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逆转录-环介导等温扩增方法检测甲型H1N1流感病毒
2009年3月墨西哥暴发"人感染猪流感"疫情,造成人员死亡.研究发现,此次疫情的病原为变异后的甲型H1N1流感病毒,甲型H1N1流感病毒属于正黏病毒科(orthomyxoviridae),甲型流感病毒属(influenza virus A).该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段,可以在人间传播.
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环介导等温扩增过程监测与结果分析技术研究进展
2000年,Notomi等[1]建立了一种新颖的核酸扩增方法-环介导等温扩增(loop -mediated isothermal amplification,LAMP).该技术利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域,在恒温条件进行反应,不需要模板的热变性和长时间温度循环.较之于传统的PCR方法,其不但简便、快速、不需要昂贵的仪器设备,适合现场使用、特异性好,而且甚至可以免模板DNA提取操作,因此解决了基于核酸的分子生物学检测技术的诸多难题,使快速、廉价诊断成为可能[2-6].近年来,LAMP技术在微生物检测及动物胚胎性别鉴定等很多领域得到广泛的研究与应用.比如在日本,其已成为病原微生物常规检测的官方推荐手段[6 ].
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LAMP(环介导等温扩增)的原理及在寄生虫检测上的应用
2000年,Notomi等[1]建立了一种快速、简单、灵敏、特异并且低成本的核酸扩增方法——环介导等温扩增法(LAMP),这种新颖的核酸扩增方法具有许多优势[2.4]:(1)扩增效率极高,60min内扩增产物可达到靶基因的109~1010倍;(2)操作简单,只需在65℃左右的恒温条件下将反应物混合即可,不需要复杂的温度变化过程;(3)灵敏性高,扩增模板只需10拷贝或更少;(4)特异性高,设计4条引物识别靶基因上6个不同区域;(5)结果判定简单,可以通过反应副产物直接肉眼观察,也可以通过浊度仪实时监控,无需电泳.
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心肌干细胞的体外扩增方法研究
目的 探索Sca-1+心肌干细胞的分离及体外扩增方法.方法 采用免疫磁珠方法分离小鼠Sca-1+心肌干细胞,以DMEM培养基为基础培养基加上SCF、LIF、B27、EGF进行培养,通过流式细胞仪检测Sca-1+表达.通过公式计算其扩增效率,并对扩增细胞的分化功能进行评估.结果 与结论Sca-1+心肌干细胞在扩增后数量可以多增加1倍,阳性率维持在90%左右,扩增效率为180%.