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通脉颗粒活血通脉功效的指征药效成分研究
目的：通脉颗粒（Tongmai Granule，TM）由丹参、川芎和葛根组方而成，具有活血通脉的功效，在临床用于缺血性心脑血管疾病的治疗。本研究采用血清药化和血清药理相结合的方法，研究TM功效的物质基础。方法：大鼠单次和多次给药后采集不同时间点的血清，采用LC-MS/MS定量分析血清中TM化学成分，以心肌细胞缺氧复氧模型评价TM含药血清的心肌保护作用，并对TM入血成分与心肌细胞活力进行相关性分析。结果：8种葛根黄酮成分、5种丹参酚酸成分和2种葛根成分均能快速吸收入血，大部分成分在5或30 min达到高浓度，反复给药3次后的血药浓度均较单次给药明显升高；含药血清具有显著的保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用，并具有量效关系；其中大豆苷元（TMF1）、紫草酸（LA）、丹酚酸A (SAA)、丹参素（DSS）和迷迭香酸（RA）与心肌细胞活力相关。结论：大豆苷元（TMF1）、紫草酸（LA）、丹酚酸A(SAA)、丹参素（DSS）和迷迭香酸（RA）可能是TM活血通脉功效的指征药效成分，血清药化/血清药理关联的研究为中药复方功效物质基础提供了确证。
关键词： 通脉颗粒 血清药化 血清药理 LC-MS/MS 心肌细胞缺氧复氧损伤 -
猪苓汤含药血清对体外培养k562及PG细胞nm23基因表达的影响
目的 探讨猪苓汤抗癌抑制转移的作用机制.方法 采用血清药理学方法,以不同浓度含药血清孵育体外培养人肿瘤细胞系,通过流式细胞仪检测不同浓度血清药物组对肿瘤转移抑制基因的表达情况.结果 猪苓汤含药血清可显著提高肺癌高转移株PG肿瘤转移抑制基因的表达,与正常组比较有显著性差异(P＜0.01),与顺铂+正常血清组相比也有显著性差异(P＜0.05),白血病细胞株k562猪苓汤含药血清对nm23表达影响不大,与正常组比较无显著性差异.结论 猪苓汤对高转移肺癌的转移属性具有一定的调节作用,可抑制肿瘤转移,改善肿瘤预后.
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天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响
目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用.方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只.天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清.PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10％的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500 μmol·L-1 MPP+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96(R)Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率.后续实验分为5组,即:空白组,MPP+组,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组,MPP++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P＜0.05);与模型组比较,10％的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P＜0.05).后续试验中,与空白组比较,MPP+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P＜0.05).与MPP+组比较,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P＜0.05),而MPP++含药血清高剂量+ SP600125组的作用明显高于MPP++含药血清高剂量组(P＜0.05),但不高于MPP++SP600125组.JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化.结论:天麻钩藤饮含药血清对Mpp+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关.
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镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞损伤保护作用的抗氧化机制分析
目的:观察镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其是否通过抗氧化活性发挥神经保护作用.方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,每组10只.镇肝熄风汤按照8,16,32 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备含药和空白血清.常规培养PC12细胞,分为空白组、模型组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,空白组和模型组给予空白血清,其他3组给予10％含药血清,孵育1h,再加100 μmol· L-16-OHDA共孵育24 h后收集细胞.采用MTS法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,分光光度法检测脂质过氧化物(lipid peroxidation,LPO)水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测醌氧化还原酶-1(NADPH quinine oxidoreductase 1,NQO-1) mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,而细胞凋亡和LPO水平明显增加(P＜0.05).与模型组比较,10％的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加,而细胞凋亡和LPO水平明显减少(P＜0.05).与模型组比较,10％的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组NQO-1 mRNA表达明显上调(P＜0.05),而空白组与模型组NQO-1mRNA表达无显著性差异.结论:镇肝熄风汤含药血清具有保护6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用,其机制可能与上调PC12细胞NQO-1 mRNA表达进了提高了细胞抗氧化能力有关.
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灭活对当归补血汤含药血清抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用的影响
运用药效动力学研究方法观察了灭活对当归补血汤含药血清抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用的影响.结果表明,灭活后当归补血汤含药血清的Ke、t1/2(ke)、td、tp等药效动力学参数均较灭活前为低,而Xmin、Ka、t1/2(ka)等药效动力学参数均较灭活前为高.说明灭活可降低当归补血汤含药血清对小鼠肝组织过氧化脂质生成的抑制作用,但其降低作用并不明显,对实验结果无明显影响.
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怀牛膝药物血清对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的:从细胞分子水平探讨怀牛膝药物血清抗衰老作用及作用机理.方法:运用血清药理学方法,以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,分为怀牛膝药物血清组、大鼠血清组和正常对照组,相同条件下传代培养,以生长曲线、MTT法、3H-TdR掺入法观察细胞增殖变化及DNA合成情况.结果:同一代龄,药物组细胞繁殖总数、OD490值、CPM掺入量等均明显高于对照组.结论:怀牛膝药物血清有较显著的促细胞增殖能力.
关键词： 怀牛膝 血清药理 人胚肺二倍体成纤维细胞 抗衰老 -
黄芪血清药理对HDF细胞p16mRNA表达及端粒长度影响的实验研究
目的:观察黄芪血清对人胚肺二倍成纤维(HDF)细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、p16mRNA表达及端粒长度影响.方法:以黄芪水煎剂灌胃家兔获得含药血清,以含黄芪血清的DMEM培养基培养HDF细胞,同时以不含黄芪的家兔血清作空白对照,比色法检测HDF细胞的SOD活性、RT-PCR检测p16mRNA表达及TRF-Southern blot法检测HDF细胞端粒长度变化.结果:含黄芪血清培养基培养的HDF细胞与空白血清培养的HDF细胞比较SOD活性增加,p16mRNA表达减少,端粒酶长度增加.结论:含黄芪血清的培养基通过增加HDF细胞SOD活性,减少p16mRNA表达,抑制端粒缩短而起到抗衰老作用.
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小补心汤总黄酮含药血清对皮质酮损伤神经细胞的保护作用
目的 探讨小补心汤总黄酮(XBXT-2)含药血清的神经保护作用.方法 采用血清药理学方法分别制备大鼠的空白血清、氟西汀(10 mg/kg)和XBXT-2(25,50,100,200 mg/kg)含药血清.采用皮质酮损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)、人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)及原代培养大鼠海马神经元为体外药理学模型,应用ATP生物发光法检测XBXT-2及氟西汀含药血清对损伤细胞存活率的影响.结果 皮质酮 (50～300 μmol/L )能够浓度依赖性地抑制SH-SY5Y的存活,氟西汀与XBXT-2(25,50 mg/kg) 含药血清能显著提高皮质酮(100 μmol/L)损伤的SH-SY5Y的存活率 (P<0.01,P<0.05,P<0.01);与空白对照组比较,200 μmol/L皮质酮导致PC12的存活率显著下降(P<0.01),氟西汀与XBXT-2(25,50,100 mg/kg)含药血清能显著对抗这种损伤(P<0.05,P<0.01,P<0.05);100 μmol/L皮质酮使原代海马神经元存活率显著下降(P<0.001),XBXT-2(25、50 mg/kg)对这种损伤具有显著的保护作用(P<0.05,P<0.001),其作用与阳性药氟西汀含药血清相当.结论 XBXT-2含药血清对皮质酮所致的神经细胞损伤具有明显保护作用,这可能是其抗抑郁效应的重要细胞机制之一.
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腰痛舒胶囊对一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡的影响
目的观察腰痛舒胶囊对一氧化氮在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的影响.方法体外培养的兔软骨细胞,分别加入硝普钠(SNP)培养12、24、48 h,用透射电镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡的变化,并以不同剂量腰痛舒胶囊含药血清加入NO诱导的软骨细胞凋亡体系培养24 h,采用annexin V/PI方法检测凋亡情况.结果在体外培养兔软骨细胞加入硝普钠24 h,流式细胞仪检测凋亡率为(74.05±6.68)%, 对照组为(3.15±0.76)% (P<0.01);透射电镜可见较典型凋亡细胞形态改变,加入不同剂量腰痛舒胶囊含药血清,其凋亡率明显下降,并以高剂量为显著.结论硝普钠在体外能诱导软骨细胞凋亡;高剂量腰痛舒含药血清能明显降低NO诱导的软骨细胞凋亡,提示腰痛舒胶囊能抑制软骨细胞凋亡.
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补气生血系列药对含药血清对血虚小鼠骨髓造血功能的影响
目的:观察补气生药系列药对含药血清对血虚模型小鼠骨髓造血功能的影响,为阐明中医“补气生血”治则提供实验依据.方法:连续4天腹腔注射环磷酰胺30 mg/kg复制化学性血虚小鼠模型;灌胃7.5g生药/kg各补气生血药对水煎液,一日两次,第4天腹主动脉取血,分离含药血清;观察各组含药血清对骨髓造血祖细胞CFU-GM、CFU-E、CFU-B的影响及骨髓有核细胞DNA合成的影响;建立定性均匀设计中虚拟变量的多元线性回归方程,找出佳药效配伍;运用双因素方差分析补气药与补血药的贡献度.结果:补气生血各药对的含药血清均能提高小鼠骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E和0D268值;通过主成分分析得到的多元回归方程为:yF=-0.771 +2.226人参+1.351黄芪+1.169西洋参+ 1.082白芍+0.706当归+0.464熟地;在提高CFU-GM和骨髓有核细胞DNA合成方面,补气药与补血药有交互作用.结论:补气生血各药对含药血清可能够促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖与分化而促进骨髓造血;对于骨髓造血功能作用强的是人参白芍药对;补气药可增加补血药的药效而达到其“补气生血”功效.
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中药方剂体内及含药血清抗肿瘤作用的比较
目的:通过动物体内抑瘤实验和血清药理学实验比较,探讨体内押瘤试验与血清药理学实验的一致性.方法:选择4个体内抗癌试验有效的样品(中药复方制刺)进行体内及血清药理学的试验.其中血清药理学实验采用10%和20%的含药血清进行体外抑瘤试验,用MTT法检测4种样品含药血清对不同肿瘤细胞的细胞增殖的影响.结果:4种样品体内抑瘤实验显示明确的抗肿瘤活性,血清药理学同样显示一定的抗癌活性,且G、H药P<0.01.X、T药P<0.05.结论:体内抑瘤有效的抗肿瘤方剂血清药理学检测均有抗癌活性,与体内试验一致.
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复方中药的含药血清对大鼠离体子宫的影响研究
1实验材料痛经灵及宫血安:由本院制剂提供浸膏粉,使用时用0.5%CMC-Na配成一定浓度混悬液.
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脑微血管内皮细胞缺氧模型转化生长因子β1表达与脑溢安的干预
背景:临床及动物实验证实脑溢安能促进脑出血急性期血肿吸收及神经功能恢复,提高生活质量.目的:观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞转化生长因子β1 mRNA 表达的影响.方法:用分离培养的大鼠脑微血管内皮细胞移入厌氧培养箱培养18h 建立缺氧损伤模型,并随机分为正常组、模型组、正常血清组及含脑溢安血清组.正常组为同一批正常培养的脑微血管内皮细胞;模型组将正常培养的细胞放入厌氧培养箱内培养18 h ;正常血清对照组细胞在培养液中加5%正常血清后,放入厌氧培养箱中培养18 h ;脑溢安血清组细胞在培养液中加5%脑溢安血清后,放入厌氧培养箱内培养18 h.结果与结论:缺氧培养使脑微血管内皮细胞存活数量减少,其表达的转化生长因子β1 mRNA 增强,而脑溢安血清能明显增加脑微血管内皮细胞存活数量,降低转化生长因子β1 mRNA 表达水平(P < 0.05).说明脑溢安血清下调转化生长因子β1mRNA 的表达可能是其抑制脑微血管内皮细胞的凋亡对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用机制之一.
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玉屏风散发酵液对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能影响的血清药理学研究
目的:采用血清药理学方法,观察玉屏风散煎剂及发酵液对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫功能的影响.方法:3组小鼠按37.0g/kg体重分别用玉屏风散发酵液及水煎剂连续灌胃3d,空白对照组用自来水灌胃.于末次给药后lh眼球采血制备含药血清及空白对照血清,观察含药血清对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和NO生成量的影响.结果:玉屏风散发酵液与煎剂都可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及NO的生成量,且玉屏风散发酵液的作用强于煎剂.结论:玉屏风散发酵液可明显增强小鼠的免疫功能.
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女贞子血清药理对Hela细胞增殖抑制的实验研究
目的:观察女贞子血清药理对宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用.方法:应用血清药理学方法研究中药的体外效应,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测含女贞子兔血清对Hela细胞的抑制效应,并采用末端标记法(TUNEL)对凋亡细胞进行定量检测.结果:中药兔血清对Hela检测结果为女贞子血清促进Hela细胞凋亡.结论:女贞子血清药理抑制Hela细胞增殖,对指导临床药物治疗宫颈癌具有重要意义.
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黄芪血清对衰老细胞抗氧化作用及p16表达影响的研究
目的:观察黄芪血清对HDF细胞SOD 活性,MDA含量及p16mRNA表达的影响.方法:以黄芪水煎剂灌胃家兔获得含药血清,以含黄芪血清的DMEM培养基培养HDF细胞,同时以不含黄芪的家兔血清作空白对照,比色法测定HDF细胞的SOD 活性及MDA含量,RT-PCR检测p16 mRNA表达.结果:含黄芪血清培养基培养的HDF细胞与空白血清培养的HDF细胞比较SOD 活性增加,p16表达减少.结论:含黄芪血清的培养基通过增加HDF细胞SOD活性,减少MDA含量及p16表达而起到抗衰老作用.
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中医不同治则代表方药对人胃癌BGC细胞株增殖的影响
目的:观察中医不同治则代表方药对人胃癌BGC细胞株增殖的影响.方法:以各方药不同浓度含药血清培养BGC细胞24 h、48 h、72 h,以MTT法检测对细胞增殖的影响.结果:各含药血清均不同程度地抑制BGC细胞增殖,且呈一定时间依赖性和剂量依赖性.结论:不同治则代表方药均不同程度地抑制BGC细胞增殖,且呈一定时效和量效关系.
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不同治则代表方药对胃癌BGC细胞株细胞凋亡及端粒酶活性的影响
目的:初步探讨不同治则代表方药对人胃癌BGC细胞株细胞凋亡和端粒酶活性的影响.方法:不同治则代表方药含药血清作用于BGC细胞48 h,以流式细胞术检测细胞凋亡率及端粒酶活性.结果:各含药血清作用于BGC细胞48 h后,凋亡率均有不同程度增加、端粒酶活性均有不同程度降低.但凋亡率、端粒酶活性与含药血清浓度不完全成正比.结论:促进BGC细胞凋亡并抑制端粒酶活性,可能是不同治则代表方药抑制BGC细胞增殖的共同作用机制之一.
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阿胶含药血清诱导肺癌PG细胞凋亡的动物实验
阿胶是传统名贵中药,滋阴补血,临床应用广泛.近年开展的多肽类抗癌的药理实验证实阿胶具有多种抗癌活性成分.东阿阿胶股份有限公司作为全国阿胶生产的龙头企业,率先开展了"阿胶二次开发",力图用现代药理学理论阐述阿胶补血及其他功用的作用机制,为传统中医药走出国门迈向世界提供科学依据.
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阳和汤血清对MCF-7细胞增殖、分化及凋亡的影响
目的:研究阳和汤血清对MCF-7细胞增殖、分化及凋亡影响.方法:BrdU掺入法检测细胞增殖,软琼脂克隆形成法检测细胞分化,原位末端标记及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阳和汤血清对MCF-7细胞有抑制增殖、促进分化及诱导凋亡作用,而阳和汤原液无此作用.结论:阳和汤有抗肿瘤作用,该作用需要机体活化.
