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环介导等温扩增技术及其在肝炎病毒检测中的应用
环介导等温扩增技术LAMP法(Loop-Mediated Isothermal Amplification)是近年来发展起来的新的核酸扩增技术,与传统的核酸扩增方法相比,它具有高特异性、高效性、快速、操作简便等特点.目前在病原微生物检测、食品安全、环境监测等方面有广阔的应用前景,本文就环介导等温扩增的原理、技术特点及在肝炎病毒检测中的应用进展进行综述.
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LED 手术无影灯:节能照明潮产品
手术无影灯是手术室中重要的医疗设备之一,医护人员通过无影灯的使用,实现在患者施术部位无阴影照明的目的,从而帮助医生清晰地分辨病灶组织,顺利地完成手术.
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金银花中几种分子的真伪鉴别方法比较及其研究进展
中药材的真伪对于中医临床用药具有至关重要的作用。作为中药鉴定的重要组成部分，DNA分子标记技术已越来越广泛地应用于中药材的真伪鉴别。近年来，涌现出许多中药分子鉴定新方法，但对于这些新方法的系统比较分析尚未见报道。本文以药材金银花真伪鉴别为例，比较了表达序列标签-简单重复序列多态性、聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性、位点特异性PCR、DNA条形码技术和环介导等温扩增技术的原理、特点、检测方法以及检测时间和应用范围等，并针对各方法的缺陷提出相应的改进措施，以期筛选到适合金银花快速真伪鉴别的方法，也为其他中药材分子鉴别研究提供示范。
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基于12S序列的蛤蚧LAMP快速鉴定方法
蛤蚧为我国名贵动物中药材,为建立蛤蚧的LAMP可视化检测方法,实现其与混伪品的高效特异鉴别,该研究通过MEGA 6.0分析蛤蚧与其13种混伪品共65条12S rRNA序列,在线设计LAMP引物,并优化扩增条件,考察反应灵敏度,对蛤蚧及其混伪品进行鉴别验证.结果表明,基于12S rRNA序列的蛤蚧及其13种混伪品均可通过BLAST比对准确区分.蛤蚧12S rRNA序列较为保守,10批次30条序列在引物设计区仅含2条单倍型和3个变异位点,成功设计了6条LAMP特异引物.64℃反应1h,80℃灭活5 min,即可完成蛤蚧的可视化检测,低检测浓度为5μg·L-1,高于传统PCR 2个数量级.该方法特异性强、灵敏度高、检测方便、反应时间短,且闭管操作,避免了污染,可实现蛤蚧与混伪品的快速可视化鉴别.
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LAMP的影响因素及其检测寄生虫的研究进展
本文从靶标基因选取、样本采集及处理、LAMP反应、产物检测等方面综述了环介导等温扩增法检测过程中的影响因素及其在寄生虫检测方面的研究进展.
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LAMP技术及其在病原基因诊断中的应用
环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种独特的核酸扩增技术,与PCR有所不同.本文从原理、反应环境、结果判读、优缺点、影响因素、应用范围及发展前景上对其进行了概述.
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POCT技术在传染病病原检测中的应用
传染病病原的即时快速检测对于传染病预防控制具有重要意义。与传统的检测方法相比，现场检验（ POCT）检测具有操作简单、反应快速、设备便携等优势，近年来得到了迅速发展和广泛应用。该文重点阐述了环介导等温扩增（ LAMP）技术、微流控芯片技术及生物传感器技术在传染病病原POCT检测中的应用研究进展，并进一步阐述了上述技术的联用在POCT检测方面的应用。
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BioSunLAMP:一个用于环介导等温扩增的引物设计软件
目的 环介导等温扩增法(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型等温核酸扩增方法.由于其具有简便、高效、特异性高和成本低等优点,在甲型HlNl流感和肺结核等流行病检测中得到了广泛应用.在LAMP技术中,关键的起始步骤是设计合适的引物序列.为了让引物设计更加方便与高效,我们开发了LAMP引物设计软件BioSunLAMP.方法 采用Delphi程序设计语言开发了界面友好、便于使用的软件系统.结果 经甲型HlNl流感、结核分枝杆茵实验验证,BioSunLAMP软件设计的引物达到了预期效果.此外,与同类软件相比,BioSunLAMP还具有如下特点:①集引物设计与引物特异性分析于一体,可以通过本地数据库或远程调用NCBI的相关数据库来检查引物特异性;②支持针对多序列的通用引物与特异引物设计.结论 BioSunLAMP软件的开发,为LAMP技术的普及提供了很好的生物信息学支持.
关键词： BioSunLAMP LAMP 引物设计 -
实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立
目的 建立一种能够应用于实验动物金黄色葡萄球菌检测及鉴定的环介导等温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)方法.方法 本研究针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4条引物,对反应条件进行优化.结果 通过优化,该方法60℃、40 min、Mg2+浓度8 mmol/L、dNTP浓度2.0 mmol/L、甜菜碱浓度0.8mmol/L时,对金黄色葡萄球菌检测限为2 cfu,且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应.反应结果可通过添加荧光染料SYBRF green Ⅰ直接肉眼观察.结论 本研究建立的金黄色葡萄球菌LAMP方法具有快速、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适用于基层、大批量样本、快速检测的要求.
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多种埃博拉病毒检测技术在塞拉利昂的应用比较
2013年底西非暴发埃博拉疫情并迅速蔓延,塞拉利昂成为疫情严重的国家之一.我们第二批援塞移动实验室检测队按照中国的统一部署,赴塞拉利昂执行埃博拉病毒实验室检测任务.塞拉利昂卫生基础设施落后,为了找到适合该国国情的埃博拉病毒检测方法,我们比较了荧光定量PCR法、胶体金法、环介导恒温扩增法(LAMP)、重组酶聚合酶扩增法(RPA)在埃博拉病毒检测中的应用效果.通过对比实验,我们的结论是:荧光定量PCR法作为目前检测的金标准,其地位不可撼动;胶体金法因较低的敏感性不适合应用于埃博拉病毒的检测;2种恒温扩增法—LAMP法和RPA法因其操作简单且不需要复杂的仪器设备,显示出了良好的应用前景,尤其适用于卫生条件比较落后的非洲国家.
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青光眼滤过手术后早期裂隙灯下眼球按摩效果观察
青光眼是一种以眼压增高、视功能障碍为特征的常见眼病[1],滤过手术是多种类型青光眼手术治疗方法之一,其目的是通过建立新的房水引流途径使服压降至正常水平[2].
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LAMP技术开发Web应用程序优越性的探讨
Linux+Apache+MYSQL+PHP(缩写LAMP)是一组常用来搭建动态网站或者服务器的开源软件,本身都是各自独立的程序,但是因为常被放在一起使用,拥有了越来越高的兼容度,共同组成了一个强大的Web应用程序平台.本文针对LAMP技术开发Web应用程序优越性进行探讨.
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环介导等温扩增技术在弓形虫感染小鼠腹腔液检测中的应用
目的 环介导等温扩增(LAMP)检测弓形虫感染小鼠腹腔液的反应条件及反应体系的优化与筛选.方法 建立弓形虫感染小鼠模型,酚氯仿法抽提小鼠腹腔液DNA作为反应模板,在弓形虫大小为529 bp的高度重复序列中选择一段靶序列设计内外引物,建立LAMP反应并对反应体系及条件中Mg2+、甜菜碱及反应温度条件进行优化.结果 所建立的LAMP反应以Mg2+浓度和反应温度影响较为明显,而甜菜碱浓度变化的影响不大,优化后的LAMP反应体系能够特异性扩增弓形虫感染小鼠的腹水微量DNA,且对日本血吸虫、肝吸虫及盾盘吸虫的DNA的扩增显示为阴性.结论 以弓形虫529 bp建立并优化后的LAMP技术可以检测到弓形虫微量DNA,并且具有较好的特异性,可对人体弓形虫轻度感染诊断技术的建立提供一定的科学依据.
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LAMP技术在大学生弓形虫感染情况调查中的应用效果评价
目的 探讨环介导等温扩增(LAMP)技术在大学生弓形虫感染情况调查中的应用评价.方法 随机选择2015—2017年本院检验专业学生共247人,抽取1 ml静脉血,离心取上清,采用氯仿-异戊醇方法提取DNA作为反应模板,以弓形虫529 bp序列为基础设计引物,进行LAMP扩增,同时采用ELISA方法进行IgG抗体检查,比较分析二者的检测结果.结果 247名学生的弓形虫检测中,采用LAMP方法检测的阳性率为4.45％,采用ELISA检测的阳性率为6.48％,其中9例LAMP和ELISA检测的IgG均为阳性.结论 LAMP技术可与ELISA联合检测,为临床弓形虫病的早期诊断提供了研究思路.
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Wood灯在皮肤浅表真菌感染诊断中应用价值评估
目的 评估Wood灯在皮肤常见浅表真菌感染诊断中的应用价值.方法 对129例根据临床病史及体征初步诊断为皮肤浅表真菌感染患者进行Wood灯和真菌实验室检查.结果 花斑糠疹、马拉色菌毛囊炎患者Wood灯检查的阳性率分别为84%、85.7%,同时阳性病例的真菌培养或镜检的阳性率达92.9%、87.5%,两者有高度的一致性.而临床诊断手足癣和体股癣者其荧光阳性率只有8.3%.真菌总检出率却高达85.4%(41/48),两者不具有一致性.结论 Wood灯在花斑糠疹、马拉色菌毛囊炎的检查上有较高的特异性和敏感性,临床诊断上有应用价值,而对手足癣和体股癣诊断则无意义.
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2015年武汉市蔡甸区九沟村血吸虫病疫情监测结果分析
目的 掌握武汉市蔡甸区九沟村血吸虫病疫情动态,为制定防治措施提供依据.方法 按全国血吸虫病监测方案(2014年版)的要求,对武汉市蔡甸区国家级监测点内居民进行血吸虫感染间接血凝试验(IHA)筛查,阳性者再进行病原学检测(尼龙绢集卵孵化法和Kato-Katz法),并同时检测血吸虫抗原(ELISA)和核酸(LAMP).系统抽样结合环境抽查法调查螺情.结果 人群查病共516人,抗体(IHA)、抗原(ELISA)、核酸(LAMP)和病原学(尼龙绢集卵孵化法和Kato-Katz法)检测阳性率分别为10.5%(54/516)、2.52%(13/516)、1.36%(7/516)和0.39%(2/516).活螺平均密度0.0479只/0.11m2,检查钉螺301只,未发现感染性钉螺.结论 在血吸虫病低度流行区,可以采用血清学、核酸和病原联合检测,掌握血吸虫病疫情,提高血吸虫病监测预警敏感性.
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快速检测猪链球菌的环介导等温扩增方法
目的 建立猪链球菌(S.suis)的环介导等温扩增方法(LAMP).方法 通过BLASTn序列比对确定较为保守的S.suis种特异基因,用软件PrimerExplorer V4设计针对靶基因的LAMP试验引物;分别用煮沸法和试剂盒提取法提取基因组做敏感性试验,并用62株非S.suis菌株评价了实验的特异性;再用100株分离自不同地区不同时间的S.suis菌株评价该方法的可靠性.结果 确定了S.suis种特异性基因dnaN为靶基因,并针对该基因建立了检测S.suis的LAMP方法.敏感性实验中,每个反应的检测下限是31.25 fg纯DNA,相当于14个拷贝;煮沸法的检测下限是每个反应27 CFU.在对62株非S.suis菌株与有争议的S.suis菌株的特异性评价实验中,未发现有假阳性.结论 成功建立了针对dnaN基因检测S.suis的LAMP方法.
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环介导等温扩增技术在嗜水气单胞菌检测中的应用
目的 建立环介导等温扩增技术(Loop mediated isothermal amplification,LAMP)对嗜水气单胞菌检测的方法,并用临床标本对该方法进行评价.方法 根据嗜水气单胞菌desA基因的保守序列设计特异性引物,利用参考质粒评价该检测体系的灵敏度;用30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性;用粪便模拟样本以及临床样本评价该检测体系的临床检测的可行性.结果 LAMP检测体系对嗜水气单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;LAMP检测体系在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现假阳性;LAMP检测体系在粪便模拟标本中的检测下限为5×103 CFU/g;通过与qPCR技术相比较,LAMP具有更高的灵敏度以及更优秀的临床标本的检测能力.结论 本研究建立的LAMP方法是首次将LAMP技术运用到了嗜水气单胞菌的检测,所需仪器设备简单,可作为一种快速的筛查方法在临床检验和基层实验室应用.
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环介导等温扩增技术及其在食源性吸虫感染检测中的应用
随着人们生活水平的提高,土源性寄生虫病的感染率和发病率日趋下降,与之相反,食源性寄生虫病更加引入关注,而食源性吸虫病是其中的重要组成.据WHO统计,目前已知能感染人体的食源性吸虫有100多种,感染者超过4000万人,还有10％的人口面临感染食源性吸虫的风险.目前对于腔道内寄生的食源性吸虫通常采用病原学诊断方法,但对于深部组织内寄生的食源性吸虫则缺乏有效的诊断方法.环介导等温扩增(LAMP)技术是新近发展起来的一种方法,它具有简便快速、灵敏特异、经济实用、且易于普及等优点,有替代传统PCR之势.但国内对LAMP法的了解和应用不多,基于其在食源性吸虫感染方面的诊断价值,本文予以介绍,以供借鉴.
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LAMP(环介导等温扩增)的原理及在寄生虫检测上的应用
2000年,Notomi等[1]建立了一种快速、简单、灵敏、特异并且低成本的核酸扩增方法——环介导等温扩增法(LAMP),这种新颖的核酸扩增方法具有许多优势[2.4]:(1)扩增效率极高,60min内扩增产物可达到靶基因的109～1010倍;(2)操作简单,只需在65℃左右的恒温条件下将反应物混合即可,不需要复杂的温度变化过程;(3)灵敏性高,扩增模板只需10拷贝或更少;(4)特异性高,设计4条引物识别靶基因上6个不同区域;(5)结果判定简单,可以通过反应副产物直接肉眼观察,也可以通过浊度仪实时监控,无需电泳.
