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同位素内标-液相色谱-串联质谱法测定水果中11种农药残留量
目的 建立一种同位素内标-液相色谱-串联质谱测定水果中11种农药的方法.方法 样品用乙腈提取,离心后取上清液旋转蒸发浓缩,经过氨基固相萃取小柱净化后,旋转蒸发至干,流动相溶解样品,用Waters XSelect@HSS T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.5 μm)进行分离,以乙腈和0.2％甲酸溶液作为流动相进行洗脱,内标法测定.结果 本研究建立的方法相对标准偏差(RSD)在4.7％～9.4％之间,样品加标回收率在78.6％ ～ 107.4％之间,定量限和检出限分别在0.002～2.2和0.000 4～0.66μg/kg.结论 本研究建立的分析方法操作简便、结果准确、灵敏度高,可满足实验室对食品中农药残留的检测要求.
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利用食管静脉曲张直径测量尺对体外模拟曲张静脉测量的可行性研究
目前,国内外对食管胃静脉曲张直径的测量,主要采用目测法(visual estimate)、张钳法(open biopsy forceps)或器械尺等,而活检钳(biopsy forceps)等物理内标(substantial internal standards)对内镜下病灶大小的测量[1-5],其数据可信度亦不高[6-8].虽然新近文献报道有虚拟内标内镜测量法,但临床上并没有开展起来[9-10].究其原因,主要影响因素是内镜设备本身特殊要求.
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新型HIV-1核酸定量内标构建及验证
目的 构建一种稳定的以病毒颗粒为基础的HIV核酸定量检测内标.方法 在实验室原有新型表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol的基础上,利用PCR扩增法在不改变p24保守区基础上突变核苷酸,经Gateway重组得到含突变碱基的pNL43-?ENV-LUC-ATTR表达载体,该载体与水泡性口膜炎病毒(VSV)质粒共转染293细胞48 h后收集上清中HIV-1内标假病毒颗粒,检测p24抗原含量,定量假病毒滴度,以倍比稀释内标质粒、内标质粒与阳性标本混合品、内标假病毒颗粒与阳性标本混合品为模板进行实时定量PCR法,观察内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针的匹配情况,以及是否受样本探针引物的干扰.结果 定点突变表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol内的p24保守区片段;获得仅具有1次感染性的HIV-1假病毒颗粒(3.61×109 IU/ml);p24抗原检测含量为283.2 pg/ml;实时定量PCR法确定内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针匹配良好,内标引物探针对阳性标本探针无干扰.结论 成功建立了一种以假病毒颗粒为基础的HIV-1核酸定量检测内标.
关键词： 获得性人类免疫缺陷病毒1型 核酸定量 病毒颗粒 内标 -
苦杏仁苷可作为液相色谱质谱联用技术血清多成分含量的内标
目的 考察苦杏仁苷作为液相色谱电喷雾电离质谱联用技术测定血清中多种成分含量的内标物使用的可行性.方法 血清样品加入苦杏仁苷,经三氯乙酸沉淀蛋白,以含甲酸的乙腈-水为流动相梯度洗脱,用Waters Acquity HSS T3色谱柱分离,电喷雾电离,正、负离子模式分别检测.结果 在正离子和负离子模式下,血清样品中苦杏仁苷本身的峰面积与浓度线性关系良好,苦杏仁苷作为内标物测定血清中的芍药苷和阿魏酸,待测物内标峰面积比值与待测物浓度线性关系良好.结论 苦杏仁苷可以作为液相色谱电喷雾电离质谱联用技术测定药后血清中多种成分含量的内标物使用.
关键词： 苦杏仁苷 液相色谱质谱联用技术 内标 含量 -
盐酸阿莫罗芬乳膏体外猪皮渗透贮留量的HPLC测定方法
目的:研究盐酸阿莫罗芬乳膏体外经猪皮渗透贮留量的HPLC测定方法.方法:采用巴马小香猪离体猪皮和改良的Franz扩散池进行体外渗透试验.采用90％乙腈作为提取溶剂,酮康唑作为内标,色谱柱为Diamonsil-C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸二氢铵溶液(磷酸调节pH值至3.0)(70∶ 30),流速为1.0mL·min-1,检测波长为214 nm,柱温为30℃.结果:盐酸阿莫罗芬的浓度在1.13～8.05 μg· mL-1范围内与峰面积线性关系良好,低、中、高浓度平均回收率分别为(105.48±2.58)％,(99.46±1.79)％和(101.41±2.00)％,精密度良好(RSD为1.36％).定量限和检测限浓度分别为6.73和2.71 ng·mL-1.结论:该方法专属性好、准确度高、重现性好,可应用于盐酸阿莫罗芬乳膏的皮肤生物等效性研究.
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新型药用辅料乙交酯丙交酯共聚物中单体残留量的测定
目的:建立内标法测定乙交酯丙交酯共聚物(PLGA)中单体残留量的气相色谱检测方法.方法:采用气相色谱法进行测定:内标物为乙酸丁酯;色谱柱为DB-5柱(30 m×0.53 mm,5μm);进样口温度为250℃;分流比10:1;载气为氮气;柱温为135℃;检测器为火焰离子检测器(FID),检测器温度为300℃;进样量为3 μL.结果:采用气相色谱法测定PLGA中乙交酯与丙交酯的含量,乙交酯与丙交酯的线性范围分别为17.67 ～ 83.30和33.33 ～ 266.70 μg· mL-,加标回收率分别为99.0％和100.6％,相对标准偏差分别为0.7％和1.0％.结论:经方法学验证,该法简便、快捷、灵敏度高、结果准确,适用于PLGA中乙交酯与丙交酯的检测.
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内标在LC-MS法生物样品分析中的相关问题探讨
内标在LC-MS法生物样品定量分析时被广泛使用,它可以补偿检测过程中待测物在样品准备、色谱分离和信号响应等方面的损失或变化,使定量结果更加准确.选择一个合适的化合物做内标十分关键.采用内标法需关注诸多问题,如选择类似物还是稳定同位素内标,使用稳定同位素内标需要注意什么,内标浓度如何确定及如何评价未知浓度样品内标响应的变异.本文将对这些问题进行初步探讨.
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RP-HPLC内标法测定大鼠血清红景天苷浓度的研究
目的 RP-HPLC内标法建立大鼠血清中红景天苷浓度的测定方法 .方法 健康♂SD大鼠尾静脉注射红景天苷(60 mg·kg-1)后,分别于不同时间点眼眶静脉丛取血0.5mL,高氯酸沉淀血清蛋白,离心取上清液进样分析.色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6mm×250mm,5 μm),流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(10:90:0.011:0.016),流速为1.5 mL·min-1,检测波长为277 nm,柱温为50℃,进样量10 μL,内标为咖啡因.结果红景天苷质量浓度在0.56～70 mg·L-1内线性关系良好(r=0.997 5),以信号/噪音=3:1计算,红景天苷低检测浓度为0.15 mg·L-1,日内、日间精密度分别≤4.5%,≤5.4%,血清样品的平均回收率为(99.27±4.38)%.结论 建立的RP-HPLC内标法方法 简便、快速、准确,适合于红景天苷的血药浓度测定及药动学研究.
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GC法同时测定氨酚氯宗分散片中两组分含量
测定氨酚氯宗分散片中对乙酰氨基酚和氯唑沙宗含量.采用毛细管气相色谱法,色谱柱:OV-1弹性石英毛细管柱,以咖啡因为内标物,汽化室温度:220℃,检测器温度:250℃;检测器:FID检测器;载气:氮气;流速:2.5mL·min-1,分流比5:1.对乙酰氨基酚及氯唑沙宗分别在18.08～48.22μg·mL-1 (r=0.9996)和14.93～39.80μg·mL-1 (r=0.9992) 范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为100.3%和99.6%.该方法可用于氨酚氯宗分散片中对乙酰氨基酚和氯唑沙宗的含量测定.
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RP-HPLC内标法测定大鼠血浆中盐酸氟桂利嗪的含量
目的 建立RP-HPLC内标法测定大鼠血浆中盐酸氟桂利嗪含量的方法.方法色谱柱:Shimadzu ODS C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L,pH=3.5)(68∶32);流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL;内标:对羟基苯甲酸丙酯.结果盐酸氟桂利嗪在0.01～0.12 μg/mL范围内线性关系良好,r = 0.999 7(n = 7),信噪比(S/N)＞3时,低检测浓度为3.48×10-3 μg/mL;平均回收率为89.83%,RSD值为2.76%.结论 本方法简便、灵敏,回收率和精密度高,可用于盐酸氟桂利嗪新剂型研究中血药浓度的测定及其药代动力学研究.
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非水毛细管电泳内标法测定麻黄中麻黄碱的含量
目的:以品红为内标,建立非水毛细管电泳(NACE)内标法测定麻黄中麻黄碱的含量.方法:采用毛细管区带电泳分离模式,以30 mmol/L 的醋酸铵和醋酸钠甲醇溶液为运行缓冲液,品红为内标物,操作电压20 kV,电迁移进样10 kV×10 s,检测波长为210 nm.结果:麻黄碱在3.125～200.000 mg/L(相关系数r=0.994 0)范围内有良好的线性关系,低检测限为2.0 mg/L,仪器精密度为2.05%,方法精密度为3.17%,回收率为97.47%～101.85%.结论:此方法为麻黄碱的测定提供了一种简便、快速、定量可靠的方法,可用于医学研究样品和药材中麻黄碱的测定.
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毛细管气相色谱法测定氯唑沙宗片含量
目的:测定氯唑沙宗片中氯唑沙宗含量.方法:采用毛细管气相色谱法,色谱柱:OV-1弹性石英毛细管柱30mm×0.25 mm×0.1μm,以咖啡因为内标物,汽化室温度:220℃,检测器温度:250℃;检测器: FID检测器;载气:氮气;流速:2.5 ml·min-1,ntf尾吹:40ml·min-1,分流比5:1.结果:氯唑沙宗15～40μ g·ml-1(r=.9996)范围内呈良好线性关系,平均回收率100.6%.结论:该方法测定氯唑沙宗含量准确、可靠、回收率高.
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安定在保存血液中的分解动力学研究
安定是临床上常用的镇静催眠药,但长期服用或大量服用均可引起中毒,安定中毒的案例时有报道[1-3].本研究建立安定灌胃中毒致死犬的动物模型,研究安定在保存犬血液中的分解动力学.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器和试剂 Trace DSQ气相色谱-质谱联用仪,美国Finnigan公司;岛津2010GC气相色谱仪,日本岛津公司;安定标准品(购于公安部二所);内标:SKF525(中国标准技术开发公司);其余试剂为国产分析纯.
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高效液相色谱法测定人血清中万古霉素的浓度
万古霉素为糖肽类抗生素,由于其治疗指数窄、个体差异大、影响因素多,故监测血药浓度结合临床实施个体化给药极为重要[1].我们采用去甲万古霉素作为内标测定万古霉素血药浓度的高效液相色谱法(HPLC),可完全分离万古霉素与去甲万古霉素,快速而简便,现报告如下.
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同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱法检测血浆中的皮质醇
目的：建立一种同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱法检测血浆中的皮质醇。方法：使用C18固相抽提小柱纯化、富集人体血浆中的总皮质醇。采用LC/MS/MS-ESI法分析血浆中的皮质醇含量。梯度流动相为0 min,50%甲醇；3 min,90%甲醇；3.5 min 90%甲醇；3.6min 50%甲醇；5 min 50%甲醇。水相含0.2%甲酸。MRM检测模式选择性监测cortisol(m/z363.2/121.4)、内标cortisol-d4(m/z367.4/121.4)。结果：血浆中加入梯度标准品的加标回收率分别为102.5%，101.1%，103.3%。检测冻存血浆中皮质醇的实验里，组内变异为0.54%～2.47%，组间变异为0.96%～1.69%，线性相关系数为R2≥0.999。LC/MS/MS信噪比为10时检出限为12pg。结论：该方法具有良好的特异性、灵敏度、精密度，能够准确的检测血浆中总皮质醇含量，为实现皮质醇溯源打下基础。
关键词： UPLC-MS/MS( ESI) 皮质醇 内标 溯源 标准化 -
大口径毛细管气相色谱法测定百草油中4种挥发性成分的含量
目的:建立同时测定百草油中薄荷脑、水杨酸甲酯、肉桂醛和丁香酚含量的毛细管气相色谱方法.方法:以苯甲醇为内标,采用30 m×0.53 mm PEG-20M毛细管柱,不分流进样,FID检测器,程序升温.结果:百草油中薄荷脑、水杨酸甲酯、肉桂醛、丁香酚和其他成分的分离度良好,薄荷脑、水杨酸甲酯、丁香酚和肉桂醛分别在62.7×103～2.01×103 μg/mL、119×103～3.81×103 μg/mL、0.42～205 μg/mL和19.9～636 μg/mL的范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999 2.薄荷脑、水杨酸甲酯、肉桂醛和丁香酚的加样回收率在98.6%～100.3%之间,RSD均小于2.4%.结论:该方法操作简便,定量准确,适用于百草油的质量检测.
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枸橼酸莫沙必利片的反相离子对HPLC测定
建立了枸橼酸莫沙必利片的反相离子对HPLC测定法.采用ODS色谱柱,选用双氯芬酸钠为内标,0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(50∶50,含0.01 mol/L庚烷磺酸钠)为流动相,检测波长为274 nm.方法平均回收率为98.8%,RSD 1.3%.
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氘代沃拉帕沙的设计与合成
沃拉帕沙(vorapaxar)是一种新型蛋白酶激活受体1 (PAR-1 )拮抗剂,可抑制凝血过程.氘代沃拉帕沙作为内标可满足临床样品分析检测的需要.本文以未标记的沃拉帕沙为起始原料,经过水解、缩合、酯交换和氢氘交换4步反应首次高效地合成以D8为主的氘代沃拉帕沙.所有中间体和终产物均经过核磁和高分辨质谱确证,所制备氘代化合物[D8]沃拉帕沙满足内标化合物的使用要求.
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虚拟内标内镜测量法的建立及其应用
目的:目前,内镜测量的主要方式是目测或张钳法等方法.由于内镜图像的桶形畸变,现有测量的方法均有较大误差.本研究验证一个自创的"虚拟内标"新概念,并建立应用虚拟内标的内镜测量技术. 方法:应用电子胃镜对印有标准刻度的格图在不同物距上进行拍摄,截取到包含虚拟内标信息的桶形畸变格图,通过对于格图的数字特征分析,了解各物距平面视野大小、压缩比、有效测量区域等多种有用数据.根据这些数据建立虚拟内标内镜测量方法,并应用这种方法进行体外、体内测量的试验. 结果:物距介于10mm至40mm之间时,物距与视野之间呈现1 ∶ 2的倍比关系.压缩比计算结果提示:物距10～15mm时有效范围为10mm,物距20～30mm时有效范围为20mm,物距>35mm时有效范围为30mm.各平面有效测量区域占据图像总宽度的2/5到3/5.各物距平面中央格的象素值的排列趋于双曲线改变,当物距在35～50mm之间,每厘米象素值之间的差距趋于接近.体内、体外实验进一步验证了虚拟内标内镜测量法的可行性与准确性. 结论:应用虚拟内标法进行内镜测量是一个简便、客观、准确、实用的方法.
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LC-MS快速测定面膜中的地塞米松
目的 建立一种快速测定面膜中地塞米松含量的LC-MS法.方法 面膜样品加泼尼松为内标后,用饱和氯化钠和乙腈提取,用C18粉末净化后直接上机分析.测定采用SB-C18(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)为分离色谱柱,以甲醇-0.1％甲酸(90:10)为流动相,柱温35℃,流速0.2 mL.min-1,扫描方式是多反应监测模式.结果 地塞米松在0.2～10 μg.mL-1内线性良好(r=0.999 8),高中低水平的回收率分别为104.4％,95.8％和93.3％,相应RSD分别为1.0％,0.3％和1.1％.检测40批实际样品,检出1批地塞米松含量为3.51 mg·kg-1.结论 本方法可以快速准确地测定面膜中的地塞米松.
