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Skp2-siRNA构建及其对食管癌细胞Eca-109p27和Bcl-2蛋白表达的影响
目的:研究siRNA抑制Skp2基因在食管癌细胞中表达,探讨Skp2在肿瘤发生过程中的作用.方法:在skp2基因编码区选择4个RNAi作用位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPER-retro (pRS),转染包装细胞PT67,收集含病毒颗粒的培养上清感染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后形成稳定克隆.流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR和免疫印迹法检测Eca-109细胞内Skp2 mRNA、p27和Bcl-2表达.结果:与正常细胞和空载细胞相比,筛选得到的2个克隆细胞Skp2 mRNA表达水平下降(P<0.01),p27表达增高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05).结论:skp2 siRNA促进食管癌细胞凋亡与p27上调有关.
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Skp2-siRNA重组腺病毒载体构建及鉴定
目的:构建针对Skp2的siRNA腺病毒载体.方法:合成针对Skp2的siRNA靶DNA序列及相应阴性对照序列,退火成DNA双链,然后亚克隆穿梭质粒pShuttle-H1,Pne I线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染AD293细胞,包装得到pAd-Skp2-siRNA和pAd-Skp2-siRNA-NC重组腺病毒.用病毒体外感染结肠癌SW480细胞,Western blot检测Skp2蛋白表达水平.结果:重组腺病毒载体经酶切、鉴定正确,制备的病毒感染效率高,能显著抑制Skp2蛋白表达.结论:细菌内同源重组成功构建了Ad-Skp2-siRNA重组腺病毒及阴性对照病毒.
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P27、SKP2在肝细胞肝癌中的表达及相关性研究
目的研究靶蛋白P27和SKP2蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及与肝细胞肝癌各项临床病理指标的关系.方法用免疫组化二步法检测P27和SKP2蛋白在48例肝细胞肝癌、20例肝硬化及16例正常肝组织中的表达.结果 48例肝癌组织中P27的阳性表达率(45.8%)显著低于肝硬化组织(80.0%)和正常肝组织(75.0%). P27阳性表达与组织分化程度(P<0.01)、转移(P<0.05)、肿瘤大小(P<0.05)密切相关.48例肝癌组织中的SKP2的阳性表达率(33.3%)显著高于肝硬化组织(阴性表达)和正常肝组织(阴性表达),SKP2在肝细胞肝癌中的表达与组织分化程度(P<0.01)、转移(P<0.05)密切相关.肝细胞癌中SKP2的表达与P27表达呈负相关(r=-0.562, P<0.01). 结论肝细胞肝癌中SKP2的表达与P27的降解有关,P27的低表达可能与肝细胞肝癌的发生发展有关.SKP2的表达提示预后不良.
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食管鳞癌Skp2蛋白表达及与P27的相关性
目的研究Skp2和P27蛋白在食管鳞癌中表达,探讨它们之间的关系及其临床意义.方法应用免疫组化Sp法检测70例食管鳞癌中Skp2和P27蛋白的表达并分析相关性.结果 Skp2蛋白在癌旁正常组织、不典型增生及食管鳞癌组中阳性表达率分别为10.00%(2/20)、37.04%(10/27)、41.43%(29/70),后两者的阳性率显著高于前者(P＜0.05).P27在正常组织的阳性率为85.00%(17/20),高于食管鳞癌组48.57%(34/70),其差异有显著性(P＜0.01).Skp2蛋白在食管鳞癌组织中表达Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05),且与淋巴结转移显著正相关.P27蛋白表达与食管癌淋巴结转移负相关,Skp2蛋白表达与P27表达呈负相关.Skp2表达阳性及P27表达阴性提示预后较差(5年累积生存率40.63%,P＜0.05).结论 Skp2和P27蛋白表达的检测可能成为判断食管鳞癌预后的指标,指导患者的临床治疗,并为早期诊断食管鳞癌提供参考.
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姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究
目的:探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制.方法:通过MTT检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60 μmol/L)处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60 μmol/L)处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况.结果:姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达(P＜0.05),而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关.
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Skp2与肿瘤的生物学性状、预后及治疗
S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对正常细胞周期调控起重要作用.在多数恶性肿瘤组织中Skp2呈过表达,并通过泛素化降解细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1,使细胞G1-S期进程加速.Skp2具有致癌潜能,与肿瘤的增殖,分化,抵抗凋亡和耐药性等生物学性状关系密切.Skp2不仅可作为判断肿瘤患者预后独立的指标,还可能成为肿瘤的药物和基因治疗的新靶点.
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携带SKP2基因的shRNA表达质粒的构建与鉴定
目的 构建含人SKP2基因不同位点的一系列shRNA真核表达质粒,并进行酶切鉴定、测序.方法 设计合成3对SKP2基因干扰寡核苷酸序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pSIREN-RetroQ载体,构建成能产生SKP2短发卡RNA的质粒.结果 构建的核苷酸序列经鉴定构建成功,能成功的克隆入带有pSIKEN RetroQ的载体中.结论 成功构建并鉴定了针对人SKP2基因3个不同位点的shRNA的真核表达质粒,为SKP2为靶点的肿瘤基因治疗研究奠定了基础.
关键词： 质粒 pSIREN-RetroQ载体 SKP2 RNA干扰 胰腺肿瘤/治疗 -
HGF下调Skp2表达抑制人肝癌细胞增殖的实验研究
目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对人肝癌细胞增殖的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2用于实验.通过BrdU细胞增殖酶联免疫实验观察HGF对细胞增殖的作用,采用Western印迹和RT-PCR法检测HGF对S期激酶结合蛋白2(Skp2)表达的影响.将Skp2真核细胞重组表达质粒转染HepG2细胞并获得稳定转染的过表达Skp2的HepG2细胞,观察HGF对该转染细胞增殖的影响.结果 HGF对HepG2细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用;HGF明显抑制HepG2细胞表达Skp2蛋白和mRNA.但HGF对过表达Skp2的HepG2细胞无增殖抑制作用.结论 HGF对HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调Skp2表达密切相关.
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Skp2在骨肉瘤中的表达及与预后的关系
目的:探讨Skp2在骨肉瘤中表达及其与P27,临床病理及预后的关系.方法:收集采用肿瘤根治术治疗骨肉瘤患者标本52例,采用免疫组织化学SP染色法检测这组标本的Skp2及P27的表达情况;并对骨肉瘤患者预后进行随访,44例患者获得平均31.2(4～84)月随访,失访8例.20例存活5年以上,24例死亡.结果:Skp2在骨肉瘤中呈高度表达(均值为1.74);骨肉瘤Ⅲ期的Skp2蛋白的表达强度与Ⅱ a期和Ⅱ b期有显著性差异(P<0.05),与患者的性别、年龄及病理组织学分型未见明显相关性(P>0.05).Skp2蛋白表达与骨肉瘤的复发转移、5年生存率具有相关性(P<0.05),并且与P27蛋白表达在骨肉瘤中呈负相关,(r=-0.907,P<0.05).结论:Skp2通过介导P27的降解,在骨肉瘤的发生、发展中发挥重要作用.Skp2与骨肉瘤的侵袭、转移相关,可作为骨肉瘤的预后指标.
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S期激酶相关蛋白2在骨肿瘤组织中的表达及其与恶性程度的关系
目的 探讨S期激酶相关蛋白2在骨肿瘤组织上的表达及其与肿瘤恶性程度的关系.方法 收集了湘雅医院1999～2004年经外科手术切除的52例骨肉瘤,29例骨巨细胞瘤,15例骨软骨瘤并经病理确诊的石蜡包埋标本.另取10例来源于非肿瘤患者的新鲜正常骨组织常规固定、脱钙包埋切片作为对照组.采用免疫组织化学SP染色法检测上述标本的Skp2表达情况.结果 Skp2蛋白在正常骨组织不表达(按Bresalier法染色强度为0);骨软骨瘤中呈低度表达(均值为0.59);骨巨细胞瘤中度表达(均值为1.17);骨肉瘤高度表达(均值为1.74);差异有显著性(P<0.05).Skp2蛋白在骨肉瘤Ⅱa期均值为1.42,Ⅱb期为1.54,Ⅲ期为2.60.差异也均有显著性(P<0.05).结论 Skp2的表达水平与骨肿瘤的恶性程度相关,有望成为骨肉瘤新的基因诊断指标.
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宫颈腺癌中HPV感染与Skp2、p27kip1蛋白表达的研究
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)和细胞周期调控因子p27kip1在宫颈腺癌发生发展中的作用,分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与Skp2、p27kip1蛋白表达关系.方法 采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化(二步法)检测HPV16/18DNA和Skp2、p27kip1蛋白在86例宫颈腺癌和24例慢性宫颈炎组织中的表达.结果 宫颈腺癌组HPV16/18DNA与Skp2蛋白阳性表达率分别为65.1%和68.6%,均显著高于慢性宫颈炎组(P＜0.01).p27kip1蛋白在宫颈腺癌组中的阳性表达率为55.8%,明显低于慢性宫颈炎组(P＜0.05).HPV16/18感染与宫颈腺癌病理分级和组织学类型无明显相关性,但与Skp2表达呈正相关(P＜0.05),与p27kip1表达呈负相关(P＜0.05).Skp2表达与宫颈腺癌的病理分级有关,G2、G3组阳性表达率均明显高于G1组(P＜0.05).Skp2和p27kip1表达与宫颈腺癌组织学类型有明显相关性.结论 宫颈腺癌的发生与HPV16/18感染及Skp2、p27kip1蛋白的表达异常相关,三者协同作用导致宫颈腺癌恶性发展.
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SKP2、P27KIP1蛋白表达与胃癌的临床关系
目的探讨细胞S相激酶相关蛋白(SKP2)、P27KIP1蛋白表达与胃癌的临床关系.方法用免疫组化SP法检测69例胃癌中SKP2、P27KIP1蛋白的表达.69例胃癌组织中P27KIP1、SKP2蛋白表达率分别为46.38%、33.33%;随肿瘤分化程度降低、浸润深度加深、恶性程度增加,P27KIP1阳性表达率逐渐降低(P＜0.05),SKP2阳性表达率随肿瘤分化程度降低而升高;二者的阳性表达率均与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小及部位无关(P＞0.05).P27KIP1与SKP2表达呈显著负相关(P＜0.01).P27KIP1、SKP2异常表达可加速细胞周期转化,促进胃癌的发生,其蛋白检测尤其是P27KIP1蛋白检测有助于胃癌恶性程度和预后的判断;泛素-蛋白酶体途径可能在胃癌发生中扮演着重要角色.
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Cullin-1和Skp2在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达
目的：探讨细胞周期蛋白Cullin-1（Cul-1）和S期激酶相关蛋白2（Skp2）在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达及意义，同时对比它们在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达水平，比较二者的分布情况，找出其差异性及相关关系。方法应用免疫组化方法检测Cul-1和Skp2蛋白在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的表达。结果在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中Cul-1的平均阳性表达率分别为76%、77%、54%；阳性表达值分别为1.63±0.7、1.62±0.68、1.15±0.64， Cul-1在2种鼻咽癌中的表达高于癌前病变，差异有统计学意义（P<0.05），2种鼻咽癌之间无差异；Skp2在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的平均阳性表达率为32%、41%、33%，平均阳性表达值分别为0.53±0.49、0.82±0.54、0.72±0.43，无统计学差异。对20例分化型鼻咽癌标本Cul-1、Skp2阳性表达值进行相关关系分析，两者相关性不显著。结论 Cul-1参与了鼻咽癌发生、发展，Skp2则可能参与了鼻咽癌的发生过程，它参与的细胞周期调节可能是鼻咽癌发生的早期事件；两种蛋白因子在细胞周期调控中的关系有待进一步验证。
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Cx43、Skp2在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及临床意义
背景与目的:间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)是间隙连接蛋白家族的主要成员,在多种肿瘤细胞中表达下降.它在许多细胞系以依赖间隙连接(Gapjunction)的途径发挥抑癌作用.近研究发现它还可能通过抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)的表达而起到抑制肿瘤生长的作用.Skp2是F-box蛋白家族的成员,它能特异性识别并促进某些调节G1期进程的关键性细胞周期调节物的降解,在许多肿瘤中表达升高.本研究检测Cx43和Skp2在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨它们的表达与卵巢癌发展的关系,以及这两种蛋白表达的相互关系.方法:收集81例卵巢上皮性肿瘤的外科手术石蜡标本(良性13例、交界性12例、恶性56例),用免疫组化的方法检测Cx43和Skp2蛋白的表达水平.分析它们的表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系.结果:Cx43蛋白在卵巢上皮性良性、交界性及恶性肿瘤中阳性率分别为84.6%、66.7%和33.9%,经免疫组化半定量分析,其在上皮性卵巢癌中的表达水平明显低于良性肿瘤(P＜0.01)和交界性肿瘤(P＜0.01),在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异(P＞0.05),而在中低度分化组、Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别明显低于高分化组(P＜0.05)、Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05)及无淋巴结转移组(P＜0.05).Skp2在良性上皮性肿瘤及交界性肿瘤中表达阴性,而在恶性上皮性肿瘤中阳性率为46.4%,半定量分析表明其表达水平在上皮性卵巢癌明显高于良性(P＜0.01)和交界性肿瘤(P＜0.01),在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异(P＞0.05),而在不同病理分级、临床分期及淋巴结转移组中,中低度分化组、Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别明显高于高分化组(P＜0.01)、Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.01)及无淋巴结转移组(P＜0.01).此外,在上皮性卵巢癌中,Cx43表达-、+、++的各组中,Skp2阳性率分别为62.2%、17.7%、0,与Cx43表达水平负相关(r=-0.48,P＜0.01).结论:在卵巢上皮性肿瘤中,Cx43特异性低表达于卵巢癌,Skp2特异性表达于卵巢癌,提示Cx43表达下降、Skp2表达升高在上皮性卵巢癌的发生和发展中起重要作用.在卵巢癌中,Skp2的表达上调可能与Cx43的表达下降有关.
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Skp2表达在结外NK/T细胞性淋巴瘤中的意义
Background and Objective: Expression of Skp2 was related with the prognosis of several tumors. However, there was no intensive study on the relationship between Skp2 and extranodal NK/T-cell lymphoma. This study was to explore the role of Skp2 in extranodal NK/T-cell lymphoma. Methods: The clinicopathological data of 39 patients with extranodal NK/T-cell lymphoma were analyzed. The expression of Skp2 was examined by immunohistochemistry on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Results: Among the patients with high expression of Skp2, complete remission (CR) rate was only 14.3% (2/14). However, CR rate among the patients with low expression of Skp2 was 68.0% (17/25). Significant difference was shown between these two groups (P < 0.001). In the group of low expression, the median overall survival (OS) was 85.59 months (95% Cl: 35.83-135.34 months), the 1- and 2-year OS rates were 81% and 71%, respectively. However, in the group of high expression, the median OS was only 9.73 months (95% Cl: 2.05-17.40 months), the 1- and 2-year OS rates were 42% and 14%, respectively. There was statistical difference between these two groups (P < 0.001). Muttivariate analysis showed that Skp2 expression (P < 0.001), LDH (P = 0.026) and ECOG PS (P = 0.003) were dependent prognostic factors of extranodal NK/T-cell lymphoma. Conclusion: High expression of Skp2 is an independent unfavorite adverse prognostic factor of extranodal NK/T-cell lymphoma.
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Skp2与血管平滑肌细胞增殖
血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的过程涉及到细胞周期的调控,S期激酶相关蛋白2(Skp2)能介导泛素化蛋白通过泛素蛋白酶降解途径进行降解,参与了细胞周期调控,与VSMC增殖密切相关.本文就Skp2与VSMC的增殖关系作一综述.
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细胞 S 期激酶相关蛋白2和 p27 kip1在胆囊癌中的表达及与临床病理的关系
目的：研究细胞S期的激酶相关蛋白2（Skp2）以及p27kip1在胆囊癌中的表达情况，并探讨它们的相互关系及与临床病理的关系。方法收集已经病理确认的胆囊癌标本17例及慢性胆囊炎标本10例，应用免疫组织化学S－P法检测17例胆囊癌及10例慢性胆囊炎标本Skp2及p27kip1的表达状况。结果在17例胆囊癌切片标本中出现Skp2高表达15例，低表达2例；在10例慢性胆囊炎切片标本中出现Skp2高表达3例，低表达7例；Skp2在胆囊癌和慢性胆囊炎中的表达差异有统计学意义（P＜0．05）。而p27kip1在10例慢性胆囊炎标本中高表达8例，低表达2例；而在17例胆囊癌中低表达14例，高表达3例；p27kip1在胆囊癌和慢性胆囊炎中的表达差异有统计学意义（P＜0．05）。在17例胆囊癌组织中，Skp2蛋白高表达的15例中，p27kip1蛋白表现为低表达13例；在Skp2蛋白低表达的2例中，所有患者的p27kip1蛋白都表现为高表达。两者之间差异有统计学意义，并且呈现负相关（r＝－0．658，P＜0．05）。 Skp2和p27kip1在胆囊癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤T分期、临床分期无关（P＞0．05）。结论 Skp2、p27kip1在胆囊癌的发生、发展中有重要作用，Skp2促进了胆囊癌的发生，而p27 kip1在胆囊癌的发生和发展的过程中起抑制作用，两者在胆囊癌的发生和发展中相互作用。
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P27kip1、Jab1、Skp2在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义
目的:探讨P27kip1、Jab1、Skp2在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及意义.方法:用免疫组化的方法检测NHL中P27kip1、Jab1、Skp2的表达.结果:在NHL中P27kip1表达阳性样本比例低于对照组,Jab1及Skp2表达阳性样本比例高于对照组.在NHL中Jab1与P27kip1表达呈负相关.Jab1、Skp2过表达,P27kip1低表达均与不良预后相关.Jab1过表达与肿瘤大小及国际预后指数(IPI)有相关性;Skp2表达与肿瘤转移及IPI有相关性.结论:在NHL中,Jab1表达与P27kip1呈负相关.在NHL中,Jab1、Skp2过表达以及P27kip1低表达与不良预后有关.P27kip1、Jab1、Skp2的表达为NHL的诊断和治疗提供了临床依据.
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抑制Skp2基因表达对NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究抑制Skp2基因表达对NK/T细胞淋巴瘤细胞系HANK1细胞增殖和凋亡的影响,探讨抑制Skp2基因表达治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值.方法:用RNA干扰(RNA interference,RNAi)方法抑制HANK1细胞Skp2基因表达,实时定量RT-PCR和Western blot检测Skp2基因表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡.结果:Skp2-shRNA表达载体明显抑制HANK1细胞Skp2基因表达,细胞增殖受抑,细胞周期G1期停滞,凋亡细胞增多.结论:抑制Skp2蛋白功能可能是治疗NK/T细胞淋巴瘤的好方法,值得深入研究.
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p27kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌中的表达及临床意义
目的:检测p27kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达情况, 探讨几种蛋白之间的相关性及其与肾细胞癌各项临床病理参数的关系. 方法:采用组织微阵列技术及免疫组化SP法检测p27kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在80例肾细胞癌及40例正常肾组织中的表达并作统计学分析.结果:①肾细胞癌中p27kip1阳性表达率低于正常肾组织(P=0.007),cyclin D1、cyclin D3、Skp2阳性表达率高于正常肾组织(分别P=0.001,P=0.04,P=0.024); ②p27kip1与Skp2表达强度呈负相关(r=-0.262, P=0.019), p27kip1与cyclin D1表达强度呈负相关(r=-0.285,P=0.010),cyclin D1与cyclin D3之间呈正相关 (r=0.314,P=0.002);③p27kip1的表达与肿瘤分化程度及临床分期呈负相关(P<0.05),Skp2表达与肿瘤分化程度呈正相关(P=0.002).结论:Skp2、p27kip1的表达与肾细胞癌发生及生物学特性密切相关,为肾细胞癌诊治的研究提供了新的思路和依据.
