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原发性中枢神经系统弥漫性大B细胞性淋巴瘤围血管生长机制的探讨
目的 探讨原发性中枢神经系统弥漫性大B细胞性淋巴瘤(PCNS-DLBCL)围血管生长的机制.方法 对22例PCNS-DLBCL进行临床、放射和病理观察及随访,免疫组化EnVision法行XBP1、CD44和IL-4表达分析,以17例淋巴结弥漫性大B细胞性淋巴瘤和10例胶质母细胞瘤为对照.结果 22例PCNS-DLBCL年龄41～69岁,平均年龄56岁,男女之比为1.4:1.CT多表现为占位性病变;MRI显示T1加权相低信号,T2加权相等或稍高信号,增强扫描有不均匀强化.镜检示肿瘤细胞大多围绕血管生长形成袖套样外观,实性区域仍伴有围血管生长特点.免疫组化示围血管生长的肿瘤细胞XBP1、IL-4和CD44强(+),表达率分别为95.5%、86.3%和77.3%,GFAP和CD34(-),与对照组淋巴结弥漫性大B细胞性淋巴瘤和胶质母细胞瘤比较差异极显著(P＜0.01).结论 PCNS-DLBCL具有特征性的临床病理特征,肿瘤细胞围血管生长显示独特的形态特点,与XBP1、CD44和IL-4的表达增高关系密切.
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XBP1在肿瘤中作用的研究进展
目的:总结XBP1的结构和功能及其在肿瘤发生发展过程中的作用研究进展.方法:检索PubMed和CNKI数据库,以“XBP1、未折叠蛋白反应、内质网应激、氧化应激、肿瘤”为关键词,检索2002-02- 2011-10的相关文献.纳入标准:1)XBP1的结构和功能；2)在肿瘤中的表达情况；3)与肿瘤的相关研究.结果选择32篇参考文献.结果:XBP1是未折叠蛋白反应(UPR)的重要组成部分,可以被内质网应激(ER stress)所激活,且它能调节细胞存活.XBP1在许多肿瘤中高表达,如肝癌、乳腺癌、胰腺癌等,这与肿瘤微环境有关.在肿瘤生长过程中,缺失XBP1的细胞受损伤,且在缺氧的条件下达些细胞的生存受到连累.结论:XBP1与肿瘤的发生发展密切相关,并很有可能成为肿瘤分子治疗的新靶点.
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芹黄素对氧化应激诱导的HaCat细胞XBP1表达的影响
目的 研究芹黄素对过氧化氢诱导的HaCat细胞氧化应激及XBP1表达的影响.方法 采用MTT法测定芹黄素对HaCat细胞的活力的影响,DCFH-DA法流式细胞术检测HaCat细胞活性氧(ROS)含量,实时定量PCR检测HaCat细胞XBP1的mRNA表达.结果 500 μmol/L的过氧化氢可显著诱导HaCat细胞ROS含量及XBP1smRNA表达升高(P＜0.01);10 μmol/L及25μmol/L的芹黄素可显著抑制过氧化氢引起的HaCat细胞ROS含量及XBP1s mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).而过氧化氢或芹黄素对HaCat细胞未剪切的XBP1 (XBP1u)的mRNA水平无明显影响.结论 芹黄素可能通过抗氧化,对过氧化氢引起的XBP1s表达升高具有抑制作用,因而可能具有开发成为治疗白癜风的新药的前景.
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XBP1对低氧环境下胶质瘤细胞活力及糖酵解的影响
目的：明确低氧应激对胶质瘤细胞X-盒结合蛋白1（X-box binding protein 1，XBP1）的作用；明确胶质瘤细胞XBP1表达与糖代谢之间的关系；抑制XBP1表达对胶质瘤细胞在常氧和低氧环境下细胞活力的影响；明确低氧环境中XBP1对胶质瘤细胞糖酵解的影响。方法：分别在常氧和低氧条件下培养人脑胶质瘤细胞系，检测XBP1激活情况；使用siRNA技术抑制XBP1表达，使用氧化磷酸化抑制剂处理细胞，检测细胞活力及糖代谢方式的改变，在常氧和低氧条件下检测细胞存活及糖酵解产物。结果：低氧环境下XBP1活化增加。低氧环境下XBP1沉默降低胶质瘤细胞活力、ATP和乳酸生成，葡萄糖消耗量减少。细胞氧化磷酸化受到抑制后，XBP1沉默降低胶质瘤细胞存活率。结论：低氧环境可诱导胶质瘤细胞XBP1的活化。在低氧环境下XBP1沉默降低胶质瘤细胞活力和糖酵解，胶质瘤细胞的糖酵解依赖于XBP1活化。
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RNF13通过IRE1/XBP-1通路调控内质网应激介导的细胞凋亡
目的:在研究内质网应激介导的细胞凋亡过程中,我们发现Ring finger protein13(RNF13)具有促进细胞凋亡的功能.我们拟研究沉默RNF13后细胞对Tunicamycin等引起的细胞凋亡的影响,以及RNF13对活性形式的caspase3,XBP1 (X-box binding protein 1)的剪切以及IRE1(Endoplasmic reticulum to nucleus signaling 1)磷酸化的影响以有助于了解RNF13促进细胞凋亡的信号通路的研究.方法:基因沉默RNF13,利用MTT方法研究RNF13沉默后对细胞增殖的影响,RNF13基因沉默后对XBP1剪切的影响,免疫印迹观察RNF13对IRE1磷酸化的影响.结果:RNF13基因沉默效率在80％以上.RNF13基因沉默后明显抑制细胞凋亡;敲低RNF13的细胞可抵抗衣霉素以及毒胡萝卜素的诱导的细胞凋亡.Caspase-3是细胞凋亡的关键蛋白.敲低RNF13后caspase-3的活性形式明显降低(降低70％,P＜0.001).在加入衣霉素引起内质网应激的情况下,敲除RNF13的细胞XBP1的切割活性明显降低.敲除RNF13的细胞中IRE1的磷酸化明显降低(降低90％,P＜0.001).结论:RNF13通过IRE1-XBP1信号通路调节细胞凋亡.
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XBP1在非洲爪蟾胚胎发育中的作用
目的:探讨X盒结合蛋白1 (X-box binding protein 1,XBP1)对非洲爪蟾胚胎发育的影响.方法:利用Western blot、原位杂交和免疫染色法检测XBP1在胚胎发育各个阶段的表达;通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降,利用RT-PCR和整体胚胎原位杂交法检测基因表达变化.结果:XBP1主要表达于非洲爪蟾胚胎发育期的神经、前肾、胰腺等器官中;敲降XBP1s在胚胎发育早期影响非洲爪蟾胚层形成相关基因,在胚胎发育后期影响胰腺发育相关基因.结论:XBP1s在胚胎发育早期可能影响胚层形成,在晚期可能影响胰腺的发育.
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RNA干扰BLIMP1表达对NCI-H929细胞增殖凋亡的影响及可能机制
目的 探讨RNA干扰B淋巴细胞诱导成熟蛋白(B lymphocyte induced maturationprotein,BLIMP1)表达对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株NCI-H929生物学功能的影响及其可能机制.方法 用慢病毒干扰载体及阴性对照载体转染NCI-H929细胞后采用RT-PCR及Western blot方法观察BLIMP1 mRNA及蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖作用,Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR及Western blot检测未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)信号通路中X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、肌醇必需酶(inositol-requiring enzyme,IRE)1α及凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的变化.结果 BLIMP1 shRNA转染NCI-H929细胞后,BLIMP1 mRNA、蛋白表达均下调(P<0.05);shRNA/BLIMP1组24、48及72 h细胞增殖率低于转染空载体(shRNA/con)组和对照组(P<0.05),shRNA/BLIMP1组细胞凋亡率〔(10.87±1.79)%〕高于shRNA/con组〔(5.57±0.87)%〕和对照组〔(4.90±0.57)%〕(P<0.01);凋亡蛋白CHOP表达上调,XBP1、IRE1α表达下调.结论 沉默BLIMP1可以下调XBP1的表达而抑制UPR反应,发挥其抑制NCI-H929细胞增殖及促进凋亡作用.
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依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态后海马XBP1 mRNA和caspase12表达及神经元凋亡的影响
目的:探讨依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后海马内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)关键标志分子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)mRNA、caspase-12的表达及神经元凋亡的影响.方法:将19～21日龄SD大鼠随机分入惊厥持续状态(SC)组、依达拉奉(ED)组、生理盐水对照(NS)组;各组再按不同时间点分五个亚组.应用氯化锂 -匹鲁卡品建立大鼠SC模型,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)动态观察SC后海马XBP1、caspase-12 mRNA的表达情况.用免疫组织化学方法观察海马caspase-12蛋白表达情况.用TUNEL法观察神经元凋亡细胞数.结果:幼年大鼠海马中XBP1和caspase-12在SC组表达显著增强,与NS组比较差异有显著性(P＜0.01);与SC组比较,ED组XBP1 mRNA表达显著升高(P＜0.01或P＜0.05),c aspase-12 mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.01或P＜0.05);SC组在惊厥12h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组( P＜0.01),而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降( P＜0.01或P＜0.05).结论:依达拉奉有可能通过上调XBP1的表达与下调caspase-12的表达,并使神经元凋亡数目减少,从而发挥对神经元的保护作用.
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XBP1在白癜风皮损及应激HaCaT细胞中的表达
目的:检测XBP1在白癜风皮损组织及H2O2诱导的HaCaT细胞中的表达.方法:H2O2处理体外培养的HaCaT细胞.Real time PCR检测白癜风皮损中及应激HaCaT细胞中XBP1的表达:ELISA检测应激HaCaT细胞中特异性抑制剂抑制XBP1活化前后IL-6和IL-8的表达.结果:白癜风皮损和应激HaCaT细胞中XBP1 mRNA显著高于正常对照;应激HaCaT细胞中IL-6和IL-8水平高于空白对照组,抑制XBP1活化后两者分泌减少.结论:XBP1在白癜风皮损组织中显著上调,促进应激的HaCaT细胞分泌IL-6、IL-8.
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转录因子XBP1在口腔鳞状细胞癌中的表达
目的:检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中X盒结合蛋白1(X box binding protein 1,XBP1)的表达,并探讨其意义.方法:应用qRT-PCR法检测50例OSCC肿瘤和癌旁正常黏膜上皮中剪切型XBP1(XBP1 splicing,XBP1-s)的表达;应用组织芯片技术和免疫组化染色相结合的方法检测100例OSCC癌旁上皮、肿瘤中心、侵袭前沿及淋巴结转移灶中XBP1蛋白的表达.结果:qRT-PCR显示:XBP1-s mRNA表达显著上升(log2(倍数)≥1)的病例与颈淋巴结转移相关(P＜0.05).免疫组化结果显示:XBP1蛋白在OSCC侵袭前沿和淋巴结转移灶中的表达均高于癌旁上皮和肿瘤中心(P＜0.05);且在淋巴结转移灶中的表达明显高于侵袭前沿(P＜0.05).此外,XBP1蛋白表达还与OSCC组织病理学分级相关(P＜0.05).结论:XBP1可能是促进口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的一个重要因子.
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心衰Ⅰ号联合贝那普利对慢性心力衰竭大鼠心功能、CHOP、GRP78和XBP1的影响
目的:考察心衰Ⅰ号联合贝那普利对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能和糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及X盒结合蛋白(XBP1)的影响.方法:将CHF模型大鼠分5组:模型组、心衰Ⅰ号组、贝那普利组、心衰Ⅰ号+贝那普利组(联合组),并设假手术组,各组连续给药28 d.记录大鼠体征、死亡、心功能情况,测定心肌组织CHOP、GRP78、XBP1表达,血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:无死亡大鼠.与假手术组比较,模型组大鼠SBP、DBP、CO、LVSP、±dp/dtm.及血清SOD显著降低(P＜0.05),心肺指数、LVEDP、血清MDA水平及心脏CHOP、GRP78、XBP1蛋白表达显著升高(P＜0.05).各给药组上述指标不同程度改善,以联合用药组效果佳(P＜0.05).结论:心衰Ⅰ号联合贝那普利可改善CHF大鼠的心功能,降低心肌CHOP、GRP78及XBP1蛋白表达,降低血清MDA含量并升高SOD活性,提示心衰Ⅰ号通过抑制ERS介导的信号通路达到抑制心肌细胞凋亡的目的.
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益气除痰方调控未折叠蛋白反应抑制A549肺癌生长的研究
目的:探讨益气除痰方对BALB/c裸小鼠肺癌A549移植瘤的抑制作用及其机制.方法:人肺腺癌细胞A549接种BALB/c裸鼠40只,随机分为模型组(生理盐水)、顺铂注射液(0.002 g/kg)组、益气除痰方低剂量(3.0g/kg)组、益气除痰方高剂量(6.0 g/kg)组、联合用药(益气除痰方6.0 g/kg+顺铂注射液组0.002 g/kg)组.造模第8天,中药灌胃,1次/d,每次0.2 mL,连续14 d.第17天,顺铂注射液腹腔注射,1次/d,每次0.2 mL,连续5d.第22天,麻醉处死裸鼠,检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率.采用免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法检测肿瘤组织中钙联蛋白(calnexin,CNX)及调控转录因子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的表达.结果:顺铂注射液组、益气除痰方高剂量组及联合用药组瘤质量及瘤体积较模型组显著降低(P ＜0.05或P＜0.01),且联合用药组显著优于顺铂注射液组(P＜0.01).免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法结果均显示顺铂注射液组、益气除痰方高剂量及联合用药组CNX及XBP1的表达较模型组显著降低(P＜0.01),且联合用药组优于顺铂注射液组(P＜O.05或P＜0.01).结论:益气除痰方能抑制A549肺癌生长,与顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调相关分子伴侣蛋白CNX及XBP1的表达而抑制未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),从而导致肿瘤细胞凋亡有关.
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X盒结合蛋白1在低浓度皮质酮对巨噬细胞免疫功能调控中的作用
目的 探讨X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)在低浓度皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能调控中的作用.方法 分离培养成年健康雄性C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,应用XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光显微镜观察感染效率,感染3、5 d后收集巨噬细胞提取总RNA,应用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞XBP1 mRNA表达水平和干扰效率.XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染离体培养的小鼠腹腔巨噬细胞3 d后,再应用低浓度皮质酮(50 ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1 h,分别应用ELISA法及激光共聚焦显微镜检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α生成及其吞噬功能变化.结果 当复感染指数(multiplicity of infection,MOI)值≥6时,XBP1-RNAi慢病毒能有效地感染小鼠腹腔巨噬细胞,感染效率＞75%.应用RT-PCR检测发现XBP1-RNAi能有效地抑制小鼠腹腔巨噬细胞XBP1基因表达.通过选择性地沉默XBP1基因表达,低浓度皮质酮(50 ng/ml)对巨噬细胞吞噬功能增强的作用受到抑制,巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均显著下降(P＜0.01),而且对TNF-α分泌增强的作用也受到抑制,显著低于阴性对照慢病毒组(P＜0.01).结论 采用RNA干扰选择性地沉默XBP1,能有效地抑制低浓度皮质酮对巨噬细胞吞噬和TNF-α生成增强的作用.
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益气除痰方增强肺癌化疗药物敏感性的作用机制
目的 从内质网应激反应的角度,研究益气除痰方增强化疗药物敏感性的作用机制.方法 取40只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549,建立裸鼠移植瘤模型,随机均分为模型组、顺铂组、益气除痰方低、高剂量组及联合用药组,造模后第8天,ig给予益气除痰方低、高剂量组及联合用药组小鼠相应剂量的益气除痰方,qd,连续14d,第17天,ip给予顺铂组和联合用药组小鼠顺铂注射液,qd,连续5d,第22天,检测裸鼠移植瘤的体积与瘤重,计算抑瘤率,并采用免疫组化法、RTQ-PCR法及Western blot法检测肿瘤组织中ATF6、XBP1的表达.结论 益气除痰方能抑制裸鼠肺癌A549细胞的生长,与化疗药物顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调内质网应激反应相关蛋白ATF6、XBP1的表达而抑制肿瘤生长有关.
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脂多糖体外诱导牙周膜成纤维细胞发生内质网应激
目的 观测脂多糖(LPS)是否诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)发生内质网应激.方法 体外培养HPDLF,分别用LPS(0.1、1、10 μg/mL)刺激0、3、6、9h后收集细胞,提取RNA.采用实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOPmRNA表达水平,通过RT-PCR检测XBP1mRNA表达水平及剪切活化情况.结果 LPS作用HPDLF3 h后GRP78、CHOP、XBP1mRNA表达水平显著上调,其中XBP1mRNA表达水平在6h达到高峰,并且出现活化的剪切形式XBP1s,而GRP78、CHOPmRNA表达水平持续上调.结论 LPS作用HPDLF后细胞发生内质网应激,且存在浓度和一定的时间依赖性.
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应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1结合的肝细胞蛋白编码基因
目的:构建乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1( XBP1)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与XBP1相互作用的基因.方法:通过PCR扩增获得XBP1基因,构建真核表达载体pGBKT7-XBP1,转化酵母菌AH109并在其中进行表达.随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆.提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-XBP1共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆.挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析.结果:筛选出20种与XBP1相互作用的蛋白,其中包括金属硫蛋白,平滑肌细胞相关蛋白,去唾液酸糖蛋白受体,丙酮酸脱氢酶激酶1,甜菜碱甲基转移酶,视黄醇结合蛋白,补体因子B、人补体C9,转化生长因子β1,丝氨酸蛋白酶抑制剂；cAMP应答元件结合蛋白,拓扑异构酶Ⅱβ等已知功能基因及1个未知功能序列.结论:筛选到多种XBP1相互作用的基因,包括与细胞内结构、细胞生长相关蛋白基因,参与细胞内代谢的蛋白基因,参与信号转导途径、免疫及其他相关蛋白基因,参与DNA的复制、转录、重组、修复的基因.
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X盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究
背景与目的:活性氧(ROS)可以通过诱导细胞氧化应激而诱导凋亡,肿瘤包括胶质瘤在体内的生长均处于高活性氧的状态.提高胶质瘤细胞对活性氧-氧化应激的敏感性可抑制肿瘤在体内的生长侵袭,而且还可以增强一些诱导活性氧的化疗药物的疗效.本研究通过干预XBP1基因的表达,观察XBP1是否可调控胶质瘤细胞对氧化应激的敏感性.并探讨其机制.方法:用siRNA转染技术抑制U251MG细胞XBP1基因的表达后对比细胞对H2O2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积、以及P38磷酸化,以此来反映细胞内氧化应激的水平;并比较细胞内抗氧化分子的表达情况;将XBP1基因过表达后观察能否起到相反的效果;后应用启动子突变技术分析XBP1对Catalase表达的影响.结果:U251MG细胞XBP1表达抑制后可以显著提高H2O2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积以及延长P38的磷酸化,并降低细胞内一些抗氧化分子包括过氧化氢酶表达,XBP1过表达可以增强Catalase表达并且降低ROS堆积;启动子序列突变分析结果显示XBP1增强Catalase表达的效应完全依赖于启动子序列的CCAAT框.结论:XBP1对氧化应激引起的细胞损伤具有保护作用:其可能机制至少是通过上调Catalase的表达实现.抑制XBP1的表达可能作为一种分子靶向,对胶质瘤治疗有积极意义.
