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益气除痰方对Lewis肺癌小鼠种植瘤细胞周期调控相关因子的影响
目的:观察益气除痰方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及细胞周期调控相关因子P16、p21/WIF1/CIP1、蛋白激酶C(PKC)、c-myc的影响.方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌种植瘤模型30只,随机分为Lewis肺癌模型组、益气除痰方低剂量组、高剂量组3组,每组10只.灌胃21d后,处死小鼠,检测肿瘤体积、重量,并用免疫组化法观察各组肿瘤组织P16、p21/WIF1/CIP1、PKC、c-myc的表达.结果:各组Lewis肺癌小鼠肿瘤体积、瘤重两两比较差异有统计学意义.其中高剂量组、低剂量组瘤体组织P16相对含量与模型组对比均显著增高(P＜0.05,P＜0.01);高剂量组与模型组、低剂量组对比p21/WIF1/CIP1含量显著增高(P＜0.05,P＜0.01).三组PKC含量两两比较差异均有统计学意义.结论:益气除痰方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长,其机制可能与其能通过上调P16、p21/WIF1/CIP1、下调PKC表达引起细胞周期阻滞,延长肿瘤细胞倍增时间相关.
关键词： 益气除痰方 Lewis肺癌 p16 p21/WIF1/CIP1 蛋白激酶C -
益气除痰方对耐顺铂肺癌移植瘤生长及下调UPR诱导细胞凋亡的研究
目的:研究益气除痰方(以下简称中药)对耐顺铂肺癌移植瘤生长及内质网应激相关蛋白的影响.方法:建立耐顺铂肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、中药低、高剂量组;绘制各组移植瘤生长曲线,计算瘤重指数、抑瘤率;HE染色法、透射电镜观察各组瘤组织形态学,流式细胞术测定细胞凋亡率;免疫蛋白印迹法检测GRP78/Bip、PDI、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α蛋白表达.结果:与模型组比较,中药高剂量组能明显抑制肿瘤生长,促进瘤细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01),并可明显下调GRP78/Bi p、PDI、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达(P＜0.01);而PERK、eIF2 α各组表达无统计学差异.结论:益气除痰方浓度依赖性抑制耐顺铂肺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与其下调GRP78/Bip、PDI、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达,弱化内质网未折叠蛋白反应,启动内质网凋亡通路有关.
关键词： 肺癌 移植瘤 益气除痰方 凋亡 内质网未折叠蛋白反应 -
益气除痰方对肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响
目的：观察益气除痰方对脾虚Lewis肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响，探讨其抗癌的可能作用机制。方法采用苦寒泻下加饥饱失常方式建立脾虚小鼠模型，再将无血清培养基制备的癌细胞悬液接种至脾虚C57BL/6小鼠背侧，制作脾虚Lewis肺癌小鼠模型。将48只成模小鼠随机分为模型组、化疗组、联合用药组及益气除痰方低、中、高剂量组，每组8只。各给药组给予相应药物干预。给药14 d后处死小鼠，检测肿瘤体积和质量；HE染色观察各组移植瘤组织形态，免疫组化、Western blot和RT-PCR检测肿瘤组织GRP94蛋白和基因表达。结果与模型组比较，化疗组、联合用药组及益气除痰方中、高剂量组肿瘤体积、肿瘤质量明显降低（P＜0.05，P＜0.01），肿瘤细胞大量坏死，GRP94蛋白表达明显降低（P＜0.01）；与化疗组比较，联合用药组GRP94蛋白表达明显降低（P＜0.01）。结论益气除痰方联合化疗可有效治疗Lewis肺癌小鼠，其机制可能与其下调内质网分子伴侣蛋白GRP94表达、逆转肿瘤细胞自身保护机制相关。
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益气除痰方治疗非小细胞肺癌疗效与脯氨酸4-羟化酶β亚基表达的相关性分析
目的 探讨脯氨酸4-羟化酶β亚基(P4HB)对益气除痰法治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效预测效果.方法 选取46例Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者,采用益气除痰方加减治疗4个疗程,通过实体瘤的疗效评价标准(RECIST)进行疗效评价;采用免疫组织化学法测定肺癌组织中P4HB的表达,采用Logistic回归分析益气除痰法治疗肺癌疗效的影响因素,并分析益气除痰疗效与P4HB表达的相关性.结果 晚期NSCLC患者疾病控制率为36.96％(17/46).P4HB在晚期肺癌组织中呈高表达(6/15).性别、初治与复治是影响益气除痰法治疗肺癌疾病控制率的独立因素.结论 P4HB可作为益气除痰法治疗NSCLC疗效的预测因子.
关键词： 益气除痰方 非小细胞肺癌 脯氨酸4-羟化酶β亚基 -
益气除痰方对肺癌移植瘤小鼠内质网应激蛋白GRP78/BIP、caspase-12的影响
目的 探讨益气除痰方治疗肺癌的可能作用机制.方法 15只BALB/c小鼠采用人肺腺癌细胞A549建立人肺癌小鼠皮下移植瘤模型,随机分为模型组和益气除痰方低、高剂量组,每组5只.益气除痰方低、高剂量组分别予益气除痰方生药量27.3g/ (kg·d)、54.6g/ (kg· d),造模后第8天开始灌胃,每天1次,连续2周;模型组予同体积生理盐水.采用常规HE染色法、透射电镜观察各组小鼠移植瘤组织形态学改变;应用免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、caspase-12蛋白的表达.HE染色观察各组小鼠主要脏器病理学改变.结果 益气除痰方治疗后移植瘤细胞呈现凋亡形态学改变,以高剂量较典型.与模型组比较,益气除痰方低、高剂量组GRP78/BIP表达下降,easpase-12、cleaved caspase-12表达升高(P＜0.05或P＜0.01),且益气除痰方高剂量组优于益气除痰方低剂量组(P＜0.01).各组小鼠主要脏器无明显病理学改变.结论 益气除痰方诱导肺癌细胞发生凋亡具有剂量依赖性,其机制可能与内质网应激凋亡特异性蛋白caspase-12活化,启动内质网应激凋亡通路有关.
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益气除痰方抑制肿瘤相关巨噬细胞的抗肿瘤免疫功能研究
目的 周岱翰教授的经验方益气除痰方(Yiqi Chutan Formula,YQCTF)具有“培土生金”的作用,已通过临床试验证明对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)具有较好的疗效,但是其精确抗肿瘤分子机制有待进一步阐明.本研究探讨YQCTF对肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)的影响.方法 构建Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)的小鼠移植瘤模型,以检测YQCTF对小鼠体内移植瘤的影响;同时,应用流式细胞分选技术,以CD11b-PE和F4/80-FITC标记抗体测定移植瘤中TAMs,测定YQCTF对小鼠肺癌移植瘤中TAMs产生的影响.结果 与对照组相比,YQCTF能较强地抑制小鼠体内移植瘤的生长.2.5 g/kg YQCTF处理组的抑瘤率达51.37％,5.0 g/kg YQCTF处理组的抑瘤率达68.46％.并且,YQCTF能较强地抑制小鼠移植瘤中TAMs的产生,相比较于溶剂对照组的CD11b+ F4/80+ TAMs占所有CD11b+细胞比例为(21.81±2.66)％,2.5 g/kg YQCTF处理组的CD11b+ F4/80+ TAMs占所有CD 11b+细胞群比例为(11.47±1.64)％,5.0 g/kg YQCTF处理组的CD11b+F4/80+ TAMs占所有CD11b+细胞群比例为(6.53±1.57)％,且YQCTF处理组均与溶剂对照组比较差异有统计学意义,均P＜0.05.结论 YQCTF可抑制肿瘤微环境中TAMs的产生,从而达到抗肿瘤免疫的效应.
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益气除痰方对肺癌化疗患者全血细胞计数的影响
目的 评价益气除痰方对非小细胞肺癌(NSCLC)患者DP方案化疗期间全细胞计数的影响和观察临床疗效.方法 选取2014年3月～2016年3月收治的63例NSCLC患者,将患者分为单纯两医治疗组(西医组,33例)与配合益气除痰方的中西医结合治疗组(中西医结合组,30例).比较两组化疗前后的全血细胞计数、KPS评分、生活质量评分、体重、不良症状积分.结果 两组患者化疗第42天的全血细胞计数、KPS评分、生活质量评分比较差异均有统计学意义(P＜0.05).两组化疗第21、42天的体重差异无统计学意义(P＞0.05).中西医结合组治疗后的咳嗽、咳痰、气促积分均明显低于西医组(P＜0.05).结论 益气除痰方配合化疗比单纯化疗的NSCLC患者全血.细胞计数变化更小,生活质量更高.中西医结合治疗肺癌值得进一步研究.
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益气除痰方防治化疗相关性疲劳的疗效观察
目的:观察益气除痰方防治恶性肿瘤患者化疗相关性疲劳的临床疗效,以寻求治疗化疗相关性疲劳的有效方法.方法:将符合纳入标准的63例患者,随机分为治疗组32例,对照组31例.两组病例的化疗方案基本相同.治疗组在化疗基础上加益气除痰方.治疗2周期后,观察治疗前后疲劳评分、生活质量评分、血细胞三系的变化.结果:益气除痰方组较对照组化疗相关性疲劳程度轻(P＜0.05);益气除痰方组在生活质量的角色功能、情绪功能、社会功能、总健康状况、疲倦、恶心呕吐、失眠、食欲丧失、便秘腹泻领域评分优于对照组(P＜0.05);益气除痰方组白细胞下降较对照组低(P＜0.05).结论:益气除痰方可以防治恶性肿瘤患者的化疗相关性疲劳,减轻癌症治疗相关证候群,提高患者生活质量.
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益气除痰方对大鼠肺癌A549细胞的抑制作用及其机制
目的：探讨益气除痰方对肺癌A549细胞的抑制作用及与细胞凋亡相关的机制。方法以四甲基偶氮唑蓝（ MTT）比色法和流式细胞术碘化丙啶（ PI）单染法检测益气除痰方对肺癌A549细胞活力和细胞凋亡率的影响，RT-PCR方法检测p53、bcl-2和bax的mRNA表达水平。结果MTT法检测结果表明益气除痰方显著抑制A549细胞的生长（ P＜0.05或P＜0.01），抑制作用随药物作用时间和浓度增大而增大；流式细胞术结果表明益气除痰方对A549细胞的凋亡诱导作用随着药物剂量的增加而显著增大（P＜0.05）；RT-PCR结果显示与对照组（p53基因1.58±0.91、bax基因3.27±1.55和bcl-2基因12.09±2.67）相比，益气除痰方引起p53和bax的mRNA表达显著上调（p53和bax分别为13.89±2.52和12.83±1.95，P均＜0.01），但bcl-2的mRNA表达显著下调（9.86±2.12，P＜0.05）。结论益气除痰方可诱导肺癌A549细胞凋亡，具有抑制其生长的作用，这可能与p53和bax表达上调、bcl-2表达下调有关。
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益气除痰方降低肺癌Caspase6、Lamin B1表达诱导细胞凋亡的机制
目的 研究益气除痰方对肺癌A549裸鼠移植瘤天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶6(Caspase 6)及核纤层蛋白B1 (Lamin B1)表达的影响.方法 选用BALB/c裸小鼠40只,将肺癌A549细胞悬液接种于小鼠背侧皮下建立肺癌模型,接种第7天将小鼠随机分为5组,即模型组(生理盐水组),顺铂注射液组(0.002 g/kg),益气除痰方低、高剂量组(3.0、6.0 g/kg),联合用药组(3.0 g/kg益气除痰方+0.002 g/kg顺铂),每组8只.中药灌胃,每天1次,连用21 d;顺铂注射液腹腔注射,每天1次,连用7d.干预第22天,处死所有小鼠,测量瘤体质量、体积,并采用免疫组化及RT-PCR法检测肿瘤组织中Caspase 6、Lamin B1的表达.结果 益气除痰方高剂量组和联合用药组肿瘤体积、肿瘤质量明显下降,免疫组织化学法及RT-PCR法检测结果显示,肿瘤组织中Caspase 6、Lamin B1的表达均降低,与模型组比较,差异有显著性(P＜0.01);联合用药组与顺铂注射液组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论 益气除痰方可抑制小鼠A549肺癌,与化疗药物联用有一定的增效作用,其机制可能与通过降低Caspase 6、Lamin B1的表达诱导细胞凋亡有关.
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益气除痰方调控内质网应激蛋白ATF4、CHOP治疗肺癌机理研究
目的:从内质网应激角度探讨益气除痰方治疗脾虚型肺癌的作用机制.方法:建立脾虚Lewis肺癌小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),化疗组(生理盐水+顺铂注射液1 mg/kg),益气除痰方低、中、高剂量组(2、4、8 g/kg),联合用药组(益气除痰方4 g/kg+顺铂注射液1 mg/kg),每组8只.每3d测量小鼠体重和瘤体大小,14d后处死小鼠,称量瘤重、计算肺表面转移结节数,免疫组织化学法、RT-qPCR法检测肿瘤组织中ATF4、CHOP表达.结果:与模型组比较,益气除痰方中、高剂量组均能明显抑制移植瘤生长,减少肺转移结节数,提高肺转移抑制率(P＜0.01或P＜0.05);并能明显上调内质网应激蛋白ATF4、CHOP表达,其中联合用药组效果好(P＜0.01).与化疗组比较,联合用药组ATF4、CHOP表达明显升高(P＜0.05).结论:益气除痰方可能通过上调内质网应激蛋白ATF4、CHOP的表达介导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用.
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益气除痰方下调vimentin表达与逆转EMT相关性研究
目的：观察益气除痰方肺癌肿瘤生长、肺转移的影响，并通过差异蛋白组学技术筛选出差异表达蛋白vimentin，并结合相关技术分析其可能的意义。方法：C57 BL小鼠40只，接种Lewis肺癌细胞，造模第2天，随机分为对照组（生理盐水）和低、中、高剂量观察组予益气除痰方1．0g· kg -1· d -1，3．0g· kg -1· d -1，9．0g· kg -1· d -1，每组10只，灌胃21d后，检测肿瘤体积、重量、肺转移灶，分别提取佳剂量治疗组和模型组肿瘤组织的总蛋白，应用双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）系统获得蛋白点表达差异信息，运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（ MALDI-TOF-TOF ）鉴定出差异蛋白质。并以荧光定量 PCR 和 Western blot 法对差异蛋白进行表达差异鉴定。培养A549细胞，20％益气除痰方含药血清干预，划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变，RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMP-1、MMP2、MMP9、MMP14 mRNA基因表达的影响。结果：益气除痰方3．0 g · kg -1· d -1治疗组肿瘤体积、瘤重、肺转移灶数均明显小于LEWIS模型组（ P＜0．01），肿瘤抑制率为57．21％。蛋白质组学研究鉴定受益气除痰方调控影响的蛋白37个，其中vimentin下调尤其明显。20％益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力，并能降低MMP2、MMP14mRNA基因的表达，与空白组比较差异有显著性（ P＜0．01）。结论：益气除痰方明显下调vimentin表达，抑制A549细胞的运动能力，减少基质金属蛋白酶MMP2、MMP14的分泌，这可能与益气除痰方逆转肺癌细胞上皮-间质转化有关，值得进一步研究。
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益气除痰方含药血清对顺铂耐药肺癌细胞增殖和细胞周期的影响
目的 观察益气除痰方食药血清对顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP增殖和细胞周期的影响.方法 制备益气除痰方含药血清和空白血清.分别用0(空白血清)、0.5%、1%、2.5%、5%、10%、20%、30%益气除痰方含药血清培养肺癌A549/DDP细胞,用MTT比色法测算增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50).用0、50%IC50、100%IC50浓度益气除痰方含药血清培养肺癌A549/DDP细胞,用流式细胞术测算G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例.结果 0.5%、1%、2.5%、5%、10%、20%、30%益气除痰方含药血清培养A549/DDP细胞48h后,细胞增殖抑制率分别为5.80%±0.95%、9.97%±1.26%、27.10%±3.22%、43.03%±2.02%、73.70%±4.69%、86.13%±1.59%、91.77%±1.65%,随着益气除痰方含药血清浓度增加,A549/DDP细胞增殖抑制率升高(P均<0.05),益气除痰方含药血清对A549/DDP细胞的IC50为8.56%.与益气除痰方含药血清浓度为0者比较,50%IC50和100%IC50浓度益气除痰方含药血清培养的A549/DDP细胞G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例降低,且药物浓度越高变化越显著(P均<0.05).结论 益气除痰方含药血清可抑制顺铂耐药肺癌A549/DDP细胞增殖,这可能与其阻滞A549/DDP细胞从G1期进入S期有关.
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益气除痰方对A549细胞增殖抑制并诱导凋亡的研究
目的 研究益气除痰方含药血清对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡的影响.方法 益气除痰方汤剂给大鼠灌胃,制备含药血清;通过MTT比色法观察A549细胞增殖,并确定血清添加量;通过琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测A549细胞凋亡.结果 益气除痰方含药血清对A549细胞活性具有抑制性,且有时间和浓度依赖性,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05),终确定10％、20％、30％为实验浓度;琼脂糖凝胶电泳中高剂量组及阳性组可见明显凋亡DNA Ladder条带,而阴性组、低剂量组、中剂量组均未明显特征性凋亡条带出现;流式细胞仪检测结果提示中低、中、高剂量组、阳性组中A549细胞凋亡率分别为(8.40±1.67)％、(15.80士2.95)％、(27.4±0.96)％、(39.00士1.11)％,均高于阴性组,与阴性组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 益气除痰方含药血清对A549细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用.
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针药结合治疗老年非小细胞肺癌100例远期疗效观察
目的:观察针药结合治疗Ⅲ、Ⅳ期老年非小细胞肺癌(NSCLC)的远期疗效.方法:采用前瞻性、多中心、随机、对照的研究方法,将199例符合纳入标准病例按1:1比例分成治疗组(采用针药结合治疗)和对照组(采用西医治疗),对照组则根据患者的PS评分分为化疗组(Ps≤2)和佳支持治疗组(BSC组)(PS=3).治疗组以PS评分进行分层(PS≤2或PS=3),分别与化疗组及BSC组对照.观察两组疾病进展时间、中位生存期及生存率.结果:治疗组与对照组中位生存期分别为295d、301 d(PS≤2组),271 d及213 d(PS＝3组),两组1年生存率分别为31.6%、24.1%,组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).两组中位疾病进展时间分别为120d、127 d(Ps≤2组),107 d及91 d(PS=3组),其中治疗组(PS=3)与BSC组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:对于一般状况较好的老年NSCLC患者,针药给合治疗与化疗比较生存时间相近,而毒副反应减轻;对于一般状况较差的老年本病患者,中医药治疗可延长患者中位生存期,提高生存率.
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益气除痰方对非小细胞肺癌患者化疗相关性疲劳的防治作用
目的:探讨益气除痰方对非小细胞肺癌患者化疗相关性疲劳的防治作用.方法:选取83例晚期非小细胞肺癌患者,按患者治疗前测定的疲劳程度随机将所有患者分为治疗组41例和对照组42例,治疗组给予益气除痰方联合DP/GP方案,对照组给予DP/GP方案.治疗2个周期后,观察比较两组治疗前后BFI疲劳评分、EORTC QTQ-LC43生活质量评分及骨髓功能的变化.结果:治疗组的中重度化疗相关性疲劳(CRF)发生率低于对照组;恶心呕吐、食欲丧失、腹泻等不良反应的自我评分也明显低于对照组;血红蛋白浓度及白细胞数量降低程度均明显轻于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:益气除痰方能缓解化疗相关性疲劳,降低化疗相关不良反应的发生,提高患者的生活质量.
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益气除痰方治疗脾虚型肺癌作用机制探讨
目的:从内质网应激(ERS)角度探讨益气除痰方治疗脾虚型肺癌的作用机制.方法:将60只成功建模的脾虚Lewis肺癌小鼠随机分为模型组,顺铂注射液(1 mg/kg)阳性对照组及益气除痰方低(2 g/kg)、中(4 g/kg)、高(8 g/kg)剂量组,联合用药组(益气除痰方4 g/kg+顺铂注射液1 mg/kg),每组10只.给药14 d后处死小鼠,检测肿瘤体积和质量;HE染色观察肿瘤组织病理学改变;免疫组织化学法、Western blot法检测肿瘤组织中CHOP、DR5蛋白表达.结果:与模型组比较,除益气除痰方低剂量组外各给药组肿瘤体积、肿瘤质量显著降低(P＜0.01),各给药组肿瘤组织中肿瘤细胞大量坏死,内质网应激蛋白CHOP、DR5表达显著升高(P＜0.01),其中以联合用药组作用佳.结论:益气除痰方和化疗对肺癌具有不同程度的抑制作用,联合用药效果更好,其作用机制可能与上调内质网应激蛋白CHOP、DR5表达介导细胞凋亡有关.
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益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究
目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT).方法:通过暴露于TGF-β1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达.结果:镜下可见经TGF-β1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程.结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cad-herin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移.
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益气除痰方调控未折叠蛋白反应抑制A549肺癌生长的研究
目的:探讨益气除痰方对BALB/c裸小鼠肺癌A549移植瘤的抑制作用及其机制.方法:人肺腺癌细胞A549接种BALB/c裸鼠40只,随机分为模型组(生理盐水)、顺铂注射液(0.002 g/kg)组、益气除痰方低剂量(3.0g/kg)组、益气除痰方高剂量(6.0 g/kg)组、联合用药(益气除痰方6.0 g/kg+顺铂注射液组0.002 g/kg)组.造模第8天,中药灌胃,1次/d,每次0.2 mL,连续14 d.第17天,顺铂注射液腹腔注射,1次/d,每次0.2 mL,连续5d.第22天,麻醉处死裸鼠,检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率.采用免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法检测肿瘤组织中钙联蛋白(calnexin,CNX)及调控转录因子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的表达.结果:顺铂注射液组、益气除痰方高剂量组及联合用药组瘤质量及瘤体积较模型组显著降低(P ＜0.05或P＜0.01),且联合用药组显著优于顺铂注射液组(P＜0.01).免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法结果均显示顺铂注射液组、益气除痰方高剂量及联合用药组CNX及XBP1的表达较模型组显著降低(P＜0.01),且联合用药组优于顺铂注射液组(P＜O.05或P＜0.01).结论:益气除痰方能抑制A549肺癌生长,与顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调相关分子伴侣蛋白CNX及XBP1的表达而抑制未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),从而导致肿瘤细胞凋亡有关.
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益气除痰方对肺癌A549移植瘤细胞凋亡途径Caspase-4及DNA-PK的影响
目的:探讨益气除痰方是否通过内质网UPR介导的细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用.方法:建立40只肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,于接种第7天将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)、顺铂注射液组(0.002 g/kg)、益气除痰方(3.0 g/kg)+顺铂注射液(0.002 g/kg)组及益气除痰方低、高剂量组(3.0、6.0 g/kg),每组8只.中药灌胃给药,1次/d,连用21d.顺铂注射液腹腔注射,1次/d,连用7d.干预第22天,处死所有小鼠,测量瘤体质量、体积,采用免疫组化及Western blot法检测肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK的表达.结果:与模型组比较,益气除痰方各剂量组及益气除痰方+顺铂注射液组肿瘤体积、肿瘤质量显著降低,肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK表达均显著升高(P＜0.01);益气除痰方+顺铂注射液组效果优于顺铂注射液组(P＜0.05).结论:益气除痰方对小鼠A549肺癌有一定抑制作用,其机制可能与通过升高Caspase-4、DNA-PK蛋白的表达介导细胞凋亡途径有关.
