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平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、 FAS L、 CHOP、 CASPASE-4蛋白表达的影响
目的 研究平目汤对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响,探讨眼眶成熟脂肪细胞凋亡的机制.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,传代并诱导其分化为成熟脂肪细胞.平目汤含药血清,配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组.采用MTT法检测前脂肪细胞增殖情况.Western blotting法检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP及CASPASE-4蛋白表达的影响.结果 ①MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,平目汤低、中、高剂量组的生长曲线显著下移,其中平目汤中剂量组活性下降趋势明显.地塞米松组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).相同的时间点与空白对照组比较,平目汤各组OD值均减小,其中以平目汤中剂量组降低为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).②Western blotting结果显示:与空白对照组比较,除地塞米松组外,各组FAS、FAS L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中FAS蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组,FAS L蛋白表达以平目汤高剂量组高,其次为中剂量组,但二者比较差异无统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,除地塞米松组外,平目汤各组CHOP、CASPASE-4蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤各组组间比较CHOP蛋白表达以高剂量组高,其次为中剂量组;CASPASE-4蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组.结论 平目汤通过死亡受体途径和内质网途径诱导FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗效果.
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平目汤含药血清对人Graves眼病眼眶脂肪细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究平目汤含药血清对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞的作用,探讨其治疗Graves眼病的机制.方法:采用组织块法将人Graves眼病眼眶前脂肪细胞原代培养并传代,选用间接免疫荧光技术鉴定;用平目汤药液灌胃SD大鼠制备平目汤含药血清,并配成低(5％)、中(10％)、高(20％)三个剂量组;油红O染色观察前脂肪细胞的诱导分化作用;MTr法检测平目汤对前脂肪细胞增殖的影响;流式细胞术检测平目汤对成熟脂肪细胞凋亡率的影响.结果:①通过组织块法成功培养出梭形细胞,间接免疫荧光检测为前脂肪细胞.②成功诱导前脂肪细胞分化,油红O染色证实为成熟脂肪细胞.③平目汤各组均可显著抑制前脂肪细胞的分化,与空白对照组及地塞米松组比较差异明显.④平目汤各组均可下调前脂肪细胞增殖活性,以平目汤中剂量组、干预96 h效果佳,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).⑤平目汤各组成熟脂肪细胞凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.05),以平目汤中剂量组效果佳.结论:平目汤含药血清可抑制人Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖、促进眼眶成熟脂肪细胞凋亡、减少眼眶脂肪细胞的数量,从而减少眼眶脂肪容积、改善Graves突眼症状.
