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二苯乙烯苷神经保护作用及其机制的研究进展
二苯乙烯苷(TSG)为何首乌的主要有效成分.现代药理研究表明,TSG能提高纹状体多巴胺水平,具有抗氧化及清除自由基、抗兴奋性毒性、调节Bcl-2蛋白及海马基因表达等多种功效,能多途径直接或间接地发挥脑保护作用,对帕金森病和阿尔茨海默病等神经变性疾病的防治有着良好的应用前景.
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二氢黄酮的药理活性研究进展
二氢黄酮类（flavonones）化合物是药用植物中广泛存在的一类黄酮类化合物，具有抗癌、抗氧化和清除自由基、神经保护、治疗心血管、保肝护肝、抗炎、抗菌等多种药理活性。本文就二氢黄酮类化合物的药理活性研究情况进行概述。
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加味五子衍宗方及其活性部位对脂多糖诱导神经炎症反应的抑制作用及机制研究
目的：研究加味五子衍宗方及其活性部位对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及潜在机制。方法通过大孔树脂柱,将加味五子衍宗方乙醇总提取物洗脱分离得到水提组、20%醇提组、50%醇提组、70%醇提组和95%醇提组5个部位。针对无细胞毒性的部位研究了其对炎症因子一氧化氮和炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶,环氧合酶-2表达的影响,明确了抗炎活性部位,同时进一步研究了活性部位对核转录因子的激活以及活性氧表达的调控作用。结果70%醇提组和95%醇提组对细胞具有毒性,其余各部位(水提组,20%醇提组,50%醇提组)均无细胞毒性且表现出一定的抗炎活性。其中50%醇提组抗炎活性优,甚至高于复方组。结论加味五子衍宗方的抗炎活性部位可能主要富集于50%醇提部分,其抗炎活性可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应以及抗氧化应激实现的。
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同仁大活络丸对脑缺血再灌注损伤大鼠恢复早期的神经保护作用
目的:探讨同仁大活络丸对脑缺血再灌注损伤大鼠恢复早期的神经保护作用及其作用机制.方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,术后3～14天灌胃给药,观察同仁大活络丸对大鼠神经功能缺损症状、肢体运动感觉功能,脑皮质中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、核转录因子p65(NF-kBp65)含量变化的影响.结果:与模型组相比,同仁大活络丸能明显改善神经功能缺损症状,明显改善横木行走能力,提高抓握力量;显著提高脑皮质中SOD活力、减少MDA含量;明显降低IL-10和NF-kBp65含量.结论:同仁大活络丸对大鼠脑缺血再灌注损伤恢复早期具有神经保护作用,其机制可能与提高脑皮质SOD的活性,减少脂质过氧化物生成,降低炎症因子IL-10和核转录因子NF-kBp65等作用有关.
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芍药内酯苷对大鼠坐骨神经雪旺细胞的保护作用研究
目的:探讨糖痹康颗粒中主要成分芍药内酯苷对大鼠坐骨神经雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)的影响作用.方法:本实验通过不同浓度的葡萄糖对大鼠坐骨神经雪旺细胞的影响的研究,建立了以150 mmol·L-1D-葡萄糖,培养时间为48 h的细胞氧化应激模型,通过设立芍药内酯苷高中低组(100 μM、20μM、4μM),模型组,维生素C组(100μM),正常组,利用流式细胞仪定量检测细胞内ROS含量和荧光显微镜定性观察细胞内ROS状态以及CCK-8检测细胞活性.结果:采用CCK-8法检测细胞增殖情况,48 h后,模型组与正常组有明显的差异P＜0.01;芍药内酯苷给药组与模型组相比,P＜0.01;芍药内酯苷可以促进雪旺细胞增殖.通过检测ROS荧光含量,发现芍药内酯苷100、20、4μM与模型组(Glu 150 mM)相比,各组P＜0.01,表明芍药内酯苷可以减轻雪旺细胞内ROS,缓解氧化应激状态.结论:芍药内酯苷可以通过增加雪旺细胞增殖,改善氧化应激状态对雪旺细胞产生保护作用.
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肾脑复元汤对阿尔兹海默病大鼠海马区神经保护作用及对碱性成纤维生长因子、脑源性神经营养因子表达的影响
目的:观察肾脑复元汤对阿尔茨海默病大鼠海马区神经细胞的作用机制.方法:选取健康雄性SD大鼠120只,按完全随机法分为;假手术组(侧脑室注射3μL蒸馏水),模型组(侧脑室注射3μLβ-淀粉样蛋白(Aβ)25-35+蒸馏水灌胃)、肾脑复元汤组(侧脑室注射3μLβ-淀粉样蛋白25-35+肾脑复元汤灌胃)及对照组(侧脑室注射3μLβ-淀粉样蛋白25-35+盐酸多奈哌齐灌胃),各组均各灌胃1次,分别于7,14,21 d 3个时相处死.观察HE染色、tunnel染色及碱性成纤维生长因子(bFGF),脑源性神经营养因子(BDNF)的变化.结果:与模型组比较,中药组坏死程度较轻,且中药组(第14天)细胞凋亡程度较模型组减轻(P<0.05).与模型组比较,中药组(第7天)bFGF,BDNF表达上升(P<0.05).结论:肾脑复元汤对AD病大鼠海马区神经具有修复的作用,且发挥作用主要在后期.其机制与促进海马区BDNF及bFGF表达有关.
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补阳还五汤治疗缺血性中风药理作用机制的研究进展
近年来，国内学者对补阳还五汤抗脑缺血的药理作用进行了大量研究，结果表明：补阳还五汤可通过改善血液流变性、提高脑组织能量代谢、抗炎、抗自由基损伤、保护血脑屏障，促进神经发生、保护神经元等多种途径抗脑缺血损伤。文章就补阳还五汤治疗缺血性中风药理作用机制作一综述。
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血管内皮生长因子及其受体在缺氧缺血性脑损伤的作用研究
血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）是一种特异性的促血管内皮细胞生长因子。脑缺氧缺血后，VEGF 及其受体可促进血管新生、神经发生，保护神经元、刺激星型胶质细胞增殖。本文就 VEGF 及其受体在缺氧缺血性脑损伤中的作用研究进行综述。
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针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察针刺对大鼠大脑中动脉栓塞再灌注后的神经保护作用.方法:将30只大鼠随机分为正常组、模型组和针刺组.模型组和针刺组均用栓线插入大鼠大脑中动脉根部,2 hr后抽出,使缺血组织再灌注,复制可逆性大脑中动脉栓塞(rMCAo)模型,正常组和模型组不经任何治疗,针刺组分别在模型复制前1 hr、模型复制后8 hr和16 hr电针"水沟"、"太冲"、"曲池"、"足三里"、"丰隆".观察神经行为症状,24 hr后断颈处死大鼠,检测血液流变学指标,脑组织TTC染色后测量脑梗死及水肿体积,行病理组织学检查.结果:神经行为学针刺组与模型组比较差异有显著性(P＜0.01);脑梗死和脑水肿体积百分率针刺组明显低于模型组(P＜0.01);血液流变学中全血比粘度针刺组与模型组比较差异有显著性(P＜0.05),但血浆比粘度、红细胞压积无明显变化(P＞0.05);病理组织学观察表明,针刺对大鼠脑组织损伤有明显的保护作用.结论:针刺对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.
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电针对脾虚型幼鼠海马区结构的影响
目的:观察电针对脾虚证幼鼠脑结构的影响.方法:健康SD 4周龄雄性大鼠15只,随机选取5只作为对照组,其余10只造模.造模成功后的大鼠随机分为模型组、电针组,每组各5只.用利血平腹腔注射和大黄灌胃联合造幼鼠脾虚证模型,采用行为学指标、体重测量和拉尾排便率相结合对脾虚证模型是否成功进行判定.造模结束后用电针刺激电针组大鼠双侧"足三里"和"三阴交"穴,每次20 min,每天1次.治疗14 d后采用光学显微镜和透射电镜观察各组大鼠海马区的结构.结果:造模14 d后大鼠均表现毛色不荣、精神倦怠、嗜卧、眼眯、四肢无力,或见颤抖、反应迟钝,甚则肛门脱垂,明显消瘦.与对照组比较,造模大鼠体重明显较轻(P＜0.01),拉尾排便次数增多.光镜下观察,模型组脑组织内神经元轮廓模糊,胞体肿大,周围间隙增宽,核碎裂,胞浆出现空洞,空泡形成,细胞带层次减少;电针组脑组织内神经元轮廓尚清晰,细胞核形态正常,细胞带尚均匀,可见有胶质细胞浸润.电镜下观察,模型组脑结构在神经元胞体和神经毡区都有改变,尤以线粒体和突触终末端的改变明显;电针组神经元损伤程度较轻,细胞结构良好.结论:脾虚证会引起大鼠脑内神经元胞体和突触的改变,而电针治疗对脑组织抗损伤能力和修复能力有积极作用.
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电针对脑缺血再灌注大鼠脑红蛋白的影响
目的:观察脑缺血再灌注损伤大鼠脑红蛋白(neuroglobin,NgB)的表达以及电针预处理对NgB表达的影响,探索NgB在电针预处理诱导的脑保护效应中的作用.方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,每组16只.电针组给予电针刺激“百会”,每天30 min,持续5d.预处理后采用右侧大脑中动脉阻闭法,缺血120 min后行再灌注,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.脑缺血再灌后24h进行神经行为学评分,然后检测脑梗死容积,免疫荧光双标法检测NgB表达水平.另一批SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注6、24、72h组,每组6只,分别通过免疫荧光双标法观察缺血半暗带NgB表达水平的变化.结果:电针预处理后电针组较模型组脑梗死容积百分比明显减低(P＜0.01),神经行为学评分及NgB含量明显增加(P＜0.01).脑缺血再灌注后6 h NgB表达开始上调,24 h为表达高峰(P＜0.01),并至少可以持续到72 h.结论:电针预处理能显著提高脑缺血再灌注大鼠神经行为学评分,降低脑梗死容积,并可进一步上调缺血半暗带NgB表达,诱导脑缺血耐受,从而减轻脑缺血再灌注损伤.
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淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用
目的:研究淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用.方法:108只SPF级雄性3月龄SD大鼠按随机数字表法分为实验组、对照组及假手术组3组,每组36只.对照组和实验组采用改良Allen法制作脊髓损伤模型,假手术组仅切开椎板不损伤脊髓.术后即刻实验组给予淫羊藿苷(100 mg/kg)灌胃,对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,每日2次.术后1、2、3d采用BBB评分法评定大鼠运动功能;术后72 h采用分光光度法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β的含量,免疫组化染色检测MPO、TNF-α、IL-1β的表达;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(ma1-ondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用TUNEL法检测细胞凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);光镜观察脊髓损伤后组织病理学的改变并行组织病理学评分.结果:术后备时间点对照组和实验组大鼠BBB评分均显著低于假手术组(P＜0.05);术后2、3d实验组大鼠BBB评分均显著高于对照组(P＜0.05).术后72 h,对照组和实验组MPO活性和TNF-α、IL-13的含量显著高于假手术组(P＜0.05);实验组显著低于对照组(P＜0.05).对照组和实验组MPO、TNF-α、IL-1β的表达显著高于假手术组(P＜0.05);实验组显著低于对照组(P＜0.05).对照组和实验组MDA含量显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P＜0.05);对照组和实验组SOD活性显著低于假手术组,实验组显著高于对照组(P＜0.05).对照组和实验组脊髓组织中AI显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P＜0.05).对照组和实验组脊髓组织病理学评分均显著高于假手术组,实验组均显著低于对照组(P＜0.05).结论:淫羊藿苷能够抑制脊髓损伤后的炎症、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻脊髓组织病理学损伤,改善脊髓损伤大鼠的运动功能,有效保护脊髓组织,具有明显的神经保护作用.
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中药黄芪对实验性脊髓损伤的神经保护作用
目的探讨黄芪(AR)对脊髓继发性损伤的保护作用,并与甲基强地松龙(MP)进行对照.方法 Wistar大鼠60只,以改良Allen氏法制备脊髓打击伤模型,随机分为三组.测定不同药物处理后4 h、8 h、24 h脊髓组织线粒体SOD活性和MDA浓度以及血液流变学改变;光镜观察用药后1、2周黄芪对病理学改变的影响,同时进行联合行为学评分(CBS).结果黄芪处理后脊髓组织MDA浓度明显低于各时相点对照组,SOD活性显著升高(P＜0.01),与MP治疗组无明显差异(P＞0.05).血液流变学指标也有所改善.病理检查发现黄芪治疗组髓鞘受损轻微,组织赦免范围增大.结论黄芪治疗可以缓解脊髓损伤后的脂质过氧化反应,改善微循环,从而发挥脊髓保护作用.
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清热化瘀方预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用
目的:探讨清热化瘀方联合脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用.方法:健康雄性SD大鼠160只,随机分为4组:假手术组、大脑中动脉缺血组(middle cerebral artery occlusion,MCAO)、脑缺血预处理组(brain ischemicpreconditioning,BIP)、清热化瘀方组(Qingre Huayu prescription,QRHY),每组按照再灌注后12 h,1,2,3d4个时间点平均分为4个亚组,制备缺血预处理模型,评价脑缺血预处理对缺血再灌注大鼠脑组织病理形态学、脑梗死体积和神经细胞凋亡的影响及清热化瘀方的干预作用.结果:①光镜和电镜下观察到BIP组神经细胞的病理形态学改变较MCAO组明显减轻,且BIP组梗死面积明显小于MCAO组(P＜0.05),QRHY组较BIP组上述损害进一步减轻(P＜0.05).②大鼠脑缺血再灌注后12 h,MCAO组细胞凋亡发生率较假手术组显著增加(P＜0.01),1d时达到高峰,以后时间点逐渐下降,但仍高于假手术组(P＜0.01)；BIP组各个时间点神经元凋亡发生率较MCAO组显著降低(P＜0.05或P＜0.01)；QRHY组较BIP组神经细胞凋亡率进一步降低(P ＜0.05或P＜0.01).结论:清热化瘀方联合缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤有协同保护作用.
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人参炔醇对氧糖剥夺神经细胞损伤的保护作用
目的:探讨人参炔醇对氧糖剥夺(OGD)致神经细胞损伤的保护作用.方法:体外培养PC12细胞,分为正常对照组、OGD组、人参炔醇组、尼莫地平组,加入含0.5 mmol·L(-1)Na2SO4的无糖Earle's液建立OGD损伤模型,以人参炔醇(10,20mg·L(-1))、尼莫地平(100 μmol·L(-1))处理.采用荧光显微镜观察细胞形态,Hoechst和PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性与细胞Ca(2+)浓度,观察人参炔醇对OGD致PC12细胞损伤的保护作用.结果:人参炔醇能够减少OGD损伤PC12细胞LDH的释放(P<0.05,P<0.01),抑制Ca(2+)的过量产生(P<0.05,P<0.01)、显著减少细胞凋亡及坏死(P<0.05,P<0.01).结论:人参炔醇对OGD致神经细胞损伤具有保护作用.
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加味五子衍宗方抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究
目的:研究加味五子衍宗方(MWP)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及潜在机制.方法:体外培养BV-2小胶质细胞系,用LPS(1 mg·L-1)诱导炎症模型,将细胞分为空白对照组,炎症模型组和MWP药物组,药物组MWP设置50,100,200 mg·L-13个质量浓度.LPS和药物处理细胞后分别检测各组细胞炎症因子一氧化氮(NO)的表达、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),环氧合酶-2(COX-2)的表达、核转录因子-κB(NF-κB)核转位以及还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性和活性氧(ROS)的表达.结果:MWP可剂量依赖性降低LPS激活的BV-2小胶质细胞内iNOS,COX-2的蛋白表达和NO的释放,抑制NF-κB的核转位,此外还可剂量依赖性降低NADPH氧化酶活性并明显降低ROS的产生.结论:MWP可有效抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应,可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应以及NADPH氧化酶介导的氧化应激实现的.
关键词： 神经炎症 BV-2小胶质细胞系 加味五子衍宗方 抗炎 神经保护 -
天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响
目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用.方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只.天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清.PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10％的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500 μmol·L-1 MPP+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96(R)Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率.后续实验分为5组,即:空白组,MPP+组,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组,MPP++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P＜0.05);与模型组比较,10％的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P＜0.05).后续试验中,与空白组比较,MPP+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P＜0.05).与MPP+组比较,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P＜0.05),而MPP++含药血清高剂量+ SP600125组的作用明显高于MPP++含药血清高剂量组(P＜0.05),但不高于MPP++SP600125组.JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化.结论:天麻钩藤饮含药血清对Mpp+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关.
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芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的:研究芦丁对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为空白组,MPP+损伤模型组,芦丁干预组.模型组用1 mmol·L-MPP+处理细胞48 h,干预组在MPP+损伤基础上,给予不同质量浓度芦丁(50,100,200,300 mg·L-1).噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色观察细胞核形态变化;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针标记法观察细胞内活性氧(ROS)的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞色素C(Cyt-C)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组中细胞活性显著降低(P＜0.01),Hoechst 33342染色下可见细胞胞体变小、核皱缩,细胞ROS显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著降低(P＜0.01).Western blot结果表明,模型组Cyt-C含量升高(P＜0.01),p-ERK1/2水平降低(P＜0.01).与模型组比较,预先4h给予不同浓度的芦丁(100,200,300 mg·L-1)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性(P ＜0.05,P＜0.01),抑制ROS升高(P＜0.01),并恢复线粒体膜高能电位(P＜0.05).Western blot结果显示,芦丁能够抑制MPP+引起的Cyt-C蛋白升高(P＜0.01)和p-ERK1/2蛋白降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关.
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镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞损伤保护作用的抗氧化机制分析
目的:观察镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其是否通过抗氧化活性发挥神经保护作用.方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,每组10只.镇肝熄风汤按照8,16,32 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备含药和空白血清.常规培养PC12细胞,分为空白组、模型组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,空白组和模型组给予空白血清,其他3组给予10％含药血清,孵育1h,再加100 μmol· L-16-OHDA共孵育24 h后收集细胞.采用MTS法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,分光光度法检测脂质过氧化物(lipid peroxidation,LPO)水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测醌氧化还原酶-1(NADPH quinine oxidoreductase 1,NQO-1) mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,而细胞凋亡和LPO水平明显增加(P＜0.05).与模型组比较,10％的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加,而细胞凋亡和LPO水平明显减少(P＜0.05).与模型组比较,10％的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组NQO-1 mRNA表达明显上调(P＜0.05),而空白组与模型组NQO-1mRNA表达无显著性差异.结论:镇肝熄风汤含药血清具有保护6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用,其机制可能与上调PC12细胞NQO-1 mRNA表达进了提高了细胞抗氧化能力有关.
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自噬参与氢溴酸樟柳碱对缺氧状态下PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究氢溴酸樟柳碱对缺氧状态下肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rats pheochromocytoma cells,PC12)自噬相关因子的影响.探讨氢溴酸樟柳碱对缺氧损伤神经细胞模型的保护作用及机制.方法:运用氯化钴(CoC12)处理PC12细胞建立化学性缺氧模型,设空白组,模型组,阳性组(丁基苯酞),氢溴酸樟柳碱高、中、低浓度组(100,50,25 μmol·L-1).采用倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞相对存活率,单丹磺酰尸胺荧光染色(MDC)和透射电镜技术检测自噬小体的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),Beclin-1等蛋白的表达.结果:氢溴酸樟柳碱干预后细胞存活率显著提高,细胞形态恢复较好.MDC荧光染色和透射电镜下自噬小体的数量增多,LC3-Ⅱ及Beclin-1的表达显著提升.结论:自噬在缺氧状态下对细胞有保护作用,氢溴酸樟柳碱通过诱导低氧状态细胞自噬发挥了神经保护作用.
关键词： 氢溴酸樟柳碱 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 缺氧 自噬 神经保护
