首页 > 文献资料
-
靶向肿瘤腺病毒介导IL-24抑制人胃癌细胞增殖
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动IL-24的重组腺病毒(Ad-phTERT-IL-24)对人胃癌SGC-7901细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 将Ad-phTERT-IL-24感染人胃癌SGC-7901细胞,采用荧光实时定量PCR及Western blot检测IL-24表达;采用CCK-8方法检测细胞生长曲线;采用Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 与以PBS代替病毒液处理的SGC-7901细胞相比,感染Ad-phTERT-IL-24的SGC-7901细胞内IL-24 表达明显升高(P＜0.01),于第5、6 d吸光度明显下降(P＜0.05),细胞侵袭能力亦显著降低(P＜0.05).结论 Ad-phTERT-IL-24可有效上调人胃癌SGC-7901细胞IL-24表达,进而抑制细胞增殖及侵袭能力.
-
耳蜗螺旋神经节细胞的培养及重组腺病毒在细胞中的表达
目的 建立哺乳动物耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)体外培养的细胞模型,研究携带有外源性神经生长因子(NGF)的重组腺病毒在离体培养SGNs中的表达特性.方法 出生3 d健康SD大鼠10只,无菌条件下分离并培养耳蜗螺旋神经节细胞,应用抗神经微丝蛋白单克隆抗体NF-200行细胞免疫化学鉴定.培养72 h后,以绿色荧光蛋白为报告蛋白的重组腺病毒转染SGNs,培养第7 d观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达.结果 体外培养的SGNs细胞形态正常,胞体成圆形或椭圆形,突起细长并相互交织,NF-200在胞体染色阳性.病毒转染后,胞质和突起均有绿色荧光蛋白的表达.结论 分离培养的螺旋神经节细胞在体外条件下生长良好,形态正常,细胞数量和存活时间能满足体外实验的需求.重组腺病毒成功转染螺旋神经节细胞.
-
血红素加氧酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察腺病毒介导的血红素加氧酶-1基因(rHO-1)转染后,HO-1在大鼠心肌的表达及其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用.方法:雄性SD大鼠随机分为4组:假手术对照组(SH)、生理盐水组(NS)、空载体组(Ad)和Ad-HO-1转染组(HO),各组12只.后3组分别于心尖部分别注射1 ml生理盐水、含空载体腺病毒(5.0×109 PFU)和重组HO-1腺病毒50 μl(7.5×109 PFU).在基因转染3 d后,采用左冠状动脉前降支结扎开放建立心肌缺血再灌注模型.每组大鼠测定心功能后取心腔内血,做心肌酶检测,处死大鼠并取左心室标本,测定左心室心肌梗死面积,于荧光显微镜下观察心肌组织荧光蛋白的表达情况,RT-PCR、Western blot检测心肌组织HO-1 mRNA、蛋白的表达.结果:HO组中HO-1表达量明显高于Ad组和NS组,Ad和HO组左室心肌均见有荧光蛋白表达,其转染率为(55.5±3.5)%.各时相点HO组的SBP、DBP、MAP、+dp/dtmax和-dp/dtmax等指标恢复率均显著高于Ad组和NS组(P＜0.01).与SH组比较,NS组、Ad组血清LDH和CK-MB水平、梗死心肌重量、心肌梗死面积升高(P＜0.01).与NS组或Ad组比较,HO组血清LDH和CK-MB水平、梗死心肌重量、心肌梗死面积减少(P＜0.01).结论:腺病毒携带的HO-1基因能有效的转染心肌组织,并在体内稳定表达;HO-1基因转染对缺血再灌注的心肌有明显的保护作用.
-
4814例呼吸道感染患儿腺病毒血清学检测及3型7型检测结果分析
目的:了解2015年11月～2016年4月间宝鸡地区4814例呼吸道感染患儿腺病毒IgM抗体及3、7型血清抗体检测结果,初步分析腺病毒的流行规律和感染疾病谱.方法:采用ELISA法检测腺病毒IgM和3、7型IgA、IgG、IgM抗体.结果:腺病毒感染占本时段呼吸道感染患儿的37.06％(1784/4814),并显示本区ADV3型在冬季流行占优势,而春季感染较弱,ADV7型在冬春季节均可出现,冬季以ADV3型和7型混合感染为主,而春季以ADV7型感染为主.结论:通过资料分析对ADV的病原学有一定的了解,由于观测时间短,尚未覆盖全年对于ADV的分型及流行病学特点,尚须持续观测和积累资料以给临床提供必要的诊治依据.
-
同源重组与Gibson Assembly方法构建腺病毒载体
目的：对比同源重组与Gibson Assembly两种方法构建腺病毒载体的效率。方法：增殖并提取AD4 DNA，分别用同源重组与Gibson Assembly两种方法，将AD4 DNA镶嵌入pBR322质粒，构建出携带有全长AD4 DNA的腺病毒载体，并进行PCR和测序鉴定，对比两种方法构建腺病毒载体的筛选效率。结果：两种方法均能构建出正确的腺病毒载体；筛选同源重组法1000个菌落中，鉴定360个，仅有1个菌落；Gibson Assembly法112个菌落数中，鉴定其中10个，有3个阳性。结论：Gibson Assembly方法比传统同源重组方法在构建腺病毒载体时更有效。
关键词： 腺病毒 疫苗 重组载体 Gibson Assembly -
大鼠 Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3 FLAG 质粒的构建、基因结构分析及鉴定
目的：大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG基因重组表达质粒的构建及其基因结构分析。方法：通过UCSC（ http：//genome. ucsc. Edu/）分析大鼠瞬时受体电位通道4（ TRPC4）及其家族基因组结构，并通过NCBI确定了TRPC4的蛋白结构域，通过BioGPS（ http：//biogps. org/#goto=welcome）分析其表达模式；PCR扩增大鼠TRPC4蛋白编码区域（ CDS），并通过限制性内切酶与穿梭载体pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG进行连接，其产物转化细菌感受态细胞；挑取阳性克隆进行菌落PCR鉴定，并对阳性克隆进行测序验证，测序正确的克隆即为目的质粒，命名为pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG；将该质粒转染HEK293细胞进行腺病毒包装，并命名为Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG，通过 Western blot验证蛋白的表达。结果：生物学分析发现TR-PC4蛋白保守的TRP-2、ANK及TRP结构域，通过BioGPS分析发现TRPC4在杏仁核和海马中表达明显，在血管内皮细胞中也有表达；PCR克隆获得3000 bp 的 TRPC4 CDS 序列，CDS 被亚克隆到表达载体 pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG中，酶切鉴定及测序验证正确；进行腺病毒包装后的病毒可以在HEK293细胞中表达TRPC4-EGFP-3FLAG 融合蛋白，Western blot证实其为含flag标签的蛋白且大小为128 KDa。结论：成功构建了大鼠TRPC4的腺病毒表达载体Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG。
-
microRNA-29c过表达对人胰腺癌AsPC-1、PANC-1细胞增殖的影响
目的:探讨microRNA-29c过表达对人胰腺癌AsPC-1、PANC-1细胞增殖的影响.方法:构建含microRNA-29c过表达腺病毒并感染至胰腺癌AsPC-1及PANC-1细胞(实验组),感染空载体作为阴性对照组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AsPC-1和PANC-1感染microRNA-29c 24 h时的感染效率,CCK-8实验检测microRNA-29c感染48 h时人胰腺癌细胞的增殖能力,细胞平板克隆实验检测感染microRNA-29c24 h人胰腺癌细胞的单克隆形成能力.结果:与阴性对照组比较,microRNA-29c感染AsPC-1及PANC-1细胞后microRNA-29c表达水平明显升高;过表达microRNA-29c后AsPC-1和PANC-1细胞增殖能力明显受到抑制,细胞的克隆形成数明显减少(P＜0.01).结论:microRNA-29c过表达能有效抑制胰腺癌细胞的增殖能力,有望成为治疗胰腺癌的新靶标.
关键词： 微小RNA microRNA-29c 胰腺癌 细胞增殖 腺病毒 -
microRNA-29c对人胰腺癌细胞侵袭转移的抑制作用及机制
目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、MIA PaCa-2)生物学特性的影响.方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、MIA PaCa-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系中microRNA-29c的表达差异,以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1和MIA PaCa2细胞作为实验组,以空载体感染的PANC-1和MIA PaCa2细胞作为阴性对照组,采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力,Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达.结果:real-time-PCR显示各胰腺癌细胞系中microR-NA-29c水平明显低于正常胰腺细胞系(P＜0.05),细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIAPaCa-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P＜0.05),Transwell小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1和MIA PaCa-2细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P＜0.05);Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1和MIAPaCa-2细胞过表达microRNA-29c后,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加.结论:microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移,可能与Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加有关,有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点.
-
人VEGF基因腺病毒表达载体修饰大鼠骨髓间充质干细胞
目的 探讨含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因腺病毒表达载体Ad-VEGF转染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的可行性.方法 采用贴壁培养筛选法富集大鼠BM-MSCs.将HEK293细胞中扩增并经效价分析后的Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,通过对细胞转染效率、生长和活力的观察分析,以确定理想的感染复数(MOI)值.结果 本实验经HEK293细胞扩增制备的Ad-VEGF的病毒效价达8×108 pfu/ml;当MOI值为50时,Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs效率可达高值53％；而MOI值高于50时,Ad-VEGF转染对BM-MSCs活性抑制明显.结论 成功实现Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,其适MOI值为50.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 腺病毒 骨髓间充质干细胞 -
OMC685的几种病毒感染观察(研究简报)
病毒必须依赖敏感的活细胞才能复制.对细胞的种类,病毒常常有一定、甚至是十分严格的选择性.体外的病毒感染细胞试验,不但是研究病毒致病机理的重要途径,也是分离和鉴定病毒的常用的方法.肿瘤细胞系的建议,为研究病毒提供了非常有用的实验材料.我们用万启惠等建立的卵巢粘液性囊腺癌细胞系细胞OMC685[1],分别感染脊髓灰质炎病毒(来自中国医学科学院医学生物学研究所,昆明)、麻疹病毒、腺病毒(2种病毒均来源于上海市防疫站)、单纯疱疹病毒(来源于北京病毒研究所)、流感病毒(来源于北京流行病学微生物学研究所)和狂犬病毒外,都能观察到病毒在细胞内增殖的情况.
-
重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP载体的构建及鉴定
目的 构建携带有NM23的重组腺病毒载体并观察其对人胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响.方法 以质粒NM23-PIRES2-EGFP为模版,采用PCR扩增NM23基因,克隆至腺病毒载体pCMV-MCS-IRES-EGFP上,形成重组腺病毒载体pCMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鉴定及基因测序.将人胃癌细胞株BGC-823分为实验组(NM23-OE组,感染pCMV-NM23-IRES-EGFP)、空白组(Ctrl组),阴性对照组(NC组,感染pCMV-MCS-IRES-EGFP);Real Time PCR和Western Blot分别检测3组细胞中NM23mRNA和蛋白表达;流式细胞仪检测3组细胞凋亡率.结果 经酶切鉴定和基因测序证实成功构建重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP;经扩增后,重组腺病毒的滴度为4.0×1010 ifu/mL;RT-PCR及Western blot结果显示,阴性对照组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而实验组的NM23的mRNA和蛋白表达显著高于其他两组(P<0.05);实验组BGC-823细胞的凋亡率也显著高于其他两组(P<0.05).结论 成功构建了过表达NM23的重组腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP载体,通过上调NM23基因的表达,可观察到胃癌细胞株BGC-823的凋亡水平有明显升高,为后续研究NM23基因对人胃腺癌细胞生物学功能的影响提供实验基础.
-
干扰素雾化吸入和易坦静联合治疗毛细支气管炎30例疗效观察
急性毛细支气管炎是一种婴幼儿较常见的下呼吸道感染,仅见于2岁以下婴幼儿,多数是1-6个月的小婴儿.呼吸道合胞病毒是引起毛细支气管炎的主要病原,此外,副流感病毒、腺病毒、流感病毒、支原体等均可引起该病,临床上可有较明显的呼吸困难、喘憋、口唇青紫、鼻扇及三凹征,少数危重病例可并发心率衰竭危及生命.我科用干扰素雾化吸入联合易坦静口服,治疗毛细支气管炎,取得较好疗效,现总结如下.
-
布地奈德联合沙丁胺醇治疗毛细支气管炎40例疗效观察
毛细支气管炎是2岁以下婴幼儿特有的呼吸道感染性疾病[1],以呼吸急促、三凹征和喘鸣为主要临床表现.多由呼吸道合胞病毒所致,付流感病毒、腺病毒、流感病毒、肠道病毒及肺炎支原体等也可引发此病.
-
直接免疫荧光法对七种呼吸道病毒检测的临床应用
本研究应用直接免疫荧光法,对392例住院呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV,1、2、3型)、流感病毒(IFV,A、B型)和腺病毒(ADV)抗原进行检测,通过分析贵州地区呼吸道感染患儿病毒病原学检测结果,为呼吸道感染性疾病提供病毒病原学诊断依据.
-
复方异丙托溴铵溶液、布地奈德混悬液雾化吸入治疗毛细支气管炎32例疗效观察
毛细支气管炎在冬春秋末发病,以2岁以内小儿多见.多由呼吸道合胞病毒(RSV)引起,也可由腺病毒、副流感病毒、鼻病毒等引起的婴幼儿下呼吸道感染,少数由肺炎支原体引起.目前无特效治疗方法.我们采用复方异丙托溴铵溶液(可比特)、布地奈德混悬液(普米克令舒)雾化吸入治疗,取得了满意疗效,现道导如下.
-
慢性阻塞性肺部疾病51例临床分析
病毒感染对慢性阻塞性肺部疾病的发作有很大关系.在慢性阻塞性肺部疾病急性发作期分离出的病毒有流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒等,是激发本病的主要病原体.病毒感染所造成的呼吸道上皮损伤有利于细菌的继发感染,引起本病的发生和反复发作.我们检测31例慢性阻塞性肺部疾病患者急性期及23例非COPD(主要有气胸、肺炎及良性胸水等)咽试子中的病毒抗原,结果报告如下.
-
2012-2013贵阳地区急性下呼吸道感染患儿常见病毒检测分析
急性下呼吸道感染作为儿科常见疾病，一直受到高度重视，已证明多种呼吸道病毒与儿童下呼吸道感染有密切关系。因而对引起急性下呼吸道感染的病毒进行及时准确的检测，对临床诊断治疗和预防等方面有积极意义。为了解近年来贵阳地区儿童急性下呼吸道感染病毒的分布特点，我们对2012年1月至2013年12月到我院就诊，诊断为急性下呼吸道感染的患儿标本4420例进行检测，包括流感病毒A、B型（hfluenza virus ，IVA、B）、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型（Parainfluenzavirus ，PVⅠ、Ⅱ、Ⅲ）、呼吸道合胞病毒（Respriatory syncytin virus ，RSV ）、腺病毒（Adenovirus ，ADV ）共7种常见病毒，现分析如下。
-
感停抗腺病毒的实验研究
目的:探讨感停的抗病毒作用疗效.方法:采用微量细胞培养法进行抗病毒疗效和病毒滴定.结果:感停对腺病毒的小治疗浓度为:6.5μg/ml,感停对腺病毒的治疗指数(therapeutic index,TI)等于5,经小有效剂量感停作用后,腺病毒的滴度由105TCID50/0.1ml下降为103.5TCID50/0.1ml.结论:感停在体外对腺病毒有一定的治疗作用.
-
咽康片抗腺病毒的实验研究
目的:探讨咽康片的抗腺病毒作用疗效.方法:采用微量细胞培养法进行抗病毒疗效和病毒滴定.结果:咽康片对腺病毒的小治疗浓度为:60.94μg/ml.咽康片对腺病毒的治疗指数(therapy index,TI)等于8,经小有效剂量咽康溶液作用后,腺病毒的滴度由105.2TCID50/0.1ml下降为103.2TCID50/0.1ml.结论:咽康片在体外对腺病毒有一定的治疗作用.
-
34例儿童腺病毒感染临床治疗体会
目的:浅谈儿童腺病毒感染的临床治疗体会.方法:对2009年1月-2011年9月就诊于我院的34例小儿腺病毒呼吸道感染患儿采用痰热清进行治疗,观察临床效果及各临床症状消失时间.对比同期采用病毒唑治疗的37例腺病毒感染患儿.结果:观察组采用痰热清治疗,总有效率91.2％,对照组总有效率62.2％.两组有效率差异有统计学意义.两组患儿临床症状对比均有显著差异,P＜0.05.不良反应出现情况无显著差异,P＞0.05.结论:痰热清治疗儿童腺病毒感染效果显著,同时患儿应提高抵抗力,调节身体免疫功能.
