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血清胎儿血红蛋白/总血红蛋白比值作为预测子痫前期患病风险的价值
目的:检测正常妊娠和子痫前期孕妇在早期妊娠时血清胎儿血红蛋白(HbF)、总血红蛋白(HbT)水平,探讨母血HbF/HbT比值是否可作为预测孕妇发生子痫前期的标志物.方法:ELISA检测38例正常妊娠妇女、51例子痫前期孕妇妊娠早期血清HbF和HbT水平,比较两组血清HbF和HbT的水平.结果:子痫前期组血清HbF浓度明显高于正常妊娠组[(1.41±0.92)μg/L vs (0.53±0.76) μg/L,P＜0.01)]；血清HbF/HbT明显高于正常妊娠组(0.0081±0.0052 vs 0.0025±0.0016,P＜0.01).在妊娠早期,HbF/HbT比值＞0.003 0时,预测子痫前期的敏感性为82.4％,特异性为78.9％.结论:妊娠早期血清HbF/HbT比值可以作为预测子痫前期的标志物.
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影响糖化血红蛋白检测系统的因素
糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)在糖尿病诊断、治疗和病情监测中起着十分重要的作用,并可作为糖尿病慢性并发症的危险预测指标之一.因此有关HbA1c检测的的标准化问题越来越引起人们关注.由于各个实验室采用不同的检测方法,因原理的不同以及各种仪器的分离能力高低的不同,导致检查结果差异较大.HbA1c水平不仅与该时期内血糖的平均水平有关,且与血红蛋白质与量有关.文中讨论了胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)对HbA1c检测系统的影响,应引起临床和各实验室的重视.
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高危妊娠与胎母输血的相关性分析
目的 探讨孕晚期母亲血胎儿红细胞量(KB)与新生儿血红蛋白的相关性.方法 运用用红细胞酸洗脱染色试验,监测297例入院待产孕妇的KB值,比较正常孕妇和高危孕妇KB的差异性,并观察其与新生儿出生后24 h内测的血红蛋白值的相关性.结果 297例孕妇血中(正常妊娠162例,高危妊娠135例),234例可测到胎儿红细胞,KB值为0.01%～5.2%,胎儿红细胞检出率占监测人数的78.79%.经非参检验表明,高危妊娠组的KB值明显高于正常组,差异有极显著意义(P＜0.001);母亲KB值与新生儿血色素值的相关性不强,但对母亲KB值进行分层观察发现,以KB≥0.4%为界值,≥0.4%与＜0.4%组间的新生儿Hb值存在差异显著性(F=10.406,P＜0.01),KB≥0.4%组新生儿的Hb水平较低.结论 大部分高危妊娠孕妇存在胎母输血现象.孕期KB值监测对胎母输血高危孕妇以及高危新生儿的筛选有一定价值.
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密度梯度离心结合Keihuaer抗酸染色法富集孕妇外周血中FNRBC的研究
目的 探索建立一种简便、快速、较低成本的用于孕妇外周血胎儿有核红细胞(FNRBC)富集的实验方法.方法 采集18名孕周在8～16周的孕妇外周血10 ml,经Percoll不连续密度梯度离心初步分离后,运用Keihuaer抗酸染色法对玻片上的细胞进行染色标记,显微镜下观察、辨别FNRBC的特殊染色及形态,对阳性涂片者进一步行胎儿血红蛋白(HBF)特异性抗体标记以证实其胎源性.结果 经Keihuaer抗酸染色处理,阳性FNRBC的胞浆染色呈深红色,核蓝色,而母亲的有核红细胞胞浆不着色.18名孕妇外周血中有14名可检出FNRBC,平均1～6个阳性FNRBC/病例,阳性检出率为77.8%.14例FNRBC阳性玻片经HBF抗体标记亦证实相同结果,而4例Keihuaer抗酸染色阴性病例亦表现HBF标记阴性,两者检出符合率100.0%.结论 密度梯度离心结合Keihuaer抗酸染色法用于富集FNRBC 具有较高的特异性,实验操作方法简便、快速,有望用于无创性产前基因诊断的推广应用.
关键词： 密度梯度离心 胎儿有核红细胞 Keihuaer抗酸染色 胎儿血红蛋白 -
补气益精生血法治疗β地中海贫血11例及对BCL11A影响
目的 观察补气益精生血方药对中间型β地中海贫血(β地贫)患儿疗效及对关键红系反式作用因子的影响. 方法 采用随机对照双盲双模法将入选的β地贫患儿24例分为中药组11例及对照组10例,中药组口服黄芪、党参、龟板、当归颗粒及安慰剂片,对照组口服羟基脲片及安慰剂颗粒,疗程12周.观察2组血常规及胎儿血红蛋白(HbF)比例等指标,并以实时荧光定量PCR反应检测BCL11A基因的转录表达水平. 结果 治疗后中药组血红蛋白值为(8.90±1.57) g/dL,对照组为(9.06±1.73) g/dL,2组比较无显著性差异(P＞0.05),但2组治疗后HbF均较治疗前有显著提升(P均＜0.01).中药组能显著下调BCL11A基因表达水平,由治疗前(0.34±0.11) copies下降至(0.18±0.13) copies(P＜0.05),下调程度亦优于对照组(P＜0.01). 结论 补气益精生血法治疗小儿β地贫具有较好疗效,其分子机制可能与抑制BCL11A从而诱导胎儿血红蛋白生成有关.
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补气益精生血法治疗β地中海贫血的疗效及对红系反式作用因子的影响
目的:观察补气益精生血法对中间型β地中海贫血(β地贫)患儿疗效及对红系反式作用因子的影响.方法:采用随机对照双盲双模拟法将入选的β地贫患儿38例分为中药组19例及对照组19例,中药组口服黄芪、党参、龟板、当归颗粒及安慰剂片,对照组口服羟基脲片及安慰剂颗粒,疗程12周.观察两组血常规及胎儿血红蛋白(HbF)比例等指标,并以Western Blot方法检测红系反式作用因子BCL11A、SOX6、Myb、KLF1蛋白表达水平.结果:治疗后两组血红蛋白值、HbF比例与治疗前相比均有显著差异(P<0.01);治疗后中药组与对照组相比无显著差异(P>0.05),中药组能显著降低BCL11A、SOX6、Myb蛋白表达水平,羟基脲则对上述蛋白水平无显著影响.结论:补气益精生血法治疗小儿β地贫具有较好疗效,其分子机制可能与抑制BCL11A、SOX6、Myb蛋白表达水平从而诱导胎儿血红蛋白生成有关.
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应用密度梯度离心结合免疫磁珠法富集孕妇外周血中胎儿NRBC的实验研究
目的 研究利用不连续密度梯度离心结合免疫磁珠方法,分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞(NRBC).方法 采集21名孕周在12-28周的孕妇外周血10ml,经不连续密度梯度离心后,再用免疫磁珠法分选和富集胎儿NRBC,同时对富集前后的孕妇外周血进行瑞氏染色和胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)特异性抗体标记、识别.结果 未经分选、富集,21名孕妇外周血有核细胞层涂片经瑞氏染色检查均未发现NRBC;梯度离心富集后21名孕妇中有11例外周血有核细胞涂片找到1～8个NRBC;再经免疫磁珠分离后有12例涂片发现1～7个NRBC,同时进行HbF特异性抗体标记,证实其NRBC阳性涂片中均存在胎源性NRBC.结论 本研究初步建立了分选、富集胎儿NRBC的实验方法,通过进一步的方法学改进,有望用于产前基因筛查的研究.
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利用胎儿血红蛋白表型分选、检测母血中胎儿有核红细胞
目的:建立高纯度、高得率、高特异性的分选技术,富集纯化母血中胎儿有核红细胞(FNRBC).方法:70例孕妇外周血,经密度梯度离心初步富集后行血红蛋白γ链免疫组化染色,以显微操作术挑取阳性细胞.采用单细胞PEP-PCR技术检测SRY基因,并进行荧光原位杂交分析.结果:胎儿NRBC具有鲜明的形态学、免疫学特征.每例母血FNRBC数5～27个,平均0.82±0.37/ml.PEP-PCR检测的灵敏度、特异度分别为95.35%、100%.4例FISH结果均与实际核型相符.结论:以γ-血红蛋白为分选标志,结合显微操作技术,可以有效地获取高纯度、高浓度研究模板,保证后继分析的准确性,为无创性产前诊断发展奠定基础.
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表观遗传修饰与胎儿血红蛋白药物诱导策略
药物诱导胎儿Hb合成以补充成人Hb的不足是治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的方法 之一.该疗法的分子基础是出生后几乎近似关闭的γ珠蛋白基因可以被重新激活.虽然珠蛋白基因沉默与激活的调控机制一直是人们关注和研究的热点,但仍不十分清楚.近年越来越多的表观遗传学研究证据表明,表观遗传修饰,如DNA甲基化、组蛋白修饰及染色质重塑等在珠蛋白基因簇基因表达调控中起重要作用.现就此进展作一概述,为药物基因诱导治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的实验研究与临床应用提供参考.
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β-珠蛋白生成障碍性贫血患者外周血单个核细胞B细胞淋巴瘤/白血病11A基因mRNA表达特点
目的 探讨β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-地贫)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中B细胞淋巴瘤/白血病11A (BCL11A)基因的表达特点.方法 入选35例β-地贫患者为病例组;40 例健康体检者为健康对照组,并进行红细胞计数.提取新鲜外周血PBMCs中总RNA,反转录为cDNA,采用荧光染料(SYBR Green Ⅰ)实时荧光定量PCR(RT-PCR)和相对定量分析方法,以GAPDH基因为内参,检测2组PBMCs中BCL11A基因的表达情况.采用相对定量2-△△Ct法进行mRNA相对表达量比较,不同样本之间的相对表达量(%)=2-△Ct×100%.BCL11A基因mRNA相对表达量和红细胞计数、年龄和性别的相关分析中双变量符合正态分布的计量资料采用Pearson相关分析,其他变量采用Spearman相关分析.结果 RT-PCR检测BCL11A基因mRNA在2组中的表达,健康对照组BCL11A基因表达水平是病例组的2.46倍,2组比较差异有统计学意义.病例组中BCL11A基因mRNA的相对表达量为0.31%～11.60%;健康对照组中BCL11A基因mRNA的相对表达量为1.40%～26.70%,存在明显的个体差异.BCL11A基因mRNA的相对表达量与RBC计数(r=-0.21,P=0.930)、性别(r=-0.20,P=0.842)、年龄(r=-1.15,P=0.256)均无相关性.结论 β-地贫患者BCL11A基因表达下降,BCL11A基因低表达可能在γ珠蛋白基因持续表达过程中发挥了一定作用.
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p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系
目的 探讨038丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPKs)信号通路直接持续活化在γ-珠蛋白基因转录激活和胎儿血红蛋白(HbF)合成中的作用,为阐明p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系提供直接依据.方法 经脂质体介导将pCDNA 3.1-MKK3(Clu)和pCDNA 3.1-MKK3(Ala)重组质粒转染人红白血病细胞株K562,经G418筛选,反转录(RT)-PCR和Western blot鉴定获得p38持续高磷酸化和低磷酸化的稳定细胞株K562-MKK3(Glu)和K562-MKK3(Ah).通过RT-PCR和联苯胺染色观察不同细胞模型中γ-珠蛋白基因的表达和HbF的合成.采用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 不同细胞模型中p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化.但与K562亲本细胞、K562-vect和K562-MKK3(Ala)细胞比较,K562-MKK3(Glu)细胞中p38蛋白磷酸化水平、γ-珠蛋白表达均显著增加.联苯胺染色结果 显示,K562亲本细胞、K562-vect、K562-MKK3(Ala)、K562-MKK3(Glu)和SB203580处理的K562-MKK3(Glu)细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±1.4)%、(3.7±1.2)%、(2.8±0.9)%、(32.6 ±5.3)%和(7.8 ±2.3)%(q=7.56 P<0.01).结论 p38 MAPKs信号通路直接持续活化可激活γ-珠蛋白基因的转录,并促进HbF的合成.p38磷酸化在K562细胞红系分化中起重要作用.
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丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制
目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制.方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10 μmol/L)处理1 h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h 的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100 μmol/L)诱导72 h的K562细胞为阳性对照.分别提取细胞总RNA 和总蛋白.采用RT-PCR、Western blotting和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平.结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05).K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05).结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用.
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黄芪及其复方中药治疗小儿β地中海贫血的前瞻性临床研究
目的 评价黄芪及其复方中药颗粒治疗小儿β地中海贫血的疗效及安全性.方法 采用随机对照双盲的临床试验法,57例入选患儿先按中间型及重型分层,再随机分入黄芪组、复方组(黄芪+党参+龟板)、安慰剂对照组,疗程12周,观察各组血液学指标及安全性指标.结果 经12周的治疗,中间型患儿复方组血红蛋白提升值为1.21±1.12 g/dL,黄芪组为1.05±0.80 g/dL,而对照组则下降了0.28±0.51 g/dL,3组比较差异有统计学意义(P＜0.01).疗程结束后复方组及黄芪组的Hb水平均显著高于对照组(P＜0.05).黄芪及其复方治疗均显著提升了胎儿血红蛋白水平,一定程度上提升了红细胞总数、平均血红蛋白含量及网织红细胞.中间型患儿复方组总有效率为64％,黄芪组为62％,均显著高于对照组(9％；P＜0.01).在重型患儿中也有类似以上效果,但逊于中间型患儿.服用药物对患儿白细胞总数、中性粒细胞总数、血小板总数及肝肾功能均无显著性影响.结论 黄芪及其复方治疗小儿β地中海贫血具有一定疗效且较安全.
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人胎儿血红蛋白的纯化及免疫活性鉴定
目的 研究胎儿血红蛋白纯化的佳方法,并对其进行免疫活性鉴定.方法 采用生理盐水洗涤、四氯化碳萃取得到粗提胎儿血红蛋白,再经sephadexG50凝胶层析柱纯化.纯化后的胎儿血红蛋白利用SDS-PAGE电泳、蛋白质印迹鉴定其性质.结果 获得了具有生物活性的胎儿血红蛋白,经SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白杂带消失,蛋白单体相对分子质量为16000 Mr,纯度为95%,蛋白质印迹结果显示纯化后的蛋白具有良好的抗原性.结论 该方法成功获得了纯度较高的胎儿血红蛋白,且操作简便,纯化效果好.
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MicroRNAs对胎儿血红蛋白表达的调控作用
MicroRNAs (miRs) play an important role in regulating diverse cellular processes.It has been reported that miRs are associated with the formation and maturation of erythrocytes, and the expression of globin genes at post-transcriptional level.Compared with normal human enrythrocytes, various miRs are altered in the patients with thalassemia.These changes also happen in the patients with diverse clinical manifestations.In this paper, we systematically summarized the recent progress about the expression dysregulation of miRs in β-thalassemia and their roles in regulating the levels of γ-globin and fetal hemoglobin.During β-like globin gene expression, miRs directly or indirectly regulate the levels of erythroid-specific transcription factors through post-transcriptional action, such as B-cell lymphoma 11A (BCL11A), myeloblastosis oncogene (MYB), specificity protein 1 (Sp1), Kruppel-like factor 3 (KLF3) and GATA1.These effects subsequently regulate the switch between γ-and β-globin gene expression and affect fetal hemoglobin production.Targeting miRs might be a novel therapeutic strategy for β-thalassmeia.
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HbF水平在β-地中海贫血携带者妊娠期产前筛查中的应用
目的 研究胎儿血红蛋白HbF与妊娠和β-地贫的关系. 方法 采集妊娠与非妊娠期女性外周血,进行HbF血红蛋白电泳分析.同时提取外周血基因组DNA,应用反向斑点杂交技术进行基因分析.分别比较HbF增高在妊娠组与非妊娠组、正常组与β-地贫组、非妊娠组内β-地贫与正常样本、妊娠组内β-地贫与正常样本和β-地贫组内妊娠与非妊娠样本间的统计学差异. 结果 不同β-地贫突变类型人群的HbF增高比例也不同,其中-28突变的HbF增高病例占所有HbF增高病例的比例大(39.39％),IVS-Π-654、CD27-28、CD41-42和CD17也都呈现出不同的HbF增高比例,而其他的突变类型的增高情况较少.HbF增高率的差异在各分组间均有统计学意义,但其增高水平之间的差异则仅在正常组与β-地贫病例组间有统计学意义. 结论 HbF增高率在β-地贫携带者妊娠期与非妊娠期、健康女性妊娠期与非妊娠期均有明显差异,β-地贫携带者在妊娠期的HbF水平增高水平更高,这些现象对β-地贫产前筛查中有积极的指导作用.
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补气益精生血中药对β地贫患儿p38MAPK信号通路的影响
目的 观察补气益精生血中药对中间型β地中海贫血患儿p38MAPK信号通路的影响.方法 采用随机对照双盲临床研究,入选β地贫患儿50例随机分配进入中药治疗组及安慰剂对照组,中药治疗组患儿口服黄芪、党参及龟板颗粒,对照组口服安慰剂颗粒,疗程12周.观察血常规及胎儿血红蛋白比例等血液学指标.并以实时荧光定量PCR反应检测p38MAPK基因mRNA水平,以Western Blot方法检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK蛋白水平.结果 12周疗程结束后,中药组患儿血红蛋白值为85.90±13.30 g·L-1,对照组为75.80±9.50 g·L-1,两组比较差异有统计学意义(t=6.310,P=0.004).中药组治疗后胎儿血红蛋白比例较治疗前亦有显著提升(58.13％±20.52％vs.66.80％±21.63％,t=-4.972,P＜0.001).实时荧光定量PCR及Western Blot实验结果显示中药治疗对p38MAPK基因表达无明显影响,但能显著提升磷酸化p38MAPK蛋白水平(0.33±0.19 vs.0.81±0.40,t=-7.652,P＜0.001).结论 补气益精生血治法方药治疗小儿β地贫具有较好疗效,其分子机制可能与激活p38MAPK信号通路从而诱导胎儿血红蛋白生成有关.
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胎儿-胎盘出血致失血性休克1例
患儿,男,0.5 h,窒息复苏后0.5 h伴全身苍白反应差入院.患儿系G1P1G41+1周因胎儿宫内窘迫行剖宫产娩出,胎心正常.无胎膜早破史,脐带绕颈一圈,羊水Ⅲ度粪染.胎盘重量853g,严重瘀血.产前其母亲无贫血.出生时,患儿全身苍白,阿氏评分1 min1分,5 min 7分,10 min 9分,出生体重3460g.入院时HR 133次/min,RR48次/min,BP38/17 mmHg,反应差,重度苍白,无水肿黄疸,无出血点,前囟稍紧,双侧瞳孔等大等圆,直径2mm,对光反应射存,双肺呼吸音粗,未闻啰音,心音低钝,心律齐,未闻病理性杂音,腹软,无肝脾肿大,肌张低下,WBC 38×109/L,RBC 0.97×109/L,Hb 37g/L,Plt118×109/L,pH7.17,PCO237mmHg,PO222mmHg,HCO3 12.3 mmol/L,BE-17 mmol/L,CK-MB 312u/L, LDH 1 141u/L,TB22.1μmol/L,DB 3.3μmol/L,TB18.8μmol/L,ALT 187μ/L,Coomb's阴性,血培养阴性,母血中胎儿血红蛋白9%.入院后保暖、吸氧、呼吸支持、输血、纠酸、抗休克、抗感染等治疗.患儿血压升至61/40～50mmHg,Hb 110g/L,生后6 h出现惊厥,惊厥性呼吸暂停.诊断失血性休克,重度窒息,重度缺氧缺血性脑病,胎儿一胎盘出血,重度贫血.治疗5 d,患儿仍浅昏迷,肌力低下.家属担心后遗症而要求放弃治疗.
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BCL11A在胎儿血红蛋白表达调控中的作用
人类血红蛋白在个体发育不同阶段有种类和数量上的变化,这些变化使红细胞功能得以很好地适应各时期的生理需要.珠蛋白肽链编码基因的选择性表达决定血红蛋白合成的种类和数量.
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非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征复合β地中海贫血的研究进展
遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征（hereditary persis-tence of fetal hemoglobin，HPFH）是由于β珠蛋白基因簇中DNA序列的碱基替换或缺失导致出生后胎儿血红蛋白（fetal hemoglobin，HbF）持续增高的遗传性血红蛋白病［1］。 HPFH可分为缺失型HPFH和非缺失型HPFH（nd-HPFH）。 nd-HPFH是由于γ珠蛋白基因启动子区点突变或小片段缺失所致［2］。正常成人体内血红蛋白主要是HbA，HbF含量小于总血红蛋白的1％［3］。β地中海贫血（β地贫）是由于β珠蛋白基因缺陷或缺失使β珠蛋白肽链合成减少或缺如，导致血红蛋白组分改变的遗传性溶血性贫血，可分为轻型、中间型和重型，临床表现从几乎无症状到严重贫血［4－5］。 nd-HPFH复合β地贫的HbF明显升高，高水平HbF可通过平衡珠蛋白链合成而改善贫血症状［6］。广西、广东等南方地区是国内β地贫高发区，本文就nd-HPFH复合β地贫的基因突变类型和临床表现作一综述，为β地贫诊治提供理论依据。
