEN2临床分离株感染Balb/c小鼠后其血浆中白介素(IL)-2、IL-5及IL-6产生及相关关系.方法 用不同量DEN2临床分离株经皮下多点注射,建立Balb/c小鼠感染模型,并用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测感染后不同时间各组动物血浆中IL-2、IL-5及IL-6浓度,观察其产生动态.结果 各组实验动物初次感染B株后,各组IL-2、IL-5和IL-6水平较正常组均无明显增加;再次感染后均有显著增高.IL-2水平于再次感染后第4天(初次感染后第20天)达高峰,各组均值为(101 522.44士10 465.375)pg/ml,其后逐渐下降;再次感染后,Balb/c小鼠体内IL-5水平第1、2组于第1天(初次感染后第16天)达高峰,较正常组差异有统计学意义(x2=35.65,P＜0.05);再次感染后各组小鼠IL-6水平于第1～2天达高峰,其中第3组峰值高,且维持高水平时间较长,并与正常饲养对照比较差异有统计学意义(x2=32.86,P＜0.05).结论 DEN2临床分离株再次感染可使Balb/c小鼠产生IL-2、IL-5及IL-6增加,在再次感染阶段Th2应答发挥重要作用.
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登革2型病毒调控血管内皮细胞凝血及抗凝系统相关蛋白的表达
目的观察登革2型病毒(DV2)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和血栓调节蛋白(TM)的影响.方法应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第二、三代细胞进行试验.应用CCK-8测定DV2感染对细胞活性的影响;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内TF、TFPI和TM mRNA水平.结果 DV2对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染HUVEC后6 h,TFPI mRNA水平显著下调(P＜0.05),48 h恢复到正常水平.TF mRNA对照组不表达,DV2组各时相均有微量表达.而DV2组抗凝蛋白TM mRNA表达显著高于对照组(F=17.855,P=0.000),24 h达到峰值(P＜0.05),以后渐下降,72 h正常表达.结论 DV2急性下调TFPI mRNA和微量上调TF mRNA表达,启动外源性凝血途径,促进血液凝固;但DV2诱导高水平的TM可有效地增强抗凝活性,这有利于出血和血浆外渗.结果提示DV可诱导血管内皮细胞所调控的凝血系统失调,这可能在登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的出血机制中起重要作用.
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登革出血热/登革休克综合征患者凝血和纤溶系统失调
登革热病毒(DV)可引起登革热(DF)和登革出血热(DHF),DHF与DF的主要区别为凝血异常和血管渗透性升高而导致微血管的渗漏和出血,严重感染者可因血容量过度减少而发生登革热休克综合征(DSS).DV感染引起血浆渗漏和出血机制目前仍不清楚.
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登革病毒受体的研究进展
登革病毒(dengue virus, DEN virus)受体研究一直是登革病毒研究的热点之一,已提出的可能受体有蛋白质类、Fc受体类、乙酰硫酸肝素、与CD14相关的细胞表面结构(CD14-associated cell surface structure)等.近来,有关登革病毒在多种易感细胞上特异性受体成分的研究取得重大进展,已从多种登革病毒易感细胞株中分离出多个与登革病毒表面蛋白区域结合的受体组分:如热休克蛋白(heat-shock protein,HSP)、GRP78(Bip)、LAMR1、 DC-SIGN等.本文就登革病毒相关细胞受体的新研究进展作一综述.
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2013年广州市登革热流行病学特征及病毒 E 基因进化特征分析
目的：了解登革热流行病学特征，分析分离毒株 E 基因分子进化特征。方法采用描述性流行病学方法分析2013年广州市登革热疫情，采用酶联免疫法（ELISA）对登革热疑似病例血清进行抗体检测，阳性病例的急性期血清标本以 C6／36细胞进行病毒分离培养；采用 RT-PCR 扩增分离毒株的 E 基因，并对扩增产物进行序列分析，应用 MEGA 5.05进行进化特征分析。结果2013年广州市累计报告登革热确诊病例1270例，发病率为9.96／10万，以本地病例为主（占98.66％），输入病例以东南亚国家为主（占88.24％）。发病高峰为10－11月（占85.28％）。169份登革热病例急性期血清共分离48株登革病毒（Ⅰ型47株，Ⅱ型1株），与近年来广州、东南亚分离株高度同源。结论广州市登革热发病率呈上升趋势，暴发风险较大，须加强监测力度，强化蚊媒的控制，降低登革热传播风险。
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广州市自然界白纹伊蚊携带登革热病毒情况分析
目的 通过对广州地区登革热媒介白纹伊蚊进行携带登革热病毒情况的调查,从传播媒介的角度探索该地区登革热流行的来源和特点.方法 采集广州市各区新旧疫点附近的白纹伊蚊幼虫标本,饲养为成蚊后提取蚊虫总RNA,用登革热病毒特异引物经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行病毒核酸检测,并对阳性结果反应产物进行序列测定.结果 在荔湾区逢源街(2006年8月)、从化市邓村(2007年4月)和白云区云溪(2007年5月)各检出l宗登革热病毒核酸阳性蚊虫标本.其中荔湾区逢源街和从化邓村标本的RT-PCR产物经过序列测定证实为登革热病毒Ⅰ型.结论 广州地区登革热病毒可能在自然界白纹伊蚊种群中长期存在.
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登革热疫情蚊媒控制的策略与关键措施
登革热(俗称"断骨热")是一种由登革热病毒(dengue virug)引起的急性发热传染病,由蚊虫传播给人类.病原体为登革热病毒(可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型).全球每年约5 000万登革热病例,常见于热带和亚热带地域.近年登革热渐趋活跃,影响全球各地,在东南亚登革热已成为部分国家地方性流行病,我国有输入病例或局部暴发疫情出现.
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登革热防治的难点与误区及其对策
登革热是热带、亚热带地区常见的传染病.主要传播媒介为埃及伊蚊、白纹伊蚊.登革热通过带有登革热病毒的雌性伊蚊叮咬而传染给人类.
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88例登革热患者皮疹特点分析
目的：观察登革热患者的皮疹特点，探讨登革热皮疹发生的相关因素。方法对住院的登革热患者进行皮疹观察，搜集临床和实验室数据，进行统计分析。结果共纳入127例登革热患者，出现皮疹88例（69．29％），皮疹大多在发热后5~7 d出现，平均为（5．06±2．50）d；其中有37例（42．05％）在发热时即出现，有51例（57．95％）在体温消退后出现。有瘙痒感48例（54．55％），无瘙痒感39例（44．32％），1例自觉全身针刺感。皮疹类型多样，其中出现双手掌充血性红斑、斑疹的患者26例（29．55％），可能为该病的特征性皮疹；皮疹初发部位多在双下肢，具体消退顺序不详。皮疹的发生与血小板、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶3个指标的差异具有统计学意义。皮疹的类型及有无瘙痒与白细胞、中性粒细胞、血小板、ALT、AST之间的差异无统计学意义。结论登革热皮疹的表现多样，双手掌充血性红斑、斑疹可能为登革热较特异的皮疹。
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登革4型病毒Ban18-30减毒株的生物学特性研究
目的将登革4型病毒(DEN-4)Ban18原株及其减毒株Ban18-30株在vero细胞传代后进行生物学特性比较研究,以了解Ban18-30株的毒力和免疫原性及其是否为一株有希望的DEN-4减毒活疫苗候选株.方法Ban18原株及在原代地鼠肾细胞传代减毒的Ban18-30株在vero细胞中增殖,将两毒株进行中和实验,确证两株的型别,研究传代毒株的病毒滴度、毒力和免疫原性.结果两株病毒与抗DEN-4特异性抗体进行中和实验,中和指数≥316,证明两株病毒确为DEN-4;空斑滴定两株病毒,滴度约为2×106～2.5×106PFU/ml;Ban18-30株对乳鼠的脑内毒力较Ban18原株低,≥1.7logLD50;Ban18-30株对幼鼠脑内接种不致病,而原株的logLD50值为4.3;腹腔免疫小鼠后用原株进行脑内攻击,能够抵抗大于1 000 LD50致死剂量的病毒攻击.结论两株病毒在vero细胞内增殖良好,滴度较高,Ban18-30对乳鼠和幼鼠的致病力明显减弱,在减毒的过程中仍保留了较高的免疫原性,有望成为一株DEN-4的减毒活疫苗候选株.
关键词： 登革热病毒 Ban18-30弱毒株 神经毒力 免疫原性 -
广东地区蝙蝠携带登革热病毒、寨卡病毒以及狂犬病病毒的流行病学调查
目的 了解广东地区蝙蝠携带狂犬病病毒、寨卡病毒以及登革热病毒情况.方法 2014-2016年分别在广州市和湛江市部分地区采集蝙蝠,取其血清和脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)、巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction,Nested PCR),酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞培养分离检测所采标本中的狂犬病病毒、登革热病毒和寨卡病毒的感染情况.结果 采集蝙蝠共174只,分属2科3个种:果蝠科的犬蝠属(Cynopterus sphinx)33只、蝙蝠科的普通伏翼属(Pipistrellusabramus)9只及高头蝠属(Scotophiluskuhlii) 132只.分别取得血清、脑组织各174份.在犬蝠脑标本中检出登革热病毒阳性1份,阳性率0.06％ (1/174),寨卡病毒、狂犬病病毒均未检出.结论 广东两个地区的3种蝙蝠作为寨卡病毒、登革热病毒和狂犬病病毒宿主的可能性较小.
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用NEST-PCR在孑孓中检出登革病毒
登革病毒是登革热(Dengue fever,DF)、登革出血热(Dengue hemorrhagic fever, DHF)的病原体,属于黄病毒科.DF和DHF广泛流行于全球热带和亚热带地区的60多个国家和地区.从1978年开始,我国的广东、海南和台湾省就发生多次DF暴发流行,并波及邻近省[1],埃及伊蚊和白纹伊蚊是病毒的主要传播媒介.在本次实验中,笔者采得两位登革热患者家积水中的孑孓,用NEST-PCR进行扩增,将阳性产物测序分析.
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血管内皮细胞在DHF/DSS中对凝血和纤溶系统的异常调控
登革热病毒(Dengue virus,DV)感染可以引起登革热(Dengue fever,DF)、登革出血热(Dengue haemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合症(Dengue shock syndrome,DSS)等多种疾病.出血和血管渗漏与DV感染密切相关,当出现血容量减少性休克时,如果不及时治疗可导致死亡.然而由DV感染所致的出血机制目前仍不清楚,不少学者提出了多种学说如抗体依赖的感染增强作用(antibody dependent enhancement,ADE)等[1],但均不足以解释临床上DHF/DSS中突出的特征-血管渗漏、出血[2].由于内皮细胞在调控凝血和纤溶系统平衡方面起关键性作用,近年来已经注意到血管内皮细胞在DV感染过程中分泌与凝血和纤溶相关分子失调,这对更深入认识DHF/DSS发病机制有重要的意义.现就近年来DV直接和间接诱导内皮细胞在调控凝血和纤溶系统失衡方面相关研究进展作一综述.
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福建省登革病毒感染的型别鉴定
[目的] 应用RT-PCR方法鉴别福建省登革热感染及型别的判断. [方法] 从血清中提取病毒RNA,行RT-PCR,再用型特异性引物扩增出特异性片段,电泳后观察判断其型别. [结果] 从6份早期病人血清扩增出4份登革热2型特异性条带.[结论] 该方法可用于登革热感染的鉴别诊断并判断其血清型.
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台湾地区登革热的流行情况与防治
登革热在台湾民间称斑痧或天狗热,在台湾流行已久,近一次暴发在1942年,约有500万人(占当时人口的5/6)感染,经40年沉寂,1981年又在屏东县流行,侵袭率80%,1987年高屏地区流行报告病人1 123例,1988年疫区扩大,报告病例10 例,半数发生在高雄市,其后数年则多为散在发生,1995年与1996年又有回升,报告病例分别为1 808例与1 081例,疫情扩至台北,1997年略有减少,1998年又回升,报告病例1 430例,主要在台南市流行,初期流行以第2型为主,1994年则同时出现第1与第3型.1995年则4型皆有流行,显示台湾地区流行的严重性日益增加,报道指出,一旦登革热病毒进入某地区,并造成流行后,病毒就有可能长期存在于该地区,后病例会突然大增,其中还有出血性登革热病人,故台湾正处于转型的关键时期. 台湾登革热大多发生在有埃及伊蚊地区,1995年台北县发生大流行时又从当地的白纹伊蚊体内分离出第1型病毒,确定白纹伊蚊也是传播媒介;埃及伊蚊以分布在海拔300米以下的南部沿海乡镇为主,白纹伊蚊则分布于海拔1 000米以下的全部乡镇,并以平原与近山乡镇为多,埃及伊蚊室内密度高于室外,白纹伊蚊则相反.
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登革热病毒(DENV)包膜蛋白特异性人源抗体筛选与鉴定
目的 建立自外周血快速筛选识别登革热病毒衣壳的人源抗体的方法,从病毒感染者外周血记忆B细胞中筛选出特异性抗体并进行性质分析.方法 通过流式细胞术分选得到外周血中登革热病毒包膜蛋白特异性的单个记忆B细胞,结合高效单细胞PCR技术获得抗体基因序列,对重组表达的单克隆抗体进行结合活性及中和活性检测.结果 成功筛选到识别DENV-1包膜蛋白的6株人源单克隆抗体,其中4株抗体均具有很强的结合活性以及中和活性.结论 成功的通过流式细胞术对DENV特异性记忆B细胞进行分选,并结合单细胞PCR技术,实现了对DENV特异性人源单克隆抗体的高效筛选.通过该平台有希望筛选得到DENV的广谱中和抗体,用于登革热的预防和治疗.
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登革热病毒Ⅰ型外膜蛋白DⅢ区的克隆、表达及重组蛋白的应用
目的选取DVⅠ外膜蛋白DⅢ区基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断的纯化重组蛋白.方法用RT-PCR和套式PCR法扩增登革病毒Hawaii株外膜蛋白DⅢ区基因,与表达载体pET-30 a连接,构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白经Western-blot鉴定活性后用电洗脱法进行纯化.纯化的重组蛋白用间接ELISA法和捕获ELISA法应用于血清学检测,检测结果与间接免疫荧法进行比较.结果重组表达质粒在大肠杆菌中表达高产量的重组蛋白,Western-blot结果显示重组蛋白具有免疫活性.纯化的重组蛋白对登革热病毒Ⅰ型感染者具有很高的检出率,与间接免疫荧光法检测结果基本相符.结论 DVⅠ外膜蛋白DⅢ区基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白可应用于血清学检测.
