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血浆样品中叶黄素的快速测定
目的 建立一种血浆样品一步处理的简易方法,以解决血浆中叶黄素的大批量快速测定问题.方法 取人体新鲜静脉血为样品,采用甲醇去蛋白并提取叶黄素,液相色谱测定.色谱条件为:C18色谱柱(250 mm×4.60 mm×5μm),甲醇∶乙腈(65∶35)为流动相,流速0.8 ml/min,检测波长446 nm,进样量20 μl,柱温25℃.同时测定叶黄素标准溶液及血浆样品在常温下放置10h及-20℃条件下放置10 d内叶黄素含量的变化情况.结果 叶黄素在0.005～0.200 μg/ml浓度范围内与峰面积线性关系良好(r =0.999);回收率为95.2％ ～ 96.0％;方法的检出限(LOD)为0.010 μg/ml,定量限(LOQ)为0.05 μg/ml;相对标准偏差为1.5％.同时血浆样品在-20℃冷冻状态下10d之内稳定.结论 该方法操作简单,稳定性好,适用于大样本人群叶黄素的测定.
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MTX型全自动血凝仪技术探讨
本文论述了 MTX型血凝仪的技术特点；分析了仪器的检测原理和结构功能；简述了临床常规项目及应用。
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盐酸二甲双胍血药浓度的HPLC-UV测定
[目的]建立了一种直接测定人血浆中盐酸二甲双胍浓度的高效液相色谱-紫外检测法.[方法]血浆中加入内标吗啉双胍后用体积分数为60%的高氯酸(HClO4)沉淀去蛋白,进行高效液相色谱-紫外检测.采用Shimadzu ODS柱(4.6mm ID*150mmL),流动相为甲醇-0.01mol/LNaH2PO4(内含1mmol/L离子对试剂十二烷基硫酸钠)(40:60),流速1.0ml/min,检测波长为232nm.[结果]血浆中盐酸二甲双胍的低检出量为20μg/ml,线性范围为0.02～10μg/ml,日内和日间精密度均低于9%,平均回收率为102.04%.[结论]该方法简便,专属性强.
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固相萃取-反相液相色谱法测定氯雷他定人血浆药物浓度
目的:建立-种灵敏的HPLC方法测定氯雷他定血药浓度的方法,以进行该药物的血药浓度的监测.方法:采用甲醇-水(80:20)为流动相,HYPERSIL-ODS2(4.6×150mm,5 μ)色谱分析柱,检测波长248nm.血浆样品采用硅胶小柱固相萃取后进样分析.结果:氯雷他定血浆样品测定的线性范围为0.35-50ng@ml-1,方法回收率为93.41%-102.15%.结论:该方法适用于氯雷他定血药浓度测定,灵敏快速.
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不同填料的固相小柱对人参皂苷Re血浆样品萃取回收率的研究
目的:以人参皂苷Re为研究对象,考察固相萃取小柱的洗脱条件和不同填料固相小柱的萃取效率,从而确定固相萃取人参皂苷Re血浆样品的实验方法.方法:以水,乙腈及不同含量的甲醇对固相小柱进行洗脱,将洗脱液在Zorbax SB-C18(4.6 mm×75 mm,5 μm)柱上以乙腈-水进行梯度洗脱,进行高效液相色谱分析.确定人参皂苷Re在固相萃取小柱上的洗脱条件.通过比较不同固相填料的萃取回收率,选择佳的固相萃取小柱.结果:大可用甲醇清洗含量为40%甲醇,甲醇洗脱小含量为80%的甲醇;在所考察的3种固相填料中,以Waters OasisHLB柱为固相填料时样品的萃取回收率好.结论:经试验,Waters Oasis HLB柱的萃取回收率在103%～113%,适用于血浆中人参皂苷Re的分析.
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用高效液相色谱方法测定人血浆中美洛昔康浓度
建立了测定人血浆中美洛昔康浓度的HPLC-UV检测法.以吡罗昔康为内标物,血浆样品经液-液萃取处理后进行HPLC检测.线性范围为20.0～2 000.0 ng/mL,低定量限为20.0 ng/mL.
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HPLC法测定血浆中托瑞米芬浓度
目的:建立简便可靠的托瑞米芬(Tor)体内浓度的测定方法.方法:以吲哚美辛为内标,蛋白沉淀法进行预处理,用HPLC紫外检测,C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-0.1 mol*L-1乙酸铵(65∶35,V/V),流速1.0 mL*min-1,检测波长277 nm.结果:Tor保留时间为9.1 min,低定量限为0.5 μg*mL-1,线性范围0.5～10 μg*mL-1,r=0.999 7,处理后血浆样品稳定性良好,平均批内、批间RSD均＜4%.结论:该方法符合相应要求,适用于基础医学研究和Tor人体血药浓度检测.
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RP-HPLC法测定拉莫三嗪的血药浓度及应用
拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)为一种苯三嗪类的广谱抗癫()药,在1998年被美国FDA批准用于癫()局限性发作的辅助治疗.由于其半衰期较长(24～30 h),可以2次/d给药.有许多研究报道该药安全、有效,有效治疗浓度为1～4 μg/ml,临床应用不断增加[1,2 ].由于该药与当前所用的抗癫()药如丙戊酸、卡马西平在药代动力学上的相互作用,导致个体间血药浓度差异较大.因此,我们建立了一种高效、灵敏的RP-HPLC法测定人体内的 LTG血药浓度,为临床合理用药提供依据[3,4].
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HPLC测定尼莫地平血药浓度
尼莫地平是二氢吡啶类钙拮抗剂,在临床广泛用于脑血管疾病的治疗.有关尼莫地平的血药浓度测定虽已有HPLC方法报道,但血样预处理基本是采用正己烷和乙醚混合液提取,背景干扰大,出峰时间长,使操作和测定繁琐.我们在对多种提取溶剂进行实验后,选用乙酸乙酯提取血浆样品,并用该法测定了尼莫地平的血药浓度并用于药动学研究,取得满意结果.
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ACL型血凝仪分析转盘使用中存在的问题和建议
进口血凝仪分析转盘属价高消耗品,许多医院分别采取各种方法加以节省,或者用国产分析转盘替代进口分析转盘,这里就有关分析转盘再利用并结合几家医院采取的措施谈谈自己的认识.方法一,把用过的分析转盘浸没在双缩脲试剂中浸泡三天,待纤维蛋白溶解后,再把分析转盘冲洗干净,干燥待用.这样做的好处是省时省力.缺点是表面上洁净的分析转盘,反应部位由于较窄易残留双缩脲试剂,但用肉眼难以查觉.作者曾尝试用,发现有些分析转盘在对正常范围血浆样品测定过程中,可引起血凝检测项目PT、APTT、TT结果延长或不凝.评价是测定结果不稳定,重复性差.这是由于残留双缩脲试剂本身的溶蛋白作用引起的.方法二,实验完成后,立即用针灸针划拨纤维蛋白凝块,把凝块拨离出来,但较为困难,易取不干净.
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高效液相色谱法测定血浆中格列吡嗪的浓度
目的:研究格列吡嗪的药物动力学及其制剂的开发.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定血药浓度.结果:该法在20.54～1 027.00 ng*mL-1浓度范围内有良好的线性关系,回收率100.0%,日内、日间变异系数均小于4.8%,低检测浓度10 ng*mL-1.结论:该法适合于药物动力学研究.
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UFLC-MS/MS法测定急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星含量及其药代动力学差异
目的 建立高效液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆左氧氟沙星含量的方法,并研究急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星的药代动力学变化情况.方法 采用超快速液相色谱串联质谱(UFLC-MS/MS)法,以Gemini 3u C18柱(75 mm×3 mm,3 μm)分离,以乙腈:水:甲酸(体积比55:45:0.1)为流动相进行洗脱,流速0.4 mL/min,柱温30℃,进样10 μL,电喷雾正离子电离(ESI)模式、多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式进行检测.12只大鼠被随机分为平原组与高原组(n=6),实验前禁食12 h.实验时,大鼠灌胃给予左氧氟沙星(20 mg/kg).于给药前(0 h)和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12和24 h,由眼眶静脉丛采血0.2 mL,并采用UFLC-MS/MS法测定大鼠体内左氧氟沙星浓度.结果 左氧氟沙星的峰面积与其质量浓度在一定浓度范围内均呈良好的线性关系(r=0.999 5),该方法线性范围为5.00~2.00×105 μg/L,低检测限为5.00 μg/L.比较急进高原组与平原组大鼠体内左氧氟沙星药动学参数,发现其发生了显著变化,药时曲线下面积从(5 799.27±1 867.18)(μg·h)/L增大到(33 828.41±8 196.08)(μg·h)/L,峰浓度增大、体内平均驻留时间延长、总清除率降低,且差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 急进高原后,左氧氟沙星在大鼠体内代谢过程发生明显变化,研究结果为平原和急进高原后临床合理应用左氧氟沙星提供参考依据.
关键词： 超快速液相色谱串联质谱 左氧氟沙星 血浆样品 药代动力学 急进高原 -
HPLC-荧光法测定坎地沙坦血药浓度及坎地沙坦酯制剂的生物等效性研究
目的:建立准确、灵敏的测定坎地沙坦血药浓度的方法,并研究坎地沙坦酯胶囊的生物等效性.方法:血浆样品用乙醚处理后,采用高效液相色谱-荧光法进样测定,色谱柱为DiamonsilC18,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(66∶34,磷酸调pH至4),内标为缬沙坦,荧光检测器激发波长为265nm、发射波长为395 nm.另对坎地沙坦酯胶囊(受试制剂)与坎地沙坦片(参比制剂)进行药动学参数比较,判断2种制剂的生物等效性.结果:血浆中坎地沙坦浓度在0.98～500.00 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 7,n=2),低、中、高3种质量浓度样品的绝对回收率分别为95.89％、101.82％、100.75％,相对回收率分别为99.9％、99.8％、103.7％,日内和日间RSD分别为3.2％～9.0％和4.2％～7.8％(n=5).受试制剂经对数转换后的药动学参数AUC0-36h、AUC0-∞、cmax的90％可信限分别落在参比制剂的80.4％～107.3％、80.2％～107.0％、80.1％～111.6％范围内.tmax经非参数检验无显著性差异.结论:本方法操作简便、灵敏度高,适用于血浆中坎地沙坦的浓度测定.坎地沙坦酯胶囊与片剂生物等效.
关键词： 坎地沙坦 高效液相色谱-荧光法 血浆样品 血药浓度 -
柱前衍生化法测定血浆中醋酸精氨酸的浓度
目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法测定血浆样品中醋酸精氨酸浓度的方法.方法:衍生剂为 2,4-二硝基氟苯,色谱柱为氨基酸分析专用 ODS色谱柱,流动相为 50%乙腈-0.1 mol/L醋酸钠溶液(29: 71),流速为 1.2 ml/ min,检测波长为 360nm,柱温为 30℃.结果:醋酸精氨酸检测浓度线性范围为 10～ 160μ g/ ml(r=0.9 998),高、中、低 3种浓度血浆样品的回收率分别为(96.64± 9.69)%、(90.94± 4.70)%、(92.72± 4.48)%,精密度 <3.91%.含药血浆在冰冻条件(- 24 ℃)下至少可以稳定 15d.结论:本法简便可行,适用于醋酸精氨酸的血药浓度监测及其药动学研究.
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高效液相色谱法测定人血浆中甲苯咪唑含量
目的建立固相萃取、反相高效液相色谱测定人血浆中甲苯咪唑的方法.方法血浆加入阿苯哒唑为内标, 以0.5 mol/L的硼砂-NaOH缓冲液3 ml碱化后经乙醚提取,固相萃取,进行HPLC测定,采用Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm 5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1 mmol/L (NH4)2SO4溶液(60∶ 40, V/V);流速1.0 ml/min;检测波长310 nm.结果甲苯咪唑血药浓度为0.05～1.6 μg/ml,峰面积与血药浓度呈线性关系,方法平均回收率为97.21%.平均RSD为3.56%;低检测限为0.02 μg/ml.结论该方法符合生物样品分析要求,为甲苯咪唑的体内含量测定提供了一种简便、准确、灵敏度高的分析方法.
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异钩藤碱在麻醉猫的心血管药理效应与血药浓度的关系
本研究观察了异钩藤碱(Isorhynchophylline, Isorhy)的心血管药理效应与血药浓度的关系.方法:异钩藤碱粉末,用0.1M的HCl溶解并用蒸馏水调pH至6.0～6.5;临用时配制 (fresh preparation of Isorhy,FPI)和配制液室温放置一周再用(dated preparation of Isorhy,DPI).健康家猫20只,随机分为4组(n=5),分别为生理盐水组,FPI 5mg/kg、10mg /kg组和DPI 5mg/kg组,戊巴比妥麻醉(ip,30mg/kg),静脉给药.颈动脉插管与RP-6000八道生理仪相连,记录收缩压(SAP)、舒张压(DAP)和心率(HR)的变化,相应时间点取血1.0ml ,血浆样品以氢氧化钠和乙醚预处理,用HPLC法测定猫血浆中的Isorhy浓度.结果:Isorhy 的血药浓度在0.05～500μg/ml范围内呈线性关系(r=0.9997),血浆低检测浓度为0.01 μg/ml,绝对回收率为86.3%～92.9%.猫iv Isorhy 5mg/kg及10mg/kg的药代动力学过程符合二室开放模型,Isorhy在猫体内血药浓度按一级动物学消除,T1/2β分别为2 .05h和1.61h;Isorhy的降压及负性频率效应与给药剂量相关,血药浓度-效应曲线呈明显的正相关,同剂量的DPI和FPI给药,FPI的起效时间、效应维持时间及大效应均强于DPI ,这一效应强度的差异与二者给药后猫血浆中Isorhy原药浓度的差异基本平行.结论:Isor hy在猫体内的代谢模式符合二室开放模型,5mg/kg及10mg/kg两个剂量静注后的血浆消除半衰期分别为2.05h和1.61h;Isorhy的溶液剂型不稳定,室温放置一定时间可降低其心血管药理效应.
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异钩藤碱在猫体内代谢产物结构的研究
研究异钩藤碱(isorhynchophylline,Isorhy)的心血管药理效应已有较深入的研究,但在动物体内的代谢情况未见报道,本研究观察了该药在猫体内的代谢情况.方法:麻醉猫静脉注射Isorhy 10mg/kg后,在不同的时间点采血样20ml,血浆样品以氢氧化钠和乙醚预处理.将另外的猫麻醉后取其肝脏,按1∶5比例用0.2M磷酸缓冲液(pH=7.35～7 .45)匀浆后离心(15000g,4℃)20min,取上清液加Isorhy成0.2mg/ml上清液,于37℃孵化3 h后,以血浆样品同法预处理该上清液,用HPLC法测定Isorhy的体内代谢物的相对浓度.以H PLC-MS法测定Isorhy代谢物分子离子峰的质荷比(m/z);在HPLC上分离并收集代谢物的色谱峰流分,60℃减压蒸馏24小时,再用HPLC-MS测定Isorhy代谢物加热裂分化合物分子离子峰质荷化(m/z).根据m/z得出分子量(MW),推测二者的化学结构.结果:血浆样品和孵化的肝组织匀浆上清液在HPLC上有明显的代谢产物峰,二者在HPLC的保留时间相同(tR8.2±0.1min),而原药Isorhy的tR＝11.9± 0.1min.Isorhy iv给药0.5h后开始产生代谢物,相对浓度变化范围为0.38～0.89u g/ml.HPLC-MS显示Isorhy代谢产物(metabolite)的分子离子峰MW＝386,该代谢物60℃减压蒸馏24小时后样品的分子离子峰MW＝300.结论:1.异钩藤碱在猫体内有明显的代谢产物;2.猫血浆和肝脏上清液中的异钩藤碱代谢物为同一物质,提示Isorhy可能主要经肝脏代谢;3.代谢物的分子量(MW)为386,是异钩藤碱的加氢还原产物;4.代谢物的物理性质不稳定,加热会裂分为另外的化合物,其MW为300.
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生物样品中普鲁托品的HPLC测定方法和普鲁托品在大鼠体内药代动力学
本文建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠血浆、尿、粪、肝组织匀浆中药物浓度的方法.流动相为甲醇、水和10%冰醋酸,以C18柱分离,紫外检测波长为285nm,生物样品在碱性条件下经两次乙醚处理可获得良好分离.血浆样品低检测浓度为
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LC-MS/MS测定人血浆中的头孢克洛
目的 采用LC-MS/MS测定人血浆中的头孢克洛.方法 血浆样品经沉淀蛋白处理后.用Allure C18柱(50 mm×4.6mm,5um)分离,乙腈-1%甲酸(20:80)为流动相;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源,以正离子多反应监测方式进行定量分析.结果 血浆中头孢克洛的线性范围为0.01～10.00ug·ml-1,定量下限为0.01ug·ml-1.回收率为79.6%83.2%,日内、日间RSD均小于3.5%.结论 所建方法专属、灵敏、准确,适用于头孢克洛药物动力学的研究.
关键词： 头孢克洛 液相色谱一串联质谱法 血药浓度 血浆样品 -
LC-MS/MS测定人血浆中的辛伐他汀
目的 建立测定人血浆中辛伐他汀的LC-MS/MS方法.方法 血浆样品经乙酸乙酯提取后,以乙腈-水(含0.1%乙酸和2.5 mmol·L-1甲酸胺)(90:10)为流动相,通过Agilent1100 VL型离子阱质谱仪,电喷雾离子源正离子模式,采用多反应离子监测方式测定辛伐他汀的浓度(MRM,m/z 441→325).结果 血浆中辛伐他汀的线性范围为0.5～10.0 ng·ml-1.定量下限为0.5 ng·ml-1.平均回收率85%～115%,日内、日间精密度在±15%之内.结论 所用方法高效、准确,特异性强,可用于辛伐他汀的药物动力学研究.
