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红景天苷对力竭大鼠心肌收缩力的影响
目的 探讨红景天苷对力竭大鼠心肌收缩力的影响,为临床力竭心脏损伤防护提供新的思路.方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组(n=10):对照组,力竭组,红景天苷A、B组.Thomas方法制备力竭大鼠模型.红景天苷A、B组分别给予15、30mg/(kg.d)红景天苷溶液,对照组、力竭组给予等体积0.9％ NaCl溶液,腹腔注射2周.ELISA法检测各组血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(TnI)含量的变化.采用Langendorf装置分离大鼠心室肌细胞,以IonOptix细胞收缩和钙离子浓度同步测定系统检测大鼠心肌细胞的收缩功能和钙瞬变,激光共聚焦显微镜线扫描成像技术记录心肌细胞自发性钙火花及肌质网钙含量.结果 与对照组比较,力竭组大鼠心肌细胞钙瞬变、大收缩幅度分别降低41％和45％(P＜0.01),钙火花发生率增加了1.5倍(P＜0.01),心肌细胞肌质网钙离子含量明显减少(P＜0.01).与力竭组比较,红景天苷A、B组大鼠心肌细胞钙瞬变分别增加了20％、38％,大收缩幅度分别增加了25％、54％(P＜0.01),钙火花发生率明显降低(P＜0.01),心肌细胞肌质网钙离子含量明显增加(P＜0.01);且红景天苷B组各指标均明显优于红景天苷A组(P＜0.05或P＜0.01).结论 红景天苷可改善力竭运动造成的心肌细胞收缩力减弱,其机制与细胞内钙离子调控有关.
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五味子对高强度军事训练步兵应激系统的影响
目的 探讨五味子、红景天苷及复方五味子对军事应激前后人体下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴、下丘脑-垂体-睾丸(HPG)轴和血清IL-1、IL-2、IL-6基础水平的影响.方法 选择120名未经过较长期两柄作战训练的健康基层步兵作战部队官兵,随机分为复方五味子组(A组)、五味子组(B组)、红景天苷组(C组)、对照组(D组),每组30名.4组均进行每日8h的高强度复合军事训练,共持续1周.分别在训练前日和训练结束后次日清晨(7:00-8:00)静脉采血,采用放射性免疫分析法测定血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、睾酮(T)、IL-1、IL-2、IL-6水平并进行组间比较.结果 对照组中,训练后的血清CORT和ACTH基础水平与训练前比较无明显差异(P＞0.05),而T水平明显下降(P＜0.01),IL-2水平明显上升(P＜0.05),IL-6水平明显下降(P＜0.01),IL-1水平比训练前亦有所升高,但差异无统计学意义.五味子组中,训练后的ACTH、T及IL-6水平较训练前明显下降,而IL-2水平明显升高(P＜0.01),CORT有下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).红景天苷组中,训练后的T水平及IL-6水平较训练前明显下降(P＜0.01),CORT有下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).复方五味子组中,训练之后的血清CORT、ACTH、T水平及IL-I、IL-6水平均明显下降,而IL-2水平明显升高(P＜0.01).训练前各组之间各激素与细胞因子水平差异均无统计学意义(P＞0.05).训练后五味子组和复方五味子组血清ACTH水平及红景天苷组血清IL-2水平与对照组比较明显下降(P＜0.05).结论 五味子及复方五味子对应激后HPA轴的抑制作用显著而持久,减弱了应激反应导致的CORT和ACTH水平升高,五味子复方中药可减轻应激导致的HPG轴的抑制,而红景天苷能明显减弱应激引起的IL-2水平升高.
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红景天苷对紫外线照射损伤HaCaT细胞Nrf2核转位的影响
目的：观察红景天苷对人HaCaT细胞转录因子Nrf2核转位及HaCaT细胞受紫外线照射后谷胱甘肽和丙二醛的影响。方法将HaCaT细胞分为5组，第1组未经任何处理（G1），第2组接受100 mJ/cm2剂量紫外线照射（G2），第3组、第4组及第5组分别采用20、40μg/ml及80μg/ml红景天苷（G3、G4、G5）培养24 h后，再采用100 mJ/cm2剂量紫外线照射，免疫荧光法观察HaCaT细胞Nrf2核转位情况，分光光度法分别检测细胞丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平。结果20、40、80μg/ml红景天苷均能够诱导紫外线照射细胞后Nrf2发生核转位，其中40μg/ml和80μg/ml的红景天苷作用尤为显著。G2 MDA较G1显著升高(P＜0.01)，G4、G5 MDA较G2显著降低(均P＜0.05)，G2 GSH较G1显著降低(P＜0.005)，G4、G5 GSH较G2显著升高(均P＜0.01)。结论红景天苷可能通过促进紫外线照射HaCaT细胞的Nrf2核转位，降低MDA及升高GSH的水平，从而减轻紫外线照射对细胞的氧化损伤。
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红景天苷对急性辐射损伤小鼠骨髓脂肪细胞生成的影响
目的 探讨红景天苷抑制辐射诱导小鼠骨髓脂肪化、促进辐射后造血恢复的情况,并研究其可能的机制.方法 取6～7周龄健康BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组、单纯照射组、药物干预组,每组各20只.辐射对照组和实验组均给予6.0 Gy 60Co γ射线辐射处理,实验组于辐射后12 h腹腔注射红景天苷(30 mg·kg-1·d-1)至照后8d,辐射对照组腹腔注射等体积生理盐水.辐射后14 d观察小鼠的一般情况、体重变化、外周血象,并取股骨制作骨髓切片观察骨髓病理改变,测定脂肪细胞面积,分离骨髓单个核细胞后提取总RNA,荧光定量PCR(q-PCR)检测PPAR-γ和FABP4 mRNA的相对表达量.结果 单纯照射组小鼠在照射后均出现外周血白细胞降低、血小板减低,骨髓脂肪细胞过度增生,骨髓有核细胞减少等骨髓造血抑制改变.与单纯照射组小鼠比较,红景天苷能改善照射后小鼠一般情况,并通过抑制PPAR-γ、FABP4的表达(t=8.64、13.19,P＜0.05),抑制骨髓脂肪细胞的过度增生,减少脂肪空泡面积(t=13.31,P＜0.05);照后7d,药物干预组小鼠外周血白细胞计数高于单纯照射组(t =5.80,P＜0.05);照后14 d,药物干预组小鼠外周血白细胞计数较单纯照射组及照后7d药物干预组小鼠外周血白细胞计数均有增高(t=13.78、7.54,P ＜0.05),同时血红蛋白较单纯照射组高(t=14.66,P＜0.05).结论 红景天苷能抑制急性辐射损伤小鼠骨髓脂肪细胞生成,调节骨髓微环境,从而促进辐射损伤后小鼠造血恢复.
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UPLC-MS/MS法测定红景天提取物中6种活性成分的含量
目的：建立并验证同时测定红景天（Rhodiola）提取物中红景天苷、红景天素、草质素苷、草质素、山柰酚和槲皮素6种活性成分含量的UPLC-MS/MS方法。方法色谱条件：采用Zorbax Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，3.5μm）；0.2%甲酸水-乙腈为流动相，洗脱方式为梯度洗脱；流速为0.4 ml/min；柱温为25℃。质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），负离子检测，扫描方式为多反应监测模式（MRM）。结果6种活性成分分别在10～20000，10～4000、10～4000、5～2000、10～2000和5～2000 ng/ml之间线性关系良好。仪器精密度RSD＜3.31%，6种活性成分的稳定性RSD＜5.07%，重复性RSD＜4.05%，平均回收率在99.27%～108.91%，RSD均＜4.92%。结论本法可同时测定红景天提取物中6种活性成分含量，具有快速、灵敏度高、专属性好，重复性好的特点。
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红景天苷对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用
目的 观察红景天苷抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用,探讨红景天苷抗心肌缺氧可能的信号通路.方法 原代培养的心肌细胞加入不同浓度的红景天苷缺氧24 h,噻唑蓝法测定细胞增殖;原代培养的心肌细胞分为5组:正常对照组;缺氧/复氧组;缺氧/复氧加红景天苷100 μg/ml组;缺氧/复氧加红景天苷100 μg/ml再加细胞外调节激酶抑制剂20 μg组;缺氧/复氧加细胞外调节激酶抑制剂20 μg组.加药后先孵育60 min,再缺氧培养4 h,随后常氧培养2 h.全自动生化分析仪测定心肌酶(乳酸脱氢酶、肌酸肌酶、谷草转氨酶)含量,Western blot法检测细胞外信号调节激酶蛋白表达.结果 红景天苷增加了缺氧/复氧损伤心肌细胞的活力,降低了心肌细胞乳酸脱氢酶和肌酸激酶的渗漏,使磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达水平明显降低.结论 红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞损伤有保护作用,此作用可能通过细胞外信号调节激酶信号通路发挥作用.
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耐力胶囊的质量标准研究
目的 建立耐力胶囊的质量标准.方法 采用TLC法对红景天、白术进行定性分析；应用HPLC法对红景天苷进行含量测定,色谱柱ZORBAX-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相为甲醇-水(16∶84)；流速1 ml ·min-1；检测波长275nm.结果 定性鉴别分离度好,专属性强,阴性样品无干扰.红景天苷的含量测定线性范围为0.28～ 1.68 μg·ml-1,r=0.9993,平均回收率为100.41％,RSD为1.14％(n=9).结论 本文建立方法准确可靠、灵敏度高、专属性强,可有效控制耐力胶囊的质量.
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HPLC法测定复方红景天制剂中红景天苷的含量
目的 建立HPLC法测定复方红景天制剂中红景天苷的含量.方法 色谱柱:Purospher star RP C18 (4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水-甲酸(8∶92∶0.05),流速:1.0 mL/min,检测波长:277 nm.结果 红景天苷在1～10 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998),加样回收率为99.85％,RSD为3.0％(n=6).结论 该法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可作为控制复方红景天制剂质量的方法.
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红景天苷衍生物的合成及其抗氧化作用研究
目的 设计、合成具有抗氧化、清除自由基作用的新型红景天苷衍生物.方法 以红景天苷元-酪醇为先导结构,经结构修饰引入查尔酮结构单元,增强其抗氧化、清除自由基作用.采用DPPH和FRAP法测定其体外抗氧化、清除自由基作用.结果 采用微波合成反应,经邻位乙酰化、Claisen-Schmidt缩合以及水解3步反应,制备了一系列含查尔酮结构单元的新型红景天苷衍生物,所有化合物体外抗氧化、清除自由基活性均强于酪醇.结论 设计、合成并筛选得到一类新型红景天苷衍生物,构效关系研究证实酚羟基和查尔酮结构单元是化合物抗氧化、清除自由基的重要结构特征.
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红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原基因表达的影响
目的探讨红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖、α1(I)型胶原mRNA合成、IκB和NF-κB表达的影响.方法用原位杂交、免疫细胞化学和凝胶电泳迁移率技术(EMSA)检测HSC的增殖和胶原基因表达.结果乙醛刺激HSC增殖、α1(I)型胶原mRNA合成 ,使IκB表达下降、NF-κB活性增加.红景天苷(0.5～2.5 mg*mL-1)对上述影响有抑制作用,且以1.5 mg*mL-1组效果好.结论红景天苷明显抑制乙醛刺激的HSC增殖及胶原基因的表达.
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红景天苷减轻叠氮钠诱导线粒体损伤的作用
目的观察红景天苷对呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤的保护作用,探讨其在防治神经退行性疾病中可能的作用机制.方法将叠氮钠与人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y共同孵育,MTT法测定细胞存活力,JC-1法检测线粒体膜电位变化.刃天青法检测大鼠脑线粒体功能.结果 64 mmol·L-1叠氮钠与SH-SY5Y共同孵育4 h后,细胞存活率明显下降,线粒体膜电位下降.预先加入红景天苷能明显提高细胞存活率,维持线粒体膜电位.650 μmol·L-1叠氮钠能使大鼠脑线粒体功能下降,预先加入红景天苷能明显改善线粒体功能.结论红景天苷能够减轻叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤,能够改善线粒体功能,这可能是其抗老年痴呆的机制之一.
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红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化的机制研究
探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和PI3K/AKT/mTOR信号通路介导红景天苷诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经细胞定向分化中的作用.以小鼠BMSCs细胞系(D1细胞)为研究对象,实验分为对照组和红景天苷诱导组.红景天苷(5、25、50、100和200 μg·mL 1)作用于细胞24 h和红景天苷(100 μg·mL-1)作用细胞0.5、1、3、6、9、12、24、48和72 h.采用细胞免疫荧光染色方法、实时定量PCR (real-time PCR)和Westem blotting技术分别检测细胞NSE、MAP2、β-Tubulin Ⅲ、NES和GFAP的阳性率和β-Tubulin Ⅲ、NSE、ERK1/2和AKT的表达；PD98059和LY294002分别阻断ERK1/2和PI3K/AKT/mTOR信号通路后,检测ERK1/2和NSE的表达.结果表明,随着红景天苷诱导时间的延长,NSE、MAP2、NES、β-Tubulin Ⅲ和GFAP的阳性率明显增加,NSE和β-Tubulin Ⅲ蛋白的表达显著上调(P＜0.01).随着红景天苷水平和作用时间的增加,ERK1/2、AKT mRNA和蛋白的表达明显上调；PD98059和LY294002分别阻断EKR1/2和PI3K/AKT/mTOR信号通路后,显著抑制红景天苷促进NSE、NES和β-Tubulin Ⅲ mRNA和NSE蛋白表达.结果提示,红景天苷通过激活ERK1/2和PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进BMSCs向神经细胞定向分化.
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红景天苷干预人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的microRNA芯片筛选与分析
本文运用microRNA芯片方法检测红景天苷干预人胚肺二倍体成纤维细胞衰老过程中的microRNA表达变化,并预测miRNA调控的靶基因功能与信号通路.将人胚肺二倍体成纤维细胞分为3组:年轻细胞(28PD,young)、近复制衰老(50 PD,old)和红景天苷处理的50 PD细胞(old+SAL),进行miRNA表达谱分析.结果找到43个miRNA与细胞复制性衰老显著相关.58个miRNA在红景天苷干预后表达发生了改变.6个miRNA分子包括hsa-let-7c、hsa-let-7e和hsa-mir-3620表达量在衰老细胞组中表达降低而在红景天苷干预后表达增加,hsa-mir-411、hsa-mir-24-2-5p和hsa-mir-485-3p则表现出相反的趋势.对已经报道过的靶基因进行功能聚类和信号通路分析,靶基因功能明显富集于31个GO,11条信号通路.挑选4个miRNA经RT-PCR验证结果与芯片结果相符.本研究结果为从microRNA水平探讨红景天苷抗衰老机制提供了线索.
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柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS法同时测定Beagle犬血浆中的红景天苷和酪醇
本文建立了同时测定Beagle犬血浆中红景天苷及酪醇浓度的柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS的分析方法.血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,上清液与丹磺酰氯进行衍生化反应,终止反应后采用甲基叔丁基醚进行提取,提取物复溶后经反相色谱分离,色谱柱为ACQUITY UPLC(R) BEH C18,(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸)-水(含10％乙腈,0.1％甲酸),梯度洗脱,分析时间为9 min.在正离子条件下采用多反应监测模式对两种待测物进行同时测定.用于定量分析的离子对分别为m/z 534.2→372.0(红景天苷衍生物),m/z 372.0→171.0(酪醇衍生物)和m/z 506.0→171.0(内标熊果苷衍生物).在上述条件下,红景天苷和酪醇分别在0.02～20和0.1～10 μmol·L-1内线性良好,定量下限分别为0.02和0.1 μmol·L-1;批内、批间精密度均小于8.68％;准确度在±11.4％范围之内.本方法灵敏度高,专属性好,适合用于Beagle犬灌胃给药后血液中红景天苷、酪醇的药动学研究.
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LC-MS/MS法测定红景天苷在大鼠的血药浓度
目的 建立LC-MS/MS法测定红景天苷在大鼠血浆中的浓度.方法 色谱柱:Agela C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(15∶85),流速:1 mL·min-1,用沉淀蛋白法进行血浆样品预处理,以多反应监测(MRM)扫描方式检测,表告依春为内标.结果 血浆中红景天苷质量浓度在0.04～80.00 μg·mL-1内线性关系良好(r=0.9947),低定量限为0.04 μg·mL-1,日内精密度RSD≤4.5%,日间精密度RSD≤10.6%,平均提取回收率为(90.1±4.6) %(n=3),基质效应为(99.3±7.8) %(n=3).结论 建立的LC-MS/MS法简便、快捷、准确,能满足红景天苷的血药浓度测定及其药代动力学研究.
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红景天苷的合成工艺
目的:获得红景天苷的工业化生产路线.方法:以对羟基苯乙醇和葡萄糖为起始原料,通过糖苷化反应和碱性条件下脱保护得到红景天苷.结果:经HPLC检测,合成的红景天苷纯度在99.5％以上,收率为56.49％.结论:本工艺操作简单,收率高,产品纯度高,降低了红景天苷的生产成本,适合工业化生产.
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注射用红景天苷对麻醉犬血流动力学的影响
目的:观察注射用红景天苷对麻醉犬血流动力学的影响.方法:杂种犬36只,人工呼吸下开胸,给药后观察其心率(HR)、血压(MAP)、心输出量(CO)、冠脉血流量(CBF)、左室压(LVP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室等容收缩期压力大变化率(±LVdP/d tmax)等指标,计算冠脉阻力(CVR)和体循环总外周阻力(TPR)等血流动力学指标.结果:红景天苷(2,4,8 mg·kg-1)对MAP,HR和LVP无明显影响,能显著增加CBF和CO,±LVdP/d tmax也出现不同程度的增加,同时LVEDP,CVR和TPR降低.结论:注射用红景天苷能明显改善麻醉开胸犬的血流动力学指标.
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红景天苷对离体胸主动脉环的舒张作用及其机制
目的:研究红景天苷对胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制.方法:采用兔胸主动脉环,观察红景天苷对胸主动脉环张力的影响.取原代培养的牛胸主动脉内皮细胞,观察红景天苷对内皮细胞一氧化氮(NO)和总一氧化氮合酶(tNOS)的影响.结果:红景天苷对正常胸主动脉环没有明显的舒张作用;对1 μmol·L-1去甲肾上腺素(NE)和60 mmol·L-1KCl引起的胸主动脉环收缩有舒张作用,去除内皮后的胸主动脉环舒张功能降低;左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)可明显抑制红景天苷对胸主动脉环的舒张作用;红景天苷能增加内皮细胞NO释放和细胞裂解液中tNOS活性.结论:红景天苷对预收缩的胸主动脉环有明显内皮依赖性和非内皮依赖性舒张作用,内皮依赖性舒血管作用与NO途径有关.
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红景天苷对力达霉素诱导人二倍体成纤维细胞衰老的干预作用
目的:研究红景天苷对力达霉素导致DNA损伤后所诱导的细胞衰老的调节作用.方法:采用MTT法测定药物对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS活力的影响；衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老形态变化；流式细胞术检测细胞周期分布以及γ-H2AX蛋白表达变化；蛋白免疫印迹技术观察p53和p21蛋白表达水平变化.结果:较低浓度(低于0.1 nmol·L-1)力达霉素能够抑制2BS细胞增殖,诱导β-半乳糖苷酶染色率显著升高和G2/M期阻滞,并使DNA损伤相关的γ-H2AX蛋白以及p53和p21蛋白表达升高.红景天苷能够显著干预力达霉素诱导的上述细胞衰老样表型及相关分子信号变化.结论:红景天苷能够抑制基因毒药物所致DNA损伤及其诱导的细胞衰老.
