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人参皂甙对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的从分子生物水平探讨人参皂甙抗衰老的作用及作用机制.方法运用血清药理学方法,以体外培养的人胚肺二倍体细胞为实验对象,分为人参皂甙血清组、正常老龄大鼠血清组、老年大鼠对照组,相同条件下传代培养.观察2BS细胞生长曲线,2BS细胞增殖,2BS细胞DNA合成等指标的变化情况.结果同一代龄,药物组上述指标均明显高于对照组.结论人参皂甙有较显著地促进细胞增殖的作用,并通过促进细胞的增殖完成其分子生物学意义上的抗衰老作用.
关键词： 人参皂甙 抗衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 -
怀牛膝药物血清对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的:从细胞分子水平探讨怀牛膝药物血清抗衰老作用及作用机理.方法:运用血清药理学方法,以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,分为怀牛膝药物血清组、大鼠血清组和正常对照组,相同条件下传代培养,以生长曲线、MTT法、3H-TdR掺入法观察细胞增殖变化及DNA合成情况.结果:同一代龄,药物组细胞繁殖总数、OD490值、CPM掺入量等均明显高于对照组.结论:怀牛膝药物血清有较显著的促细胞增殖能力.
关键词： 怀牛膝 血清药理 人胚肺二倍体成纤维细胞 抗衰老 -
补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用
目的:比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用.方法:采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT-PCR、Western blot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16INK4、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响.结果:补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA/蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA/蛋白的表达.而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显.结论:补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现.
关键词： 补肾 益气 健脾 活血 衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 细胞周期相关基因调控 -
枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响
目的:研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响.方法:以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株2BS为衰老模型,用细胞脱核和细胞融合技术,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞的DNA合成的影响.结果:2BS细胞分别在含0.025(V/V)枸杞子、淫羊藿水提液的DMEM培养液中,可连续培养至61.0±2.9、56.0±2.6代,对照组为49.0±2.6代(P＜0.01);衰老的2BS细胞分别用枸杞子、淫羊藿水提液处理2h后,进行细胞脱核并与年轻2BS细胞融合,其[3H]TdR掺入百分率明显高于对照组(P＜0.01).结论:枸杞子、淫羊藿均能促进衰老-年轻2BS融合细胞的DNA的合成速率,延长2BS细胞寿命.
关键词： 枸杞子 淫羊藿 细胞衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 DNA合成 -
不同pH值对人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5生长的影响
目的 在不同pH值培养液中培养人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5),观察其生长情况,选出有利于MRC-5细胞生长的pH值范围.方法 采用细胞培养技术,分别在pH值为6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6的培养液中培养MRC-5细胞,通过显微技术观察细胞形态、对细胞进行计数,然后对MRC-5细胞的生长情况进行分析比较.结果 在不同pH值的培养液中,MRC-5细胞的生长状况不同,细胞数量和细胞形态都有差异,当培养液的pH值为7.2-7.3时,细胞生长形态好,细胞数量高可达2.37×106/ml.结论 研究表明,培养液的pH值为7.2-7.3时,MRC-5细胞的生长状况佳.
关键词： 人胚肺二倍体成纤维细胞 MRC-5 pH值 细胞培养 -
不同浓度山茱萸多糖对HDF细胞衰老的影响
目的 研究不同浓度山茱萸多糖对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF)的影响,探讨制备含山茱萸多糖家兔血清的佳采血时间.方法 选择家兔为对象,制备含山茱萸多糖血清,DMEM培养基培养复制性衰老HDF细胞;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,MTT法检测细胞活力.将HDF细胞分为4组,观察不同浓度含山茱萸多糖家兔血清培养基对衰老HDF细胞细胞活力的影响.结果 血清中山茱萸多糖浓度在给药1.5,2,4 h明显高于给药0.5、11 h(P<0.001),给药2,2.5,3,3.5,4 h高于0.5、11 h(P<0.01),而在给药48,72 h则明显降低(P<0.01).培养基中加入含山茱萸多糖兔血清(SCP)0.5%、1%和1.5%均能提高衰老HDF细胞活力(P<0.01),细胞衰老表型不明显,其中1%SCP组效果好于0.5%,1.5%组.而2%SCP组和 3%SCP组表现明显的细胞生长抑制.结论 制备含山茱萸多糖家兔血清佳取血时间是在给药后1.5～2 h或4 h,山茱萸多糖抗HDF细胞衰老作用效果好的是1%含山茱萸多糖兔血清组.
关键词： 山茱萸多糖 人胚肺二倍体成纤维细胞 衰老 血清 -
黄芪多糖对衰老HDF细胞染色体末端限制性片段长度的影响
目的 探讨黄芪多糖(APS)改善衰老人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF细胞)衰老表型的机制.方法 HDF细胞连续传代培养,形成衰老细胞模型；采用MTT法检测细胞活力；免疫组化法检测β-半乳糖苷酶活性；DNA杂交法检测染色体末端限制性片段(TRF)长度.结果 APS提高衰老HDF细胞活力(P＜0.05),降低了 SA-β-gal表达(P＜0.05)；衰老HDF细胞TRF长度明显缩短(P＜0.05),而APS可使TRF缩短速度降低(P＜0.05).结论 APS可以通过减慢TRF缩短速度,提高衰老HDF细胞活力,发挥抗衰老作用.
关键词： 黄芪多糖 人胚肺二倍体成纤维细胞 衰老 染色体末端限制性片段 -
蜕皮激素对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的 从细胞水平探讨怀牛膝主要活性成分蜕皮激素抗衰老的作用机制。方法 以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料，分为蜕皮激素组和正常对照组，相同条件下传代培养，以生长曲线、MTT法、3 H-TdR掺入法以及流式细胞仪法观察细胞增殖、细胞周期变化及DNA合成情况。结果 同一代龄，蜕皮激素组细胞增殖数、OD490值、PI值、CPM 掺入量等均明显高于对照组。结论 蜕皮激素有较显著的促细胞增殖能力。
关键词： 怀牛膝 蜕皮激素 人胚肺二倍体成纤维细胞 抗衰老 -
淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的干预作用研究
目的 观察淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5)衰老的干预作用与机制,为明确淫羊藿苷作为有效干预衰老的候选中药单体提供实验依据.方法 MRC-5进行体外培养,利用淫羊藿苷进行干预,观察细胞的传代次数;利用β-半乳糖苷酶染色观察衰老细胞阳性率;MTT法检测细胞活力;分别使用单细胞凝胶电泳和流式细胞仪检测H2O2诱导细胞DNA损伤和凋亡变化.结果 淫羊藿苷能够延缓MRC-5细胞的复制性衰老,促进细胞增殖,减轻H222诱导的细胞DNA损伤,促进受损细胞的凋亡.结论 淫羊藿苷能够延缓二倍体细胞的复制性衰老,这可能与其能够减轻细胞DNA损伤有关.
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银杏叶总黄酮延缓细胞衰老的实验研究
目的:研究银杏叶总黄酮(total flavone of Ginkgo biloba,FG)延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的作用.方法:采用含FG的大鼠血清对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,观察2BS细胞寿命;采用荧光实时定量PCR法检测P16基因mRNA的表达.结果:银杏叶总黄酮(FG)能够延长2BS细胞的传代寿命,下调2BS细胞P16基因mRNA的表达.结论:银杏叶总黄酮可通过抑制P16基因表达而延缓细胞衰老.
关键词： 银杏叶总黄酮 细胞衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 荧光实时定量PCR -
脱氢表雄酮抗衰老机制的实验研究
目的 体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(WI-38),从细胞信号转导途径深入研究脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone DHEA)对细胞生长的影响.方法 体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,45代以后细胞应用β-半乳糖甘酶染色方法检测,以阳性细胞比例达到90％以上的细胞为衰老模型;实验分6组,对照组28代,模型组56代,低、中、高剂量组(56代细胞中加入DHEA终浓度分别为5 nmol/ml、50nmol/ml和100 nmol/ml),抑制剂组(56代细胞中加入终浓度为20 nmol/ml PD98059和100 nmol/ml DHEA);四甲基偶氮唑盐(MTr)法观察细胞活力、流式细胞仪检测各组细胞周期、免疫组化检测细胞外调节蛋白激酶(Extra cellular regulated protein kinases,ERK)蛋白表达变化.结果 (1)各组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率均高于对照组(P＜0.01),中剂量组和高剂量组阳性细胞率低于模型组(P＜0.05);除高剂量组外其余四组细胞活力均低于对照组(P＜0.05),中、高剂量组细胞活力高于模型组(P＜0.05); (2)除高剂量组外其余四组G0/G1期细胞比例均高于对照组(P＜0.05),中、高剂量组G0/G1期细胞比例低于模型组(P＜0.05);除中、高剂量组外其余三组S期细胞比例低于对照组(P＜0.05),高剂量组S期细胞比例高于模型组(P＜0.05); (3)除高剂量组外,其余四组ERK蛋白表达IOD值均低于对照组(P＜0.05),中、高剂量组ERK蛋白IOD值高于模型组(P＜0.05).结论 DHEA能够延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老,其作用可能与激活ERK信号转导通路有关.
关键词： 脱氢表雄酮 人胚肺二倍体成纤维细胞 细胞外调节蛋白激酶 衰老 -
补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞增的调控作用
目的:比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞增殖的调控作用.方法:采用含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,观察四种中药对细胞寿命、细胞生长曲线、代谢活力(MTT法)以及衰老细胞生物学标志衰老相关半乳糖苷酶活力的影响.结果:补肾和益气方药能够明显延长衰老细胞的传代次数,促进细胞增殖,使细胞MTT的还原量明显升高,抑制细胞衰老相关半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活力.而健脾、活血方药对细胞增殖的促进作用不明显.结论:细胞衰老时增殖变慢,活力降低,衰老相关半乳糖苷酶活力增高.补肾、益气中药能改善上述衰老变化,健脾、活血药作用不明显.
关键词： 衰老 人胚肺二倍体成纤维细胞 细胞周期相关基因调控 补肾 益气 健脾 活血 -
低功率激光对细胞端粒DNA长度影响的实验研究
本研究目的是探讨低功率氦氖激光对人胚肺二倍体成纤维(2BS)细胞端粒DNA长度的影响.低功率氦氖激光(波长632.8 nm,功率2 mW可调)对年轻2BS细胞进行照射处理,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞生长和增殖的变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)方法检测细胞端粒DNA相对长度.结果表明,激光照射组细胞生长趋势均优于非激光照射组(P＜0.05);2BS细胞在年轻时经激光照射后传代至老年时的端粒长度较对照组的老年细胞端粒长度长(P＜0.05).研究结果提示,经适当激光照射后,细胞端粒DNA因衰老而变短的趋势得到减缓.本研究从基因水平为探讨低功率激光延缓细胞衰老的激光生物效应提供实验依据.
关键词： 氦氖激光 人胚肺二倍体成纤维细胞 端粒长度 实时荧光定量PCR -
人胚肺二倍体细胞KMB17凋亡的形态学发生
无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法,具有简便、快速的特点.用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB17)在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程.结果:无血清诱导后1h,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态;3h后,少数细胞(1%～5%)出现圆缩;6h后,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形,体积缩小.荧光及电镜下可将细胞凋亡从形态上分为两个阶段,第一阶段细胞出现典型的凋亡特征,细胞圆缩、出芽、核染色质凝缩、成块状或新月状分布于核膜边缘;第二阶段,在细胞凋亡晚期出现坏死症状:电镜下整个细胞崩解成碎片.结果表明:无血清培养诱导的凋亡在凋亡的晚期由于营养过度缺乏易出现二次坏死现象.首次报道用于生物制品生产的人胚肺二倍体细胞在无血清诱导下凋亡发生的形态学特征.
关键词： 人胚肺二倍体成纤维细胞 细胞凋亡 形态发生
