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心肺复苏大鼠神经元凋亡和内质网应激相关因子GRP78及CHOP表达的变化
目的 研究心跳骤停复苏后大鼠脑内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的动态变化及其与神经元凋亡的关系,从而探讨内质网应激与脑缺血再灌注损伤的机制.方法 将48只SD大鼠随机分为对照组和复苏组,采用经食道起搏诱发室颤法制备大鼠心肺复苏模型;应用尼氏染色观察各组大鼠海马CA1区6 h、12 h、24 h、48 h存活神经元形态;应用TUNEL染色法,观察各组大鼠海马CA1区神经元凋亡情况,并进行凋亡阳性细胞计数;应用免疫组化法检测GRP78及CHOP抗原的表达、应用Western Blot法检测GRP78及CHOP蛋白的表达量.结果 与对照组比较,复苏组大鼠海马CA1区神经元细胞变性更严重,出现凋亡细胞,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞明显增多.与对照组比较,复苏组GRP78阳性细胞于再灌注 6 h逐渐增多,于12 h明显增高,此后表达逐渐减少;复苏组CHOP于再灌注6 h开始阳性细胞即有表达,逐渐增多,于再灌注 24 h显著增加,直至48 h.结论 心跳骤停复苏后诱发内质网应激,早期通过上调促生存因子GRP78蛋白的表达达到自我保护作用,晚期通过上调凋亡因子CHOP诱导神经元凋亡.
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白藜芦醇通过内质网应激抑制心肌细胞肥大及凋亡
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)通过内质网应激介导心肌细胞肥大的作用机制.方法 利用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)建立心肌细胞肥大模型,Res干预后通过检测心肌细胞表面积和ANP基因表达评价心肌细胞肥大程度;检测各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量变化和心肌细胞凋亡率,Real time-PCR检测心肌细胞ERS相关基因GRP 78和CHOP表达.结果 与ISO组比较,Res显著抑制ISO诱导的心肌细胞肥大(P＜0.05),降低肥大心肌细胞LDH和MDA释放量(P＜0.05);下调GRP78和CHOP基因表达(P＜0.05),并抑制心肌细胞凋亡率(P＜0.05).结论 Res对ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡具有保护作用,其机制是通过抑制内质网应激和CHOP介导的凋亡通路实现的.
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当归补血汤对糖尿病肾病大鼠肾组织ATF6、CHOP、Caspase-3表达的影响
目的 观察当归补血汤对糖尿病肾病大鼠肾组织ATF6、CHOP、Caspase-3表达的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 60只SD雄性大鼠随机分为对照组和造模组.造模组大鼠采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立糖尿病肾病(DN)模型.造模成功的大鼠随机分为模型组、格列齐特组、当归补血汤高剂量组和低剂量组,每组10只.格列齐特组给予格列齐特缓释片2.68 mg·kg-1·d-1,中药高、低剂量组分别给予当归补血汤7.14mg·kg-1·d-1和1.78 mg·kg-1·d-1,对照组和模型组给予等量0.9％NaC1溶液,连续给药8周.Western blot和PCR分别检测各组大鼠肾组织活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、生长抑制DNA损伤基因153(C/EBP homologous protein,GADD153/CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白及mRNA表达水平.TUNEL染色检测各组大鼠肾组织阳性细胞凋亡率.结果 与对照组相比,模型组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均升高,TUNEL阳性细胞率增加(P＜0.01).与模型组相比,格列齐特组及当归补血汤高、低剂量组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率显著降低(P＜0.01).当归补血汤高剂量组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率显著低于格列齐特组和低剂量组(P＜0.01).结论 当归补血汤能减少糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡,其机制可能与下调ATF6、CHOP、Caspase-3表达及抑制内质网应激有关.
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平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、 FAS L、 CHOP、 CASPASE-4蛋白表达的影响
目的 研究平目汤对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响,探讨眼眶成熟脂肪细胞凋亡的机制.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,传代并诱导其分化为成熟脂肪细胞.平目汤含药血清,配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组.采用MTT法检测前脂肪细胞增殖情况.Western blotting法检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP及CASPASE-4蛋白表达的影响.结果 ①MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,平目汤低、中、高剂量组的生长曲线显著下移,其中平目汤中剂量组活性下降趋势明显.地塞米松组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).相同的时间点与空白对照组比较,平目汤各组OD值均减小,其中以平目汤中剂量组降低为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).②Western blotting结果显示:与空白对照组比较,除地塞米松组外,各组FAS、FAS L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中FAS蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组,FAS L蛋白表达以平目汤高剂量组高,其次为中剂量组,但二者比较差异无统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,除地塞米松组外,平目汤各组CHOP、CASPASE-4蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤各组组间比较CHOP蛋白表达以高剂量组高,其次为中剂量组;CASPASE-4蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组.结论 平目汤通过死亡受体途径和内质网途径诱导FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗效果.
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小凹蛋白-1通过激活p38MAPK抑制巨噬细胞内质网应激凋亡
本文旨在探讨小凹蛋白-1 (caveolin-1,Cav-1)对巨噬细胞内质网应激凋亡途径的调控作用及机制.用毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导RAW264.7细胞内质网应激后,Western blot法检测Cav-1的表达变化.用小凹(eaveolae)结构破坏剂filipin(Ⅲ)预处理RAW264.7细胞,用Annexin V-FITC/PI双染和激光共聚焦显微镜观察RAW264.7细胞的凋亡情况,后使用Western blot法检测凋亡相关蛋白——丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族成员p38的磷酸化及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达水平.结果显示,TG作用RAW264.7细胞可使Cav -1的表达呈山峰状改变,TG作用早期Cav-1的表达升高,其中1 μmol/L TG作用RAW264.7细胞24 h可使Cav-1的表达较对照组明显升高(P＜0.05),随着TG作用浓度和时间的增加,Cav-1的表达降低.Filipin(Ⅲ) (2.5μg/mL)预处理RAW264.7细胞(30 min)可阻断TG诱导的Cav-1表达上调(P＜0.05),同时,流式细胞仪检测结果显示filipin(Ⅲ)使TG诱导的细胞凋亡率升高(P＜0.05),激光共聚焦显微镜下可见明显凋亡形态变化,Westemblot结果显示Filipin(Ⅲ)使TG诱导的p-p38减少(P＜0.05),而CHOP的表达无明显改变(P＞0.05).以上结果提示,Cav -1可抑制巨噬细胞的内质网应激凋亡途径,其机制可能与激活p38 MAPK通路有关.
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美罗华联合CHOP方案治疗侵袭性B细胞淋巴瘤临床观察
淋巴瘤以非霍奇金淋巴瘤(NHL)常见,非霍奇金淋巴瘤中以B细胞来源占90%以上,大部分B细胞淋巴瘤中可表达CD20(+), 美罗华(利妥昔单抗, Rituximab)是一种特异性嵌合鼠/人的单克隆抗体,该抗体与纵贯细胞膜的CD20抗原特异性结合,并引发B细胞溶解的免疫反应[1-3].作者将48例侵袭性B细胞淋巴瘤患者随机分为2组,分别采用CHOP、美罗华联合CHOP(RCHOP)方案,比较其疗效和不良反应,现报告如下.
关键词： 利妥昔单抗 侵袭性B淋巴细胞性淋巴瘤 CHOP 化疗 -
低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸细胞内质网应激及PERK-CHOP信号通路的激活
目的:探讨低剂量电离辐射与小鼠睾丸细胞内质网应激的发生以及PERK-CHOP通路激活的相关性. 方法:健康雄性昆明小鼠随机分成时程-效应(75 mGy照射后0、3、6、12和24h)和剂量-效应(0、50、75、100和200 mGy照射后12 h)组,每组动物10只.采用H2O2和MDA试剂盒比色法检测其含量；利用实时定量逆转录PCR( quantitative RT-PCR)检测GRP78、PERK和CHOP mRNA；Western印迹和图像分析技术检测GRP78、PERK、磷酸化PERK( phosphorylated PERK,pho-PERK)和CHOP蛋白表达. 结果:小鼠经75 mGy全身照射后,睾丸组织中H2O2含量随时间延长而增加,MDA含量在3和6h稍有降低,而后随时间延长而增加,二者在12和24h较0h时显著增加(P＜ 0.05,P＜0.01)；除了GRP78 mRNA(3和24 h)和蛋白表达(6 h)分别在照射后有降低趋势外,GRP78( 12 h)、PERK(3、6、12和24 h)和CHOP( 12和24h)的mRNA表达较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(12和24 h)、pho-PERK(3、12和24h)和CHOP(3、6、12和24 h)的蛋白表达也都较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),PERK蛋白表达则无明显变化规律.小鼠经50 ～ 200 mGy全身照射后12 h,睾丸组织中H2O2含量在50 ～ 100 mGy照射后随剂量增加而增加,200 mGy照射后则稍有降低,MDA含量随剂量增加而增加,而且H2O2含量(75和100 mGy)和MDA含量(75、100和200 mGy)显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01)；除了GRP78mRNA表达在50和200 mGy照射后有降低趋势外,GRP78(75和100 mGy)、PERK(75、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的mRNA表达都显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(100和200 mGy)、pho-PERK(50、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的蛋白表达也都显著高于0mGy组(P＜0.05,P＜0.01),而PERK蛋白表达则无明显变化规律. 结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸细胞发生内质网应激,并且激活PERK-CHOP信号通路.
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大黄酸对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响
目的:研究大黄酸(rhein,Rh)对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定RH对人前体脂肪细胞增殖的影响;通过形态学观察脂肪细胞的分化程度及形态学变化;并用油红O染色法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;应用RT-PCR检测RH干预后分化抑制基因CHOP mRNA的表达.结果:各浓度组RH(0.1、1、2.5、5、10 ug/ml)抑制人前体脂肪细胞增殖,作用呈剂量依赖性;RH对脂肪细胞分化的抑制作用亦呈剂量依赖性;1 ug/ml的RH使CHOP mRNA表达增加.结论:RH可抑制人前体脂肪细胞增殖与分化,该作用可能与CHOP表达上调有关.
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糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响
目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制.方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平.结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR(P＜0.01),除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI(P＜0.01),3组FINS水平无显著性差异(P＞0.05).与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少(P＜0.01),中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达.
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查尔酮类似物A59促人结肠癌细胞凋亡及其机制
目的：通过对经初步筛选证明具有生物活性的查尔酮类似物A59可能涉及的信号通道进行检测，进一步明确其抗肿瘤活性及作用机制。方法：对于以查尔酮为先导物设计合成类似物，以MTT法检测其对于人结肠癌细胞（HCT-116）的杀伤作用，筛选出具有较好生物活性的化合物A59。通过FCM法检测A59诱导HCT-116细胞凋亡和抑制细胞周期的情况。Western blot法检测HCT-116细胞中A59对ATF4及CHOP表达的影响。利用siRNA技术敲除CHOP后，用免疫荧光和FCM法检测在A59对于细胞凋亡的影响。结果：通过对自行设计合成查尔酮类似物进行筛选，发现A59对于HCT-116具有较强的增殖抑制作用（IC50=7.6μmol/L）。通过FCM法检测发现A59是通过诱导HCT-116细胞发生凋亡并抑制细胞周期发挥其生物活性。通过Western blot法检测发现A59剂量依赖性激活内质网应激信号通路中的关键蛋白CHOP，并通过siRNA基因沉默技术进一步确证A59是通过刺激CHOP的过表达发挥促进细胞凋亡的作用。结论：查尔酮类似物A59通过激活内质网应激信号通道中的关键蛋白CHOP来发挥对CHT116的增殖抑制作用。
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缺血后不同再灌注时间点C57BL/6J小鼠肺未折叠蛋白反应的变化及其意义
目的:探讨缺血后不同再灌注时间点小鼠肺未折叠蛋白反应(UPR)的变化及其意义.方法:采用C57BL/6J小鼠在体单侧左肺原位缺血/再灌注(I/R)损伤模型.实验随机分为4组(每组10只),包括假手术组(Sham组)及I/R l h、2 h、3 h组.各组实验结束后处死小鼠,留取左肺,分别检测以下指标:肺湿干重比(W/D)和总肺水含量(TLW)；光镜观察肺组织形态学改变和进行肺组织损伤评估(IQA)；电镜观察肺组织超微结构改变；RT-PCR和Western blotting法分别检测C/EBP-homologous protein(CHOP)、caspase-12、c-jun NH2-terminal kinase (JNK)和glucose regulating protein 78 (GRP78)的mRNA和蛋白表达水平；原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测肺细胞凋亡.结果:与Sham组相比,I/R1h组肺W/D、TLW、IQA、CHOP、caspase-12、JNK与GRP78的mRNA和蛋白质表达水平及肺细胞凋亡指数(AI)并无明显差异(P＞ 0.05),光镜显示肺组织形态学和电镜显示肺组织超微结构均无明显变化,而I/R 2 h组和I/R3h组上述各指标与Sham组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜ 0.01).在I/R 2 h和I/R 3 h组,光镜显示肺组织形态学和电镜显示肺组织超微结构均出现明显损伤性变化,尤以I/R 3 h组损伤为明显.肺组织细胞凋亡指数分别与CHOP、caspase-12、JNK及GRP78的基因和蛋白的表达、W/D、TLW及IQA之间呈正相关关系.结论:缺血后再灌注时间超过一定限值可引起肺组织细胞发生过度的UPR.
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匹诺塞林对脑缺血再灌注内质网应激凋亡相关基因mRNA表达的影响
目的:观察匹诺塞林对大鼠脑缺血再灌注急性期损伤内质网应激凋亡途径相关基因的调控作用.方法:雄性SD大鼠50只,阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、匹诺塞林1 mg/kg组、3 mg/kg组和10 mg/kg组,其中模型组及匹诺塞林各给药组,分别于大脑中动脉阻塞2h后再灌注同时给药,6h后取血并断头取脑,取缺血半暗带组织,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定GRP78、CHOP、ATF4、XBP-1的mRNA变化.结果:匹诺塞林能增加急性局灶性脑缺血再灌注GRP78 mRNA水平,其中匹诺塞林3 mg/kg、10 mg/组与模型组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);匹诺塞林能降低内质网应激凋亡相关蛋白CHOP、ATF4,XBP-1mRNA水平,与模型组相比,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论:匹诺塞林能抗脑缺血再灌注损伤,其机制可能与保护内质网功能,减少GRP78、CHOP、ATF4及XBP-1相关基因表达有关.
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益气除痰方调控内质网应激蛋白ATF4、CHOP治疗肺癌机理研究
目的:从内质网应激角度探讨益气除痰方治疗脾虚型肺癌的作用机制.方法:建立脾虚Lewis肺癌小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),化疗组(生理盐水+顺铂注射液1 mg/kg),益气除痰方低、中、高剂量组(2、4、8 g/kg),联合用药组(益气除痰方4 g/kg+顺铂注射液1 mg/kg),每组8只.每3d测量小鼠体重和瘤体大小,14d后处死小鼠,称量瘤重、计算肺表面转移结节数,免疫组织化学法、RT-qPCR法检测肿瘤组织中ATF4、CHOP表达.结果:与模型组比较,益气除痰方中、高剂量组均能明显抑制移植瘤生长,减少肺转移结节数,提高肺转移抑制率(P＜0.01或P＜0.05);并能明显上调内质网应激蛋白ATF4、CHOP表达,其中联合用药组效果好(P＜0.01).与化疗组比较,联合用药组ATF4、CHOP表达明显升高(P＜0.05).结论:益气除痰方可能通过上调内质网应激蛋白ATF4、CHOP的表达介导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用.
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银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝组织GRP78及CHOP表达的影响
目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠内质网应激通路相关分子GRP78、CHOP表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制.方法:采用 40％ 的 CCl4 皮下注射(3mL·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍)6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以200、100、50 mg· kg-1·d-1的GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR及免疫组化法分别检测肝组织GRP78及CHOP基因的mRNA及蛋白表达.结果:肝组织GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增加(P＜0.05,P＜0.01);应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织GRP78和CHOP基因的mRNA及蛋白表达显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:肝纤维化大鼠肝脏发生了内质网应激反应,GbE下调肝纤维化大鼠肝组织内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.
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二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚 及内质网应激的影响
目的 研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响.方法 采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型.实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周.检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加.同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05).结论 DF-MO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关.
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毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨
目的 研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中的表达变化,初步探讨毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及部分机制.方法 体外用毒胡萝卜素(TG)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,RT-PCR检测细胞中GRP78、CHOP mRNA的表达变化,Western blot检测GRP、CHOP及Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,经TG作用24 h后,细胞凋亡率增加,并呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05).TG组在24 h的GRP、CHOP表达均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);同时不同刺激组中Caspase-3的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 毒胡萝卜素可诱导人胚肺成纤维细胞发生凋亡,该凋亡可能与ERS有关.
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腺苷通过内质网应激途径诱导HepG2细胞凋亡的研究
目的 探讨腺苷(ADO)诱导人类肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制.方法 将不同浓度的ADO(0～6 mmol·L-1)作用于HepG2细胞36 h,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖效应.将HepG2细胞暴露于不同浓度的ADO(0～4 mmol·L-1)作用36 h或2 mmol·L-1ADO作用不同时间(0～48 h),观察细胞核的形态学改变;观察2 mmol·L-1ADO处理12 h和24 h后细胞周期的变化;观察2 mmol·L-1ADO作用前后Caspase-3和CHOP的亚细胞定位的变化;用Western blot检测不同浓度ADO作用后HepG2细胞Caspase-3,Caspase-4,CHOP,JNK的蛋白表达变化.结果 ADO对HepG2细胞生长有明显的抑制作用,不同浓度ADO(0.5,1,2,4,6 mmol·L-1)处理HepG2细胞36 h后,与对照组相比,相对细胞存活数分别下降13.48%±0.12%, 27.92%±0.25%, 35.21%±0.42%, 51.46%±0.24%, 71.42%±0.58%,呈现剂量依赖性;不同浓度ADO作用36 h或2 mmol·L-1ADO作用不同时间(0～48 h)后,随着ADO浓度的增加或作用时间的延长,HepG2细胞核发生典型核固缩、核碎裂、核分解等凋亡形态学改变;2 mmol·L-1ADO作用12 h或24 h后,细胞周期分析出现亚二倍体峰,提示细胞发生凋亡,对照组、ADD处理12 h及24 h组细胞凋亡率分别为1.55%±0.12%、10.96%±0.07%和21.04%±0.26%;2 mmol·L-1ADO诱导Caspase-3和CHOP表达增加,并从胞质易位进入胞核内;随着ADO浓度的升高,Caspase-4,Caspase-3,CHOP的表达均升高,均呈现剂量依赖性;而JNK的表达则没有变化.结论 腺苷诱导HepG2细胞凋亡与内质网应激途径有关.
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内质网应激介导白藜芦醇对心肌细胞肥大的保护作用
目的：探讨白藜芦醇（resveratrol，Res）对异丙肾上腺素（isoproterenol，ISO）诱导的心肌细胞肥大的保护作用及与内质网应激的关系。方法利用 ISO 建立乳鼠心肌肥大细胞模型，分为正常对照组、ISO 组，白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组。检测心肌细胞表面积和 ANP 基因表达；流式细胞仪检测细胞凋亡率；检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）漏出量；实时定量 PCR 和 Western blot 分析GRP78和 CHOP 的基因和蛋白表达。结果Res 有效抑制ISO 诱导的心肌细胞肥大和凋亡，表现为降低心肌细胞表面积和 ANP 基因表达，减少 LDH、MDA 漏出量和心肌细胞凋亡率，同时下调 GRP78和 CHOP 的基因和蛋白表达。结论Res 可能通过抑制内质网应激相关因子 GRP78和 CHOP 表达发挥对心肌肥大的保护作用。
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大鼠脑缺血再灌注后GRP78、CHOP表达变化
目的 研究Wistar大鼠脑缺血2h再灌注不同时间点葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的表达变化.方法 选体质量(240±10)g Wistar大鼠,分别在缺血2h、缺血2h再灌注2h、缺血2h再灌注12 h、缺血2h再灌注24 h时间点进行取材,随机抽取成功大鼠模型进行TTC染色证明模型成功,Western blot检测不同时间点GRP78及CHOP的表达,TUNEL技术检测大鼠模型损伤侧以及对侧细胞凋亡的数量.结果 与正常组相比,成功模型在缺血2h引起GRP78 (P ＜0.001)及CHOP(P ＜0.05)表达升高,且GRP78和CHOP的升高点不完全重合.与自身健侧相比,个别模型健侧脑组织CHOP明显升高,然而GRP78未升高.与健侧相比,损伤侧TTC染色梗死面积增大(P ＜0.001),损伤侧TUNEL染色显示凋亡细胞多(P ＜0.001);健侧TTC染色正常,同时健侧TUNEL染色为阴性.结论 在缺血相同时间内再灌注不同时间GRP78和CHOP升高不一致,细胞受到短时间的缺血再灌注损伤,显示GRP78表达持续上升,当细胞受到长时间的缺血再灌注时,GRP78虽然高表达,但细胞已经发生了凋亡坏死.本研究显示短时间细胞受损后GRP78与CHOP共同表达时能促进细胞的凋亡.
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大鼠肝纤维化进程中内质网应激相关蛋白的动态变化研究
目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化.结果 与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05).与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05).结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系.
