转基因动物在接触性超敏反应研究中的应用

接触性皮炎(contact dermatitis,CD)是常见的职业性皮肤疾病,国外统计职业性接触性皮炎大约占了所有职业性皮肤病的90％～95％[1],接触性皮炎分为刺激性接触性皮炎(irritant contact dermatitis,ICD)和过敏性接触性皮炎(allergy contact dermatitis,ACD).ACD的主要发病机制为接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS),是一种抗原递呈细胞依赖的,主要由T细胞介导的对外来半抗原产生的皮肤免疫反应.当皮肤暴露于特异小分子半抗原时,这些半抗原化学物与内源性蛋白结合形成完全抗原,经过表皮朗格汉斯细胞(langerhans cell,LC)摄取和加工修饰后迁移至皮肤引流淋巴结(draining lymph node),递呈给初始T细胞,刺激T细胞增殖活化.当皮肤再次接触相同抗原,大量记忆性T细胞被激活并产生细胞因子和趋化因子,迁移至炎症部位,造成组织损伤[2].

转基因食品致敏性评价

转基因食品又称基因改性食品,是基因工程技术迅速发展的产物,在给人类带来更加丰富的食品供应和巨大的经济利益的同时,转基因食品的安全性问题成为一个研究热点,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一,特别是如果转入的蛋白质是新蛋白质时,这些异性蛋白质就有可能引起食物过敏,对儿童和体质过敏的人更是如此.一个典型的例子就是对巴西坚果过敏的人对转入巴西坚果基因后的大豆也产生了过敏[1].因此,转基因食品致敏性评价研究日益受到人们的重视.

牙周组织工程中动物模型的研究进展

牙周病是由菌斑生物膜等因素诱发的感染性炎症疾病,可引起牙周组织结构的破坏.临床上,常采用牙周基础治疗、引导组织再生术、植骨术、釉基质衍生物等治疗,效果均不理想.近年来,牙周组织工程的出现为牙周再生开辟了新的空间,其研究内容包括干细胞、支架材料及相关生物因子.不同种子细胞、支架材料及细胞因子复合物的构建需要动物的体内实验来验证.因此,合适的动物模型的建立,可为评价牙周组织再生提供可靠的实验依据.本文就牙周再生模型中常用的动物种类特点、构建方法作一综述.

颞下颌关节强直动物模型的研究状况

通过动物模型的方法来探索颞下颌关节强直(temporomandibular joint ankylosis,TMJA)的病因和病理机制是一种重要的研究方法.已有TMJA模型的主要选择动物是小型猪和绵羊.制作TMJA的方法包括手术造模、注射关节促炎症因子和咬合紊乱模型三种方法.目前建立的TMJA动物模型尚不理想,在诱导骨性强直上都还有所不足,因此寻找更加贴近临床的模型是未来的研究方向.

抗胆碱药物对抗梭曼所致惊厥的药理学研究

目的建立梭曼所致大鼠典型惊厥模型,探讨不同抗胆碱药物在惊厥发生发展不同阶段的抗惊效果.方法梭曼所致清醒大鼠惊厥模型的建立.大鼠皮层及海马部位慢性埋藏电极后8～11d给予HI-6 125mg/kg腹腔注射,30min后皮下注射梭曼180μg/kg,建立梭曼致惊清醒动物模型,采用四导电生理记录仪记录惊厥波.在建立可靠梭曼致惊模型基础上,观察不同剂量阿托品、东莨菪碱、苯那辛、盐酸戊乙奎醚、盐酸苯环壬酯于惊厥发作后不同时间腹腔注射时的抗惊疗效,以惊厥波消失2 h未复发为惊厥控制指标.

怡诺尼康致小鼠肝损伤模型试验研究

结核病是目前由单一致病菌导致死亡多的疾病,是全球关注的重大公共卫生问题之一.据世界卫生组织报道,目前全球有近1/3的人已感染结核杆菌,也就是近20亿人口.我国是全球22个结核病高负担国家之一,活动性结核病人数居世界第二位,感染人数达全国人口的44.5％[1].随着科学技术的发展,研究人员已经研制出数十种有效的抗结核药物,其中异烟肼(H)、利福平(R)、吡嗪酰胺(Z)3种一线抗结核药物均会造成药物性肝损伤.药物性肝损伤指由各类处方或非处方化学药物、生物制剂以及保健品等所诱发的肝损伤[2-6].

小鼠胃插管模型制备方法探讨

胃插管动物模型能较准确地经胃给予动物药物或营养成分,在毒理学、药理学和营养学等动物实验研究中有重要地位.为方便胃插管手术,一般用狗、兔和大鼠等[1,2]较大型的动物制备,但由于小鼠是常用的实验动物,并且小鼠的抗体也远比其他实验动物丰富,新近发展起来的转基因和基因敲除动物也多为小鼠,所以为方便开展进一步深入细致的研究工作,采用小鼠制备胃插管动物模型将是发展趋势,但由于小鼠个体小,手术难度较大,目前开展这一技术的研究报道不多,国内尚未见报道.我们参考Kono等[3]研究报道成功建立了小鼠胃插管模型,报道如下.

阿尔茨海默病动物模型的制备方法

目的探讨以AlCl3鞘内注射法和AlCl3、D-半乳糖腹腔注射法建立阿尔茨海默病(AD)动物模型的可行性.

有机磷农药一敌敌畏诱导大鼠尿道下裂的实验

目的研究使用广泛的一种有机磷农药-敌敌畏可能诱导的尿道下裂.

评价前庭功能的整体动物模型/壬基酚对体外培养大鼠Setoli细胞的毒性作用/影响阿片催促戒断反应的实验条件

建立糖尿病心肌病动物模型方法的实验研究

目的 研究建立糖尿病心肌病动物模型的科学、实用的方法.方法 应用链脲佐菌素对SD大鼠进行一次性腹腔注射,通过观察大鼠的一般状况、进食量、进水量、尿量、体重的变化,监测血糖、尿糖、心肌酶含量、胰岛素水平、心肌超微结构、心脏大血管内膜情况及心电图情况来评估糖尿病心肌病的发病情况.结果 腹腔注射STZ 3周后,模型组大鼠出现病态表现,进食量、饮水量、尿量增加,体重下降.血糖值、尿糖值及肌酸激酶、乳酸脱氢酶值均较对照组大鼠升高.胰岛素水平较对照组明显降低,心肌超微结构符合糖尿病心肌病表现,心脏大血管未见纤维斑块和粥样斑块.结论 对SD大鼠进行一次性腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg),大鼠于注射后第3周可出现稳定的糖尿病心肌病状态.这是一种可靠且实用性强的糖尿病心肌病动物模型的制备方法.

互隔交链孢霉诱导小鼠气道变态反应性炎症动物模型的构建

目的 研究使用互隔交链孢霉孢子构建C57BL/6小鼠肺部变态反应性炎症模型的方法.方法 模型组、阳性对照组和阴性对照组各12只小鼠.模型组以互隔交链孢霉孢子悬液致敏和激发小鼠,分别于第0、5、10天腹腔注射霉菌孢子悬液,第14天开始连续4天鼻滴霉菌孢子悬液.阳性对照组以鸡卵蛋白(OVA)代替霉菌孢子,阴性对照组以磷酸缓冲液(PBS)代替霉菌孢子.进行肺组织病理检查,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数分类和总蛋白浓度测定,ELISA测定BALF中的白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)及血浆中的总IgE和特异性IgE,测定小鼠气道阻力.结果 模型组和阳性对照组可见明显炎症细胞浸润,特别是嗜酸性粒细胞,而阴性对照组则未见.BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞比例较阴性对照组明显升高(P<0.05);BALF上清中IL-4、总蛋白水平较阴性对照组明显升高(P<0.05),IFN-γ水平较阴性对照组降低(P<0.05).血浆中总IgE和特异性IgE较阴性对照组明显升高(P<0.05).小鼠气道阻力较阴性对照相比有明显升高(P<0.05).结论 使用互隔交链孢霉孢子致敏和激发C57BL/6小鼠成功的建立了小鼠气道变态反应性炎症模型.

经口致敏食物过敏大鼠模型的建立

目的 探讨经口致敏食物过敏大鼠模型的建立方法,以及适宜的评价指标.方法 以卵清蛋白(OVA)作为致敏原,将16只3周龄Brown.Norway(BN)大鼠随机分为3组:阴性对照组(生理盐水灌胃)、阳性对照组(OVA腹腔注射组)和实验组(OVA灌胃组),共灌胃9周.在第4、5、6、7、8、9周分剐采用双抗体夹心ELISA法及皮肤过敏实验法(PCA)测定实验动物血清OVA特异性IS(OVA-IgE)抗体滴度,以判断动物是否致敏成功,在第13周各组动物给予100mg/ml OVA 1 ml灌胃激发后测血清OVA-IgE滴度.结果 ELISA结果显示在灌胃第6周时实验组动物OVA-IgE滴度水平达到高,且显著高于阴性对照组(P<0.05),致敏丰为60%(3/5);第7、第8周时OVA-IgE滴度水平略有下降,但是仍然显著高于阴性对照组(P<0.05),致敏率达到80%(4/5),OVA-IgE水平和致敏率与阳性对照组之间差异无显著性;实验组PCA结果在第6、7、8周均显示为阴性,而阳性对照组PCA显示为阳性.结论 经口致敏可作为一种可行的建立食物过敏动物模型的方法,符合食物过敏发生的自然生理过程,建议适宜致敏时间为6周;采用ELISA法检测血清OVA-IgE抗体水平较PCA法能更加灵敏地反映经口致敏模型是否成功.

食品致敏性评价啮齿类动物模型研究-C3H/HeJ小鼠动物模型

目的 研究C3H/HeJ小鼠作为食品致敏性评价动物模型的可行性,探讨不同致敏途径适当的致敏周期以及辅助性T淋巴细胞因子的变化.方法 通过经口灌胃及腹腔注射两种途径给予雌性C3H/HeJ小鼠致敏蛋白-卵清蛋白(OVA),共35天.分别在第14、28、35天内眦取血分离血清,测定OVA特异性IgE.于第35天取脾脏,荧光实时定量PCR检测Th2型细胞因子IL-4及Th1型细胞因子IFN-Υ的mRNA表达水平.结果 与阴性对照组相比,经口灌胃OVA组小鼠第28和35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P<0.05);腹腔注射OVA+Al(OH)3组小鼠第14、28和35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P<0.05).与阴性对照组相比,OVA组与OVA+Al(OH)3组小鼠细胞因子IL-4的表达水平均显著升高;细胞因子IFN-Υ的mRNA表达水平均显著降低.结论 C3H/HeJ小鼠可以作为食品致敏性评价动物模型,经口灌胃途径及腹腔注射途径的佳致敏周期分别为14天和28天.

三代繁殖低硒和低硒低碘大鼠动物模型的建立

目的 建立三代繁殖低硒大鼠动物模型,为了进一步系统研究低硒对大鼠脑神经智能、心血管、骨软骨、免疫器官,生长发育以及生育、衰老的影响提供研究用动物模型.方法利用低硒酵母为主要原料人工配制半合成饲料喂养大鼠并连续繁殖到第三代,历时一年半.原代动物选用健康断乳后封闭群SD大鼠60只,体重平均值为(50±5)g.作为F0代,五组大鼠分别为1.合成饲料对照组(硒水平0.1～0.3μg/g,碘水平≥0.2μg/g),2低硒一组(硒水平0.02μg/g,碘水平≥0.2μg/g),3.低硒二组(硒水平0.005μg/g,碘水平≥0.2μg/g), 4.低碘组(硒水平0.1～0.3μg/g,碘水平0.04μg/g),5.低硒低碘组 (硒水平0.01μg/g,碘水平0.04μg/g);雌雄分笼饲养.F1、F2、F3的分组为:取消低硒二组,低硒低碘组饲料中硒水平同单纯低硒组、碘水平同单纯低碘组,余同原代.雌雄分笼饲养.每代大鼠检测血清硒水平、全血GPX活性,血清总T3、T4、TSH水平,同时对各代仔鼠生长发育期体重、分娩数、新生鼠存活数等进行了观察.结果发现人工半合成低硒饲料可持续保持大鼠低硒状态,使血清硒值在三代繁殖大鼠中维持低水平;全血GPX活性保持低水平;低硒大鼠分娩数、新生仔鼠存活率下降,体重减轻、被毛发育差;联合低硒低碘组动物也有类似的结果,且分娩数、新生仔鼠存活率下降更明显.结论建立长期低硒三代繁殖大鼠动物模型,为进一步的功能影响与分子病理研究提供了重要的实验材料.

神经元烟碱乙酰胆碱受体受阻滞所致早老型痴呆动物模型的建立

海马区内注射K-银环蛇毒素(K-BGT)可造成小鼠学习记忆明显障碍,以建立早老性痴呆(AD)患者学习记忆缺损模型.对小鼠的损害作用随K-BGT剂量增加而明显增加.水迷宫多项指标测试结果表明,K-BGT损害组小鼠与对照组小鼠相比,空间学习和记忆能力显著下降.明暗回避反应实验结果也表明,K-BGT损害小鼠潜伏期明显缩短,错误次数增多;两种检测方法均表明K-BGT可导致小鼠学习记忆明显障碍,而且这种损害具有持久的作用.

蛋白过敏性研究--BN大鼠动物模型

目的用BN大鼠模型探讨不同蛋白的过敏性.方法通过腹腔注射(1 mg/ml)或口服(10mg/ml)给予BN大鼠卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA),时间为6周.在不同时间取血清,进行被动皮肤致敏试验(PCA);分离血浆进行组胺测定;此外,对OVA组和对照组的大鼠进行血压测定.结果PCA试验结果表明OVA特异性IgE抗体滴度较高(1/32～1/128),而BSA特异性IgE抗体滴度较低(1/2～1/4).与对照组相比,腹腔注射或口服OVA均使组胺水平升高.口服OVA对大多数大鼠的血压没有明显的影响,然而,有2只大鼠收缩压暂时降低.结论该研究结果表明BN大鼠模型可能是一种较理想的蛋白过敏性模型.

低硒、低碘模型大鼠F2代生殖功能评价

目的 探讨硒、碘缺乏模型动物对F2代雌性、雄性生殖功能的影响.方法 采用自制人工合成饲料,利用SD大鼠建立低硒、低碘及硒碘联合缺乏动物模型,确定动物模型建立成功后,利用该模型进行大鼠的三代繁殖试验及模型稳定性监测.观察F2代模型大鼠精子形态、血清睾酮、睾丸和附睾组织病理及透射电镜超微结构的改变;检测F2代模型孕鼠生育指标、胎仔骨骼及内脏发育指标,探讨硒、碘缺乏对F2代模型动物雌性、雄性生殖功能的影响.结果 经各项指标检测,三代繁殖试验中动物模型稳定性良好.通过对雄性F2代模型动物大鼠的精子形态学指标、血清睾酮含量的检测及睾丸、附睾组织病理形态学、超微结构透射电镜观察,低硒、低碘及硒碘联合缺乏均可引起雄性F2代模型动物的生殖功能损伤.通过对雌性F2代模型动物妊娠鼠体重、胚胎发育及其F3代胎仔骨骼、内脏发育的检测,低硒、低碘及硒碘联合缺乏均可引起雌性F2代模型动物生殖功能损伤.结论 低硒、低碘及硒碘联合缺乏均可引起F2代模型动物生殖功能损伤.

小鼠酒精性肝损伤模型的研究

目前国内外尚未建立统一、完善的酒精性肝损伤小鼠模型.探索酒精性肝损伤的机理筛选对预防酒精性肝损伤有效的保健食品,建立一个与人类酒精性肝损伤发展病变过程相似的动物模型极为重要.作者通过小鼠酒精性急性肝损伤模型的研究,应用于对肝损伤有辅助保护作用的保健食品筛选.

BN大鼠致敏动物模型研究

目的 建立经腹腔注射途经给予造模致敏原的BN大鼠致敏动物模型.方法 分别在实验第1、5和10天,经腹腔注射给予不同性别(雌性和雄性)和不同周龄(4周龄和8周龄)的BN大鼠,不同剂量(1.00、0.10和0.01mg)的造模致敏原——卵清蛋白(OVA),观察35天.分别于第28、35天内眦取血分离血清,用ELISA方法检测血清中OVA特异性IgE.结果 与阴性对照组相比,雌性8周龄BN大鼠中、高剂量组第28、35天血清中OVA特异性IgE浓度显著升高(P＜0.05)；雄性8周龄BN大鼠低、中剂量组血清中OVA特异性IgE浓度在第28天显著升高(P＜0.05),高剂量组血清中OVA特异性1gE浓度在第35天显著升高(P＜0.05)；雄性4周龄BN大鼠,高剂量组血清中OVA特异性ⅠgE浓度在第35天显著升高(P＜0.05).结论 经腹腔注射途径给予不同性别和周龄的BN大鼠不同剂量的OVA,雌性大鼠比雄性大鼠更敏感；8周龄大鼠比4周龄大鼠更敏感；0.10mg或1.00mg的致敏剂量较适合.因此,选用雌性8周龄BN大鼠,经腹腔注射给予0.10mg或1.00mgOVA,35天后即可建立比较理想的BN大鼠致敏动物模型.