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平目中药全方及拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究平目中药全方及拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖和成熟脂肪细胞凋亡的影响.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代.诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞.将平目中药全方拆方益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组合药血清.MTT法观察平目中药全方及拆方对前脂肪细胞增殖活性的影响;流式细胞术测定平目中药全方及拆方对成熟脂肪细胞凋亡率的影响.结果 原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞.MTT结果显示,平目中药全方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中全方组为显著,益气温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义.全方组、化痰祛瘀组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P＜0.05),作用16d后更为显著(P＜0.01),地塞米松组差异无统计学意义.流式细胞术结果表明,与空白对照组相比,全方组、益气温阳组、益气化痰祛瘀组、温阳化痰祛瘀组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05),其中全方组凋亡率高(10.5％±1.45％),益气温阳组其次(9.9％±0.60％),地塞米松组差异无统计学意义.结论 平目中药全方及拆方对非活动期Graves眼病眼眶脂肪细胞积聚有不同的作用,全方组有整体优势,拆方组中以益气温阳组作用较明显,可能通过抑制前脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用.
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平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响
目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代.诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞.将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组合药血清.MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响.Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响.结果:①原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞.②MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义.平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P＜0.05),作用16d后更为显著(P＜0.01),地塞米松组差异无统计学意义.③Westem blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.01),其中平目汤(全方)组为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤(全方)组为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.01).其中平目汤(全方)组为显著,益气+化痰祛瘀组其次.结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用.
关键词： 平目方 非活动期Graves眼病 眼眶脂肪细胞 增殖 凋亡
