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平目中药全方及拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究平目中药全方及拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖和成熟脂肪细胞凋亡的影响.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代.诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞.将平目中药全方拆方益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组合药血清.MTT法观察平目中药全方及拆方对前脂肪细胞增殖活性的影响;流式细胞术测定平目中药全方及拆方对成熟脂肪细胞凋亡率的影响.结果 原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞.MTT结果显示,平目中药全方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中全方组为显著,益气温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义.全方组、化痰祛瘀组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P＜0.05),作用16d后更为显著(P＜0.01),地塞米松组差异无统计学意义.流式细胞术结果表明,与空白对照组相比,全方组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05),其中全方组凋亡率高(10.5％±1.45％),益气温阳组其次(9.9％±0.60％),地塞米松组差异无统计学意义.结论 平目中药全方及拆方对非活动期Graves眼病眼眶脂肪细胞积聚有不同的作用,全方组有整体优势,拆方组中以益气温阳组作用较明显,可能通过抑制前脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用.
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平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响
目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代.诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞.将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组合药血清.MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响.Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响.结果:①原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞.②MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义.平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P＜0.05),作用16d后更为显著(P＜0.01),地塞米松组差异无统计学意义.③Westem blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.01),其中平目汤(全方)组为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤(全方)组为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.01).其中平目汤(全方)组为显著,益气+化痰祛瘀组其次.结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用.
关键词： 平目方 非活动期Graves眼病 眼眶脂肪细胞 增殖 凋亡 -
平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、 FAS L、 CHOP、 CASPASE-4蛋白表达的影响
目的 研究平目汤对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响,探讨眼眶成熟脂肪细胞凋亡的机制.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,传代并诱导其分化为成熟脂肪细胞.平目汤含药血清,配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组.采用MTT法检测前脂肪细胞增殖情况.Western blotting法检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP及CASPASE-4蛋白表达的影响.结果 ①MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,平目汤低、中、高剂量组的生长曲线显著下移,其中平目汤中剂量组活性下降趋势明显.地塞米松组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).相同的时间点与空白对照组比较,平目汤各组OD值均减小,其中以平目汤中剂量组降低为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).②Western blotting结果显示:与空白对照组比较,除地塞米松组外,各组FAS、FAS L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中FAS蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组,FAS L蛋白表达以平目汤高剂量组高,其次为中剂量组,但二者比较差异无统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,除地塞米松组外,平目汤各组CHOP、CASPASE-4蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤各组组间比较CHOP蛋白表达以高剂量组高,其次为中剂量组;CASPASE-4蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组.结论 平目汤通过死亡受体途径和内质网途径诱导FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗效果.
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平目汤含药血清对人Graves眼病眼眶脂肪细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究平目汤含药血清对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞的作用,探讨其治疗Graves眼病的机制.方法:采用组织块法将人Graves眼病眼眶前脂肪细胞原代培养并传代,选用间接免疫荧光技术鉴定;用平目汤药液灌胃SD大鼠制备平目汤含药血清,并配成低(5％)、中(10％)、高(20％)三个剂量组;油红O染色观察前脂肪细胞的诱导分化作用;MTr法检测平目汤对前脂肪细胞增殖的影响;流式细胞术检测平目汤对成熟脂肪细胞凋亡率的影响.结果:①通过组织块法成功培养出梭形细胞,间接免疫荧光检测为前脂肪细胞.②成功诱导前脂肪细胞分化,油红O染色证实为成熟脂肪细胞.③平目汤各组均可显著抑制前脂肪细胞的分化,与空白对照组及地塞米松组比较差异明显.④平目汤各组均可下调前脂肪细胞增殖活性,以平目汤中剂量组、干预96 h效果佳,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).⑤平目汤各组成熟脂肪细胞凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.05),以平目汤中剂量组效果佳.结论:平目汤含药血清可抑制人Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖、促进眼眶成熟脂肪细胞凋亡、减少眼眶脂肪细胞的数量,从而减少眼眶脂肪容积、改善Graves突眼症状.
