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加味五子衍宗方及其活性部位对脂多糖诱导神经炎症反应的抑制作用及机制研究
目的：研究加味五子衍宗方及其活性部位对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及潜在机制。方法通过大孔树脂柱,将加味五子衍宗方乙醇总提取物洗脱分离得到水提组、20%醇提组、50%醇提组、70%醇提组和95%醇提组5个部位。针对无细胞毒性的部位研究了其对炎症因子一氧化氮和炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶,环氧合酶-2表达的影响,明确了抗炎活性部位,同时进一步研究了活性部位对核转录因子的激活以及活性氧表达的调控作用。结果70%醇提组和95%醇提组对细胞具有毒性,其余各部位(水提组,20%醇提组,50%醇提组)均无细胞毒性且表现出一定的抗炎活性。其中50%醇提组抗炎活性优,甚至高于复方组。结论加味五子衍宗方的抗炎活性部位可能主要富集于50%醇提部分,其抗炎活性可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应以及抗氧化应激实现的。
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加味五子衍宗方及其有效部位对H2O2损伤PC12细胞的保护作用
目的:比较加味五子衍宗方及其有效部位总黄酮和总多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响.方法:噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞存活率和细胞毒性,酶标仪测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的浓度.结果:预先给予500 μg穖L-1加味五子衍宗方,总黄酮和总多糖处理细胞2 h,可显著提高细胞存活率及SOD和CAT活性,降低LDH,MDA水平;加味五子衍宗方及总黄酮还可有效抑制凋亡的发生,并可明显降低细胞内Ca2+浓度,总黄酮的效果强于五子衍宗方及总多糖.结论:加味五子衍宗方能显著抑制H2O2诱导的PC12细胞氧化应激状态及凋亡发生,其主要活性成分是总黄酮,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞脂质过氧化水平,提高抗氧化酶活力和抑制细胞内Ca2+浓度升高有关.
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加味五子衍宗方抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究
目的:研究加味五子衍宗方(MWP)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及潜在机制.方法:体外培养BV-2小胶质细胞系,用LPS(1 mg·L-1)诱导炎症模型,将细胞分为空白对照组,炎症模型组和MWP药物组,药物组MWP设置50,100,200 mg·L-13个质量浓度.LPS和药物处理细胞后分别检测各组细胞炎症因子一氧化氮(NO)的表达、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),环氧合酶-2(COX-2)的表达、核转录因子-κB(NF-κB)核转位以及还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性和活性氧(ROS)的表达.结果:MWP可剂量依赖性降低LPS激活的BV-2小胶质细胞内iNOS,COX-2的蛋白表达和NO的释放,抑制NF-κB的核转位,此外还可剂量依赖性降低NADPH氧化酶活性并明显降低ROS的产生.结论:MWP可有效抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应,可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应以及NADPH氧化酶介导的氧化应激实现的.
关键词： 神经炎症 BV-2小胶质细胞系 加味五子衍宗方 抗炎 神经保护 -
加味五子衍宗方对Aβ25-35所致的PC12细胞tau蛋白高度磷酸化的抑制作用及机制
目的:研究加味五子衍宗方对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ<,25-35>)所致的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)中的微管相关蛋白(tau蛋白)高度磷酸化的抑制作用和潜在机制.方法:将PC12细胞分为正常对照组、模型组、给药组,使用Aβ<,25-35>,(30 μmol·L-1)诱导PC12细胞的tau蛋白高度磷酸化,并同时加入加味五子衍宗方提取物(50～400 mg·L-1)作用细胞24 h,然后考察加味五子衍宗方对PC12细胞tau蛋白高度磷酸化的抑制作用.结果:加昧五子衍宗方单独作用细胞后,无明显毒性作用.但是加味五子衍宗方可以显著的抑制Aβ<,25-35>,所诱导的神经毒性,细胞存活率由损伤组的70%±4.9%提高到治疗组的98%±6.5%(P<0.01);且凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达也受到了显著性的抑制,分别从损伤组的378.15%±34.65%和985.12%±45.32%降低到治疗组的127.65%±12.65%和543.61%±39.07%(P<0001).此外,PC12细胞中tau蛋白的高度磷酸化也出现了显著下调,Ser396位点的磷酸化水平从损伤组的130.01%±5.83%降低到治疗组的113.75%±6.34%(P<0.01),Ser404位点的磷酸化水平从损伤组的150.17%±10.28%降低到治疗组的105.37%±4.57%(P<0.01),其机制可能是通过抑制糖原合酶激酶(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)在Ser9位点的磷酸化以及促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的磷酸化来实现的.结论:加味五子衍宗方可以有效的抑制Aβ<,25-35>所致的PC12细胞中tau蛋白的高度磷酸化,具有潜在的治疗阿尔茨海默病的作用.
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基于基因芯片分析研究加味五子衍宗方对SAMP8小鼠大脑神经内分泌-免疫微环境的调控作用
目的 研究加味五子衍宗方(modified wuzi-yanzong prescription,MWP)对早老化痴呆小鼠SAMP8(senescence acceleratedmouse-prone/8,SAMP8)全脑基因表达谱的影响,以探究加味五子衍宗方治疗痴呆性疾病的相关作用机制.方法 6只SAMP8早老化痴呆小鼠随机平均分为模型组(model group)和加味五子衍宗方处理组,3只正常对照小鼠SAMR1(senescenceaccelerated mouse-resistance/1,SAMR1)作为空白对照组(blank group),加味五子衍宗方组连续灌胃加味五子衍宗方9g·kg-1· d-1,空白组和模型组灌胃同体积羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na),10 d后取出全脑,进行全基因组表达谱分析.结果 与模型组比较,加味五子衍宗方组筛选出293个差异基因,其中上调基因179个,下调基因114个.基因本体论(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库分析涉及神经干细胞增殖分化的关键靶点有17个,包括Notch通路、Rap1/B-Raf/ERK通路、以及相关靶标蛋白,涉及神经-内分泌-免疫(neuro-endocrino-immune,NEI)网络调控的关键靶点有9个,包括促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH),黄体化激素(luteinizing hormone,LH),催乳素通路(prolactin),促甲状腺激素通路(thyroid stimulating hormone,TSH)等.结论 加味五子衍宗方对SAMP8早老化痴呆小鼠大脑影响机制涉及神经干细胞增殖分化和NEI网络调控.
关键词： 基因芯片 加味五子衍宗方 SAMP8小鼠 神经干细胞 神经-内分泌-免疫网络系统 -
加味五子衍宗方及其有效组分对记忆障碍小鼠空间行为的影响
目的:研究加味五子衍宗方及其有效组分对东莨菪碱所致记忆获得障碍模型动物空间学习记忆能力的影响.方法:用加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖分别灌胃15 d,氢溴酸东莨菪碱腹腔注射制备小鼠记忆获得障碍模型,以全自动Morris水迷宫实验测试系统检测定位航行实验中动物逃避潜伏期和搜索距离,随后检测空间探索实验中动物在原平台所在象限搜索的时间、距离及其占总时间、总距离的百分比,以评价动物空间学习记忆表现.结果:加味五子衍宗方及组分总黄酮、总多糖均能明显缩短模型小鼠在Morris水迷宫定位航行实验中的逃避潜伏期(P均<0.01),减少搜索距离(P均<0.01);显著增加动物在空间探索实验中于原平台所在象限搜索的时间百分比及距离百分比(P均<0.05).结论:加味五子衍宗方及有效组分能改善东莨菪碱所致记忆获得障碍模型动物的空间学习记忆成绩,对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用.
