首页 > 文献资料
-
白细胞介素7与15在抗结核感染中的作用及应用
白细胞介素(IL-7与IL-15作为IL-2家族细胞因子,近年来由于其调控T细胞分化与增殖及其在免疫记忆形成与维持过程中的重要作用而备受关注.IL-7和IL-15均具有与IL-2相似的异三聚体结构,共同参与两面神激酶(Janus kinase,JAK;是一类非跨膜型的酪氨酸激酶)/信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路,并参与调节辅助性T淋巴细胞(Th)l/Th2型细胞因子的平衡.相对于 IL-2,IL-7和IL-15在维持机体T淋巴细胞抗结核感染中可持续发挥作用,且在结核病发生发展过程中的动态变化使其有望实现对结核病的鉴别诊断.此外,IL-7和IL-15能提高机体二次免疫应答的水平,因而在结核病预防或治疗性疫苗研究方面发挥的作用亦值得期待.
-
IL-15基因佐剂对HIV-1B亚型gp160 DNA及腺病毒载体疫苗的免疫效果的影响
本研究构建了IL15质粒以评估其对表达HIV-1gp160的DNA和腺病毒5型载体疫苗的免疫效果的影响.我们构建表达IL15的质粒pVR-IL15,将pVR-IL15联合pVR-HIVgp160初免Ad5-HIVgp160加强方式免疫BALB/c小鼠,用IFN-γ ELISPOT和ELISA等方法比较疫苗单独免疫组小鼠与疫苗加IL15佐剂组小鼠诱导的细胞免疫和体液免疫反应的强度.结果显示疫苗加IL15佐剂组小鼠诱导的细胞免疫反应和体液免疫反应比疫苗单独免疫组小鼠相均有显著增强.构建的IL15基因佐剂可以增强HIV DNA疫苗初免和腺病毒疫苗加强免疫策略的免疫效果.
-
IL-21单独或联合IL-15/IL-2对G-CSF动员人外周血单个核细胞体外增殖和抗肿瘤活性作用研究
本研究探讨IL-21单独或联合IL-15/IL-2对G-CSF动员的人外周血单个核细胞(G-PBMNC)体外增殖和抗瘤活性的影响,评价IL-21及相关细胞因子组合在肿瘤免疫治疗方面的可行性.应用IL-21单独或联合IL-15/IL-2体外培养G-PBMNC,用CCK-8法进行细胞增殖分析;以白血病细胞株K562为靶细胞,用CFSE/PI流式双染法检测其对肿瘤的杀伤作用;用流式细胞术分析免疫细胞表型.结果显示:培养72小时后单独IL-21因子组对靶细胞杀伤活性与IL-2结果相近;当效靶比为25:1时IL21+IL15/IL 21+IL15+IL2组与IL21+IL2组相比杀伤能力有显著增强(p<0.05);效靶比50:1时,细胞因子联合应用组均显著高于细胞因子单独应用组(p<0.05),以IL21+IL15+IL2诱导效果佳.复苏冻存的G-PBMNC处理结果与新鲜的G-PBMNC结果基本一致.细胞因子组和对照组相比CD3、CD4和CD8抗原表达有所增加,以IL21+IL15组的CIM、CD3-56+和CD3+56+抗原表达增加为显著(p<0.05).结论:IL-21可增强G-PBMNC的体外杀伤活性,联合IL-15可更显著提高G-PBMNC的抗瘤活性.
-
IL-15通过ERK1/2信号途径对NK细胞活性的调节
目的阐明IL-15在NK细胞功能调节中的作用及信号转导途径的活化. 方法直接免疫荧光证实NK-92细胞膜表面表达IL-15Rα链,制备NK-92细胞的全细胞提取物进行Western blot检测IL-15诱导的信号转导途径,MTT方法评价IL-15对NK细胞增殖和细胞毒能力的调节作用. 结果 NK-92细胞表面存在IL-15Rα链的表达,构成IL-15与NK相互作用的分子基础.在IL-2依赖性NK细胞系NK-92中,较低剂量的IL-15(25～100U/ml)可以完全替代IL-2以维持NK细胞的杀伤活性并对NK细胞的生长起促进作用.免疫印迹显示IL-15迅速活化ERK1/2(extracellular regulated kinase 1 and 2)信号途径,而其它信号分子(STAT1、STAT3、STAT6、P38 MAPK、PI-3K、NF-κB)并不被IL-15活化,提示ERK1/2是IL-15调节NK细胞功能中重要的信号分子. 结论 IL-15对NK细胞具有强大的调节作用,IL-15通过ERK1/2信号途径完成对NK细胞活性的调节.
-
白细胞介素15促进 Vδ2γδT 细胞杀伤人白血病 K562细胞
目的：研究细胞因子白细胞介素15（IL-15）对Vδ2γδ（Vδ2）T细胞杀伤人白血病K562细胞的影响。方法分离人外周血单个核细胞，唑来膦酸联合IL-2扩增Vδ2T细胞；体外IL-15刺激，流式检测Vδ2 T细胞活化和功能变化。结果唑来膦酸可以大量扩增Vδ2 T细胞，IL-15能活化Vδ2 T细胞，增强Vδ2 T细胞脱颗粒能力和分泌IFN-γ功能，并能促进Vδ2 T细胞杀伤人白血病细胞K562。结论 IL-15刺激可以显著活化Vδ2T细胞，增强杀伤K562细胞功能。
-
一种新型融合毒素IL15-PEΔ293的构建与体外活性测定
目的构建IL-15与铜绿假单胞菌外毒素突变体(PEΔ293)的融合蛋白IL15-PEΔ293,并且对该融合毒素进行初步的体外活性测定. 方法将人IL-15基因片段与PEΔ293的基因按正确的阅读框架融合,定向克隆在pET16b表达载体T7启动子的下游,得到表达质粒pET-IL15-PEΔ293.从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2+-NTA亲和层析纯化出融合蛋白IL15-PEΔ293.以IL-15受体(IL-15R)阳性红白血病细胞系K562、多药耐药细胞系K562/AO2以及IL-15R阴性细胞系Jurkat为靶细胞测定IL15-PEΔ293的生物活性. 结果限制性分析和测序鉴定证明融合蛋白IL15-PEΔ293表达质粒pET-IL15-PEΔ293构建正确.该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中成功表达了融合蛋白IL15-PEΔ293.利用Ni2+-NTA亲和层析从大肠杆菌菌体总蛋白中纯化出重组蛋白.该融合蛋白对IL-15R阳性细胞K562和K562/AO2有明显的剂量依赖的细胞毒作用,而对IL-15R阴性细胞Jurkat没有表现剂量依赖的细胞毒作用. 结论融合蛋白IL15-PEΔ293表达质粒构建成功,在大肠杆菌中表达纯化后的新型融合蛋白IL15-PEΔ293对IL-15R阳性细胞有良好的靶向杀伤活性.
-
土拨鼠白细胞介素15的克隆、表达和活性分析
目的 对土拨鼠白细胞介素15(woodchuck interleukin 15,wIL-15)分子进行克隆、表达并鉴定其活性,为进一步研究IL-15在嗜肝病毒感染中的作用以及评价IL-15用于治疗慢性HBV感染奠定基础.方法 用IL-15的保守引物将wIL-15基因克隆、测序并进行分析,构建wIL-15的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达,分离纯化后用淋巴细胞增殖试验检测其生物学活性.结果 wIL-15的完整编码序列为489 nt(与其他哺乳动物IL-15编码序列的同源性高达78%～87%),编码162 AA长度的前体蛋白(与其他哺乳动物IL-15蛋白的同源性高达70%～80%),其信号肽为N端的48 AA,成熟蛋白由114 AA组成.土拨鼠IL-15与灵长动物IL-15的同源性高于啮齿动物.带有His-tag的成熟蛋白,可以在大肠杆菌中表达,分离纯化后,可以刺激Con A活化的小鼠脾细胞和土拨鼠PBMC增殖(其SI值可高达10以上),并存在明显的剂量依赖性.结论 (1)wIL-15与其他哺乳动物IL-15高度同源,并且与灵长类动物的IL-15更接近.(2)wIL-15可以在大肠杆菌中表达,并在纯化后能刺激小鼠和土拨鼠淋巴细胞增殖,表现出较好的生物学活性.
-
脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞白细胞介素15、6及丙二醛表达的影响
目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal me-sothel ial cells,RPMC) hl细胞介素15(interleukin-15,IL-15),IL-6及内二醛(malondialdehyde,MDA)的影响.方法 胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代用于试验.分组:①正常对照组;②LPS组:不同浓度LPS组(1、10、100mg/L)分别作用6h和12h;③不同时间组:10mg/L LPS分别作用于RPMC 3、6、12、24 h.实时定量PCR法测IL-15mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15和IL-6的表达;硫代巴比妥法测RDA.结果 LPS可刺激RPMC的IL-15mRNA及蛋白的表达增高且在12h内呈时间剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMC IL-6的蛋白表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMC MDA的含表达增高且呈浓度依赖(P<0.05).结论 IL-15作为炎症因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程.LPS可上调RPMC IL-15、IL-6和MDA的表达,导致腹膜炎症及氧化应激.
-
终末期肝病模型联合白细胞介素15评分对慢性乙型肝炎预后预测
目的 探讨终末期肝病模型(MELD)评分联合血清白细胞介素15(IL-15)水平在判断慢性乙型肝炎患者预后预测的准确性.方法 失代偿性肝硬化患者105例,慢性乙型肝炎患者91例,重型肝炎患者101例,分别计算Child-Pugh、MELD及MELD联合IL-15评分,分析其对肝病预后评估的优缺点.结果 各评分死亡组与生存组比较差异有统计学意义(P＜0.05),联合评分、MELD和Child-Pugh对住院患者预后预测的ROC曲线下面积分别为0.825,0.814,0.779,MELD评分和联合评分的预测准确率显著优于Child-Pugh评分(P＜0.05),MELD评分和联合评分之间无统计学差异(P＞0.05).各评分在慢性乙型肝炎组、重型肝炎组的预后预测准确率均优于失代偿性肝硬化组,而在重型肝炎组中,联合评分显著优于Child-Pugh评分.结论 MELD联合IL-15评分能较好地预测慢性乙型肝炎患者预后,值得临床应用.
-
白细胞介素7和15对肺结核患者Th1/Th2平衡的调节作用
目的探讨白细胞介素7(IL-7)、IL-15对肺结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的影响.方法选择2003年1至9月入院的60例肺结核患者和25名健康对照者,用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离PBMC.按加入刺激物的不同,将每份标本分为6组:RPMI-1640组、纯化蛋白衍生物(PPD组)、PPD+IL-7组、PPD+IL-7抗体组、PPD+IL-15组、PPD+IL-15抗体组.加入相应刺激物后培养72 h,收集上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的水平.结果与PPD组相比,加入IL-7的患者组PBMC分泌IFN-γ和TNF-α显著增高,分别为(107±42)～(157±74)ng/L、(460±128)～(887±242)ng/L;显著抑制IL-4和IL-10的合成,分别为(58±15)～(31±9)ng/L、(153±40)～(112±32)ng/L.健康对照组PBMC分泌IFN-γ和TNF-α显著增高,分别为(211±57)～(292±92)ng/L、(1 203±390)～(1 722±503)ng/L;显著抑制IL-4和IL-10的合成,分别为(43±13)～(36±11)ng/L、(135±37)～(96±36)ng/L.加入IL-15患者组PBMC分泌IFN-γ和TNF-α显著增高,分别为(107±42)～(231±62)ng/L、(460±128)～(843±208)ng/L;显著抑制IL-4和IL-10的合成,分别为(58±15)～(37±9)ng/L、(153±40)～(116 ±41)ng/L.健康对照组PBMC分泌IFN-γ和TNF-α显著增高,分别为(211±57)～(343±108)ng/L、(1 203±390)～(1 468±235)ng/L;显著抑制IL-4和IL-10的合成,分别为(43±13)～(36±8)ng/L、(135±37)～(90±35)ng/L.加入IL-7抗体或IL-15抗体均可抑制IFN-γ和TNF-α的分泌,促进IL-4和IL-10的合成.肺结核患者各组IFN-γ、TNF-α水平均低于健康对照各组,而IL-4、IL-10水平比较差异无统计学意义.结论 IL-7和IL-15可作为免疫调节剂,诱导IFN-γ及TNF-α分泌,抑制IL-4及IL-10合成,从而调节Th1/Th2平衡,发挥对结核分枝杆菌感染患者的免疫保护作用.
-
白细胞介素6、白细胞介素15与疾病相关性的研究进展
常见的细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-15是免疫调节细胞因子家族的成员[1],属于先天性免疫系统的细胞因子,在组织修复、调控B细胞、参与炎症反应、活化自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)中起着重要的作用,是一类参与T细胞反应,具有治疗潜力的多功能因子.IL-6、IL-15在T细胞反应诱导及维持治疗方面具有巨大潜力,在免疫治疗中至关重要[2],现就其功能及临床特性进行综述.
-
IL-15表达质粒联合HPV基因疫苗诱导特异性淋巴细胞增殖的实验研究
目的 探讨IL-15真核表达质粒对HPV16 E7基因疫苗所诱导的小鼠特异性淋巴细胞增殖的影响.方法 利用基因重组技术构建含IL-15的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-15.将该质粒与HPV16 E7基因疫苗通过肌肉注射方式免疫雌性BALB/c小鼠.基因免疫后,制备脾淋巴细胞悬液,在体外经E7蛋白再刺激后用MTT法检测其T淋巴细胞增殖情况.流式细胞仪检测脾淋巴细胞亚群.结果 pcDNA3.1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以增强特异性T细胞增殖反应,A570差值为1.313,与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05).实验组脾CD4+淋巴细胞数量和CD4+/CD8+比值均高于对照组(P＜0.05).结论 IL-15真核表达质粒可以提高HPV16 E7基因疫苗免疫原性.IL-15基因是一种优良的HPV16 E7基因疫苗的基因佐剂.
-
IL-15对儿童MDS造血前体细胞凋亡的影响
为探讨IL-15对儿童骨髓增生异常综合征(MDS)造血细胞凋亡的影响,为临床应用提供理论依据.采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化18例MDS患者骨髓CD34+细胞,采用碘化丙锭染色、流式细胞仪分析和细胞核形态检测两种方法同时检测体外培养的MDS造血前体细胞增殖、分化过程中的凋亡状况;观察IL-15对它们的影响,并进行了定量分析.结果表明:发现IL-15可抑制体外培养的MDS造血前体细胞凋亡.在培养的第8天,IL-15 100ng.ml-1实验组细胞凋亡程度较没加IL-15的对照组明显减轻.
-
神经母细胞瘤脂类提取物对NKT细胞激活作用的实验研究
目的研究神经母细胞瘤脂类提取物对健康儿童自然杀伤T(NKT)细胞增殖程度和对NKT细胞介导的对自身肿瘤细胞的细胞毒作用的影响.方法甲醇/氯仿法提取神经母细胞瘤脂类提取物作为刺激物,采集健康儿童外周血单核细胞,培养出成熟的树突细胞,采集并分离同一个体外周血T细胞与树突细胞共同培养,分别加入脂类提取物或(和)白细胞介素15(IL-15)和粒-单系细胞集落刺激因子(GM-CSF).测定各组T细胞的增殖程度的变化,流式细胞仪测定NKT细胞占T细胞的比例(NKT/T)并分选出NKT细胞,测定各组NKT细胞对神经母细胞瘤细胞毒作用.结果肿瘤脂类提取物刺激组T细胞增殖程度、NKT/T比例、NKT细胞毒作用高于对照组(P=0.043; P=0.020;P=0.032).共刺激组(肿瘤脂类提取物+IL-15+GM-CSF)T细胞增殖程度、NKT/T比例、NKT细胞毒作用高于对照组(P=0.001;P=0.001;P=0.020),肿瘤脂类提取物刺激组(P=0.004; P=0.030; P=0.010)和细胞因子刺激组(P=0.044; P=0.049; P=0.048).结论神经母细胞瘤脂类提取物可以有效激活NKT细胞,发挥对自身肿瘤细胞的细胞毒作用.细胞因子IL-15和GM-CSF可以增强脂类提取物的激活作用.
-
IL-15表达质粒联合HPV基因疫苗诱导细胞免疫应答的实验研究
目的 研究白细胞介素15(IL-15)真核表达质粒,对人乳头瘤病毒(HPV)16E7基因疫苗所诱导的小鼠特异性细胞免疫应答的影响.方法 构建含IL-15的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-15.将该质粒与HPV16 E7基因疫苗通过肌肉注射方式免疫雌性BALB/c小鼠.基因免疫后测定其血清γ-干扰素(IFN-γ)水平;并制备脾淋巴细胞悬液,经体外E7蛋白再刺激后用MTT法检测其T淋巴细胞增殖情况.结果 pcDNA3.1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以提高免疫小鼠血清中IFN-γ水平至414.1pg/ml,与E7+空质粒组、E7组比较差异有统计学意义(P＜0.01).pcDNA3-1-IL-15与pcDNA3.1-E7共同注射,可以增强特异性T细胞增殖反应,OD570差值为1.313,与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 IL-15真核表达质粒可以提高HPV16 E7基因疫苗的免疫原性,增强小鼠细胞免疫应答.
-
白细胞介素15的研究进展
细胞因子在调节免疫反应中发挥着重要作用,白细胞介素(IL)2常作为免疫佐剂来增强免疫反应.IL-15是一种新近发现的细胞因子,具有与IL-2类似的作用,如激活T细胞、B细胞和自然杀伤细胞,并可介导这些细胞的增殖和存活.IL-15具备IL-2所不具备的优势,如IL-15能激活、维持和扩增CD8+记忆性T细胞,不激活调节性T淋巴细胞(Tregs),并解除Tregs对T细胞的抑制作用,而Tregs对免疫的各个方面都有负调节作用,显示了IL-15在免疫调节中的优势.
-
IL-15与自身免疫病
从IL-15的组织分布、表达调控及具体生物学功能等方面对IL-15与自身免疫病(autoimmune disease,AID)的关系进行分析和阐述,并列举了5种与IL-15相关的AID及4种以IL-15/IL-15R为靶向的AID治疗策略.
-
白细胞介素15和骨桥蛋白在大鼠肾移植急性排斥反应早期的表达
目的 研究白细胞介素(IL)15、骨桥蛋白、穿孔素及颗粒酶B在大鼠肾脏移植急性排斥反应(AR)早期的表达变化.方法 以BN大鼠和LEW大鼠分别作为供受体,建立大鼠肾移植动物模型.环孢素A处理组(CsA组):(BN→LEW,术后注射环孢素A);IL-15阻断组:(BN→LEW,术后注射IL-15抗体);AR组:(BN→LEW,术后注射生理盐水);对照组:(LEW→LEW,术后注射生理盐水).对照组6只大鼠,其余组10只大鼠,于移植后1、3、5、7 d取外周血,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测骨桥蛋白、IL-15、穿孔素及颗粒酶B mRNA的表达,并作移植肾病理分析.结果 AR组、CsA组及IL-15阻断组肾移植术后IL-15、骨桥蛋白mRNA表达逐渐上调,第5天均达到高峰;对照组均处于低水平.术后第5天,CsA组和IL-15阻断组IL-15 mRNA分别为9685±1440、4346±741均低于AR组(17 022±2153,P<0.01),IL-15阻断组明显低于CsA组(P<0.01);CsA组和IL-15阻断组骨桥蛋白mRNA分别为13 226±1565、19 112±2908均低于AR组(24 663±2449,P<0.01),IL-15阻断组明显高于CsA组(P<0.01).术后第5天IL-15阻断组和CsA组穿孔素和颗粒酶B mRNA表达明显低于AR组(P<0.01).移植肾病理组织检查显示,AR组呈现重度急性排斥反应,IL-15阻断组排斥反应征象轻微.结论 大鼠肾移植AR发生早期骨桥蛋白、IL-15、穿孔素和颗粒酶B mRNA在外周血中均高水平表达,通过阻断IL-15/IL-15受体途径可明显下调颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达.
-
多发性硬化患者外周血中记忆性T细胞亚群的水平
目的 测定多发性硬化(MS)患者记忆性T细胞亚群的水平,并探讨可能导致记忆性T细胞亚群变化的机制.方法 采用流式细胞仪和酶联免疫吸附分析(ELISA)分别检测未治疗MS、脑梗死和正常对照组的外周血记忆性T细胞亚群表型和血浆白细胞介素-15(IL-15)浓度.结果 MS患者CD8+中心记忆性T细胞(TCM)明显高于正常对照组(20%±11%和13%±6%,P＜0.05),CD8+终末效应记忆性T细胞显著少于正常对照组(24%±15%和39%±19%,P＜0.05);MS患者血浆IL-15水平较正常对照显著升高(36.01 pg/ml和9.53 pg/ml,P＜0.05).结论 MS患者外周血CD8+TCM的上调可能反映了在MS早期被诱导产生的一个持续的慢性炎性应答,而IL-15则可能参与了促进TCM分化的调节过程.
关键词： 多发性硬化 白细胞介素15 趋化性细胞因子受体7 记忆性T细胞 -
IL-2和IL-15激活供者自然杀伤细胞在异基因造血干细胞移植应用的实验研究
目的 探讨IL-2和IL-15激活的供者自然杀伤(NK)细胞在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中减轻移植物抗宿主病(GVHD)发挥移植物抗白血病效应方面的作用.方法 采用免疫磁珠分选小鼠脾NK细胞,采用添加IL-2和IL-15的培养基扩增NK细胞并测定NK细胞杀伤活力.C57BL/6小鼠作为供鼠,BALB/c小鼠作为受鼠,部分小鼠移植前8天静脉接种EL9611白血病细胞.异基因移植小鼠输注骨髓细胞5×106 和脾细胞5 × 106.NK细胞治疗组输注骨髓细胞和脾细胞各5×106 以及激活的NK细胞1 × 107,并且给予腹腔注射IL-2和IL-15.移植后观察GVHD发生、生存期、嵌合度、免疫重建.结果 分选NK细胞纯度为95.7%～97.1%.培养后NK细胞杀伤活力较静息时增加3倍.单纯异基因骨髓细胞输注组小鼠未见GVHD发生,异基因骨髓及脾细胞移植对照组移植后1周起开始出现GVHD表现.实验组小鼠发生GVHD的严重程度明显低于脾细胞输注小鼠(P＜0.05).单纯全身照射预处理小鼠生存期9.5～14.0 d.白血病模型中对照组移植后100 d生存率10%,其余死于白血病;实验组80%生存期超过100 d,实验组生存期明显长于对照组(P＜0.01).实验组小鼠移植后2周外周血NK细胞占4.8%,对照组外周血NK细胞占2.8%,实验组NK细胞恢复早于对照组(P＜0.05).实验组TRBV基因重建比对照组快,而且TRBV家族基因表达数比对照组多,对照组小鼠多见单克隆及寡克隆表达.结论 IL-2和IL-15在体外可以有效促进NK细胞增殖与激活.allo-HSCT时给予激活的供者NK细胞输注以及相关细胞因子处理可以促进免疫重建、减轻GVHD发生、降低白血病复发.
