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水飞蓟宾对锰致神经毒性的干预研究
目的 研究不同剂量的水飞蓟宾(silibinin)对锰致入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞毒性的对抗作用及可能机制.方法 体外培养SH-SYSY细胞,加入不同浓度的水飞蓟宾(5～ 20μmol/L),继续培养24 h,吸出后加入MnCl2(终浓度为0.6 mmol/L),MTT法检测细胞活力,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达和活化情况,DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)含量,同时检测水飞蓟宾的体内外抗氧化活性.结果 MTT结果显示(5～20μmol/L)的水飞蓟宾对MnCl2诱导的细胞损伤有显著的拮抗作用.Western blot结果显示水飞蓟宾能剂量依赖性地抑制MnCl2处理诱导的自噬性损伤的发生.与对照组相比,0.6 mmol/L的MnCl2处理组ROS含量明显升高,而水飞蓟宾给药则能显著抑制ROS的产生,同时体内外的抗氧化能力检测显示水飞蓟宾抗具有较强的总抗氧化能力和抗超氧阴离子自由基活力,能显著恢复细胞内GSH和SOD的活力.结论 水飞蓟宾能剂量依赖性地对抗MnCl2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,这一作用可能是通过清除细胞内ROS继而抑制自噬性死亡的发生来实现的.
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自噬参与锰诱导的SH-SYSY细胞毒性研究
目的 研究不同剂量的锰(Mn)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞生长增殖的影响以及诱导自噬的情况.方法 体外培养SH-SYSY细胞,以200～1 000 μmol/L MnCl2处理后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,MDC染色法检测自噬小泡形成情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Bclin-1的表达和活化情况.DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)含量.结果 MTT结果 显示200～1 000 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用.Western blot结果 显示MnCl2处理后LC3蛋白表达增加并且活化,Bcelin-1蛋白表达增加,细胞产生自噬小泡.与对照组相比,200、400和800 μmol/L MnCl2组ROS含量明显升高.结论 一定剂量的MnCl2对SH-SHY5Y细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过破坏胞内氧化还原平衡导致ROS大量产生继而诱发细胞发生自噬性的死亡.
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锰对PC12细胞毒性作用的研究
目的研究不同剂量的锰(Mn)对PC12细胞生长增殖的影响.方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100～900 μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,TUNEL法观察细胞凋亡,Western blot检测α-共核蛋白(α-SYN)表达情况.结果MTT结果显示100～900 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用(P＜0.01).TUNEL染色结果显示MnCl2处理组TUNEL阳性细胞增多(P＜0.05).Western blot结果显示与对照组相比,100、300、500μmol/L MnCl2组α-SYN表达水平分别升高1.8、4.5、7.3倍(P＜0.05).结论一定剂量的MnCl2对PCl2细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过诱导胞内α-SYN表达增高实现的.提示预防、阻止α-SYN在细胞中的聚集可能会降低Mn对多巴胺能神经细胞的损伤.
关键词： MnCl2 大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞 凋亡 α-共核蛋白 -
Mncl2增强树突状细胞HLA-DR表达的研究
目的探索Mncl2对树突状细胞(Dendritic cells.DC)HLA-DR表达的影响.方法采用流式细胞仪分析Mncl2刺激组及阴性对照组DC表面HLA-DR表达水平及HLA-DR阳性细胞率.结果Mncl2刺激组DC平均荧光强度为165.97,阴性对照组为105.72(P＜0.01).刺激组DC的HLA-DR阳性细胞率为89.96%,阴性对照组为78.73%(P＜0.01).结论Mncl2在体外能显著增强DC表面HLA-DR表达水平及总细胞HLA-DR阳性细胞率.
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单眼致盲后大鼠视觉通路锰增强磁共振成像的实验研究
目的:探讨单眼盲大鼠视觉通路锰增强磁共振成像(ME MRI)的形态学改变,并与病理结果相对照,探寻是否建立新的视觉代偿通路及视觉与听觉中枢是否有神经纤维联系.方法:14只健康新生雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠随机分为双眼盲组(Group A)与正常组(Group B) (每组n=7),采用右眼视神经离断法使大鼠致富,盲后4个月分别经两组大鼠的左侧玻璃体内注入0.2M MnCl2,24h后比较MEMRI表现,并与病理结果相对照,以帮助确定视觉代偿通路的产生.结果:MEMRI显示单眼盲大鼠左侧视觉通路代表结构(视神经、视束、外侧膝状体、上丘及视皮层)的对比度(CNR)明显高于右侧(P＜0.001),而比正常大鼠的左眼的视觉通路信号稍差(P＜0.05). MEMRI表现与病理结果具有较好一致性.结论:新生大鼠单眼致盲4个月后,ME MRI改变结合病理结果,提示双侧视觉通路有功能重组.
关键词： MnCl2 磁共振成像 视觉通路 锰离子增强磁共振成像 单眼盲 -
锰对PC12细胞生长增殖及对ERK信号转导通路的影响
目的:研究不同浓度的锰对PC12细胞生长增殖及细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)信号转导通路的影响. 方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100～900 μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量,平板克隆形成实验观察MnCl2对细胞的抑制作用. Western blot检测ERK1/2及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (p-ERK1/2)表达情况. 结果:MTT、平板克隆形成实验结果显示100～900 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有不同程度的抑制作用(P<0.05). Western blot结果显示随着染锰浓度的增高,PC12细胞p-ERK1/2表达量与对照组相比有显著性差异(P<0.05). 结论:一定浓度的MnCl2对PC12细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过下调胞内p-ERK1/2表达实现的.
关键词： MnCl2 大鼠 嗜铬细胞瘤PC12细胞 P-ERK1/2
