miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力
摘要： 目的 研究miRNA -99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制.方法 用re-al-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中 miRNA-99b及mTOR的表达.miRNA-99b 模拟物与野生型或突变型mTOR 3′ UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3′UTR结合.应用real-time PCR法和Western blot检测 miRNA-99b模拟物转染 U251细胞后,细胞中 miRNA-99b、mTOR mRNA 和mTOR 蛋白的表达,Transwell 法检测细胞的侵袭能力.mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化.统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性.结果 脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b 模拟物和野生型 mTOR 3′UTR重组载体共转染的 U251细胞的荧光强度明显降低.miRNA-99b 模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降.改变mTOR表达后,U251细胞中miR-NA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力.Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达 miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组.结论 过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点.
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二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚 及内质网应激的影响
目的 研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响.方法 采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型.实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周.检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加.同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05).结论 DF-MO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过改善内质网应激和caspase-12 信号改善SHR大鼠左心室功能
目的 基于内质网应激与caspase-12信号,探索淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)改善自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)左心室功能的机制.方法 30只14周龄♂SHRs分为模型组、ICSⅡ低、中、高剂量(4、8、16 mg·kg-1)组及阳性药氯沙坦(20 mg·kg-1)组(n=6);同时,WKY作为空白对照组(n=6).在第26周给药结束后,麻醉大鼠,用小动物超声检测大鼠左心室功能;RT-PCR检测左心室GRP78 mRNA水平;Western blot检测左心室GRP78、cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平.结果 与WKY组相比,SHR组大鼠左心室舒张末期的内径和后壁厚度增加,射血分数和短轴缩短率降低;GRP78 mRNA和蛋白水平上调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平增加(P<0.05).与SHR组相比,ICSⅡ中、高剂量组及阳性药组左心室舒张末期的内径和后壁厚度降低(P<0.05),射血分数和短轴缩短率增加(P<0.05);GRP78 mRNA和蛋白水平下调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平降低(P<0.05).结论ICSⅡ可改善SHRs左心室功能,其作用机制可能与改善内质网应激、下调升高的caspase-12信号有关.
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消退素D1抑制NLRP3信号通路对DSS结肠炎小鼠的影响
目的 探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)对实验性结肠炎小鼠肠道炎症的影响及可能机制.方法 将C57BL/6小鼠分为4组,包括正常组、RvD1对照组、葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)模型组、RvD1治疗组.实验结束后,分离小鼠小肠及结肠组织.测量疾病活动指数(DAI),病理学评分(HI),检测髓过氧化物酶(MPO)活性水平,伊文思蓝检测肠黏膜通透性,电镜检测肠上皮细胞连接及细胞因子水平.分析NLRP3炎症小体相关基因表达水平.结果 与正常组小鼠相比,模型组DAI评分、HI评分、MPO活性水平,以及结肠组织匀浆中促炎细胞因子的产生明显增加(P<0.05).RvD1组小鼠上述实验指标明显减低(P<0.05).模型组小鼠结肠组织NLRP3炎症小体表达水平增加(P<0.05);RvD1处理1周,小鼠结肠组织NLRP3通路相关蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 RvD1具有改善DSS结肠炎小鼠肠道炎症的作用,其机制可能与抑制NLRP3炎性体信号通路有关.
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三叉神经痛大鼠三叉神经节中BDNF的表达变化
目的 观察脑源性神经生长因子(brain-derived neuro-tropic factor,BDNF)及其高亲和力受体TrkB在三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)大鼠三叉神经节(trigeminal gangli-on,TG)中的表达变化.方法 TN大鼠模型由眶下神经慢性损伤压迫模型(ION-CCI)制备.♂SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和TN模型组.测定两组大鼠损伤侧机械阈值,应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术和免疫荧光双标技术,检测损伤侧TG中BDNF及TrkB表达变化,并测定损伤侧TG中前炎症因子TNF-α、IL-1β的变化.结果建模2周后,与假手术组相比,TN组的机械痛阈明显下调,TG中BDNF及TrkB较假手术组明显升高,同时前炎症因子TNF-α、IL-1β水平也明显升高(P<0.05).结论 TN状态下,ION-CCI大鼠TG中BDNF及TrkB表达升高,可能参与TN的发病机制,促进了TN的痛觉传递.
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中药化学成分库中结肠癌BRAFV600E抑制剂的筛选
目的 筛选能抑制BRAFV600E CT26细胞株增殖的中药单体化合物.方法 通过慢病毒载体感染,构建BRAFV600E稳定表达的CT26细胞稳转株.MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,蛋白印迹检测MEK/ERK信号通路蛋白表达.Discovery Studio筛选BRAFV600E高亲和中药单体化合物,并用MTT验证化合物抑制细胞增殖效果.结果 与野生型CT26细胞相比,BRAFV600E CT26细胞的增殖和迁移能力明显增强,MEK/ERK通路被进一步激活.芦荟素(aloin)、安格洛苷C(angoroside C)、杯苋甾酮(cyasterone)对BRAFV600E CT26细胞的抑制效果优于野生型CT26细胞(P<0.05),并能明显降低BRAFV600E的蛋白表达.结论 芦荟素、安格洛苷C、杯苋甾酮可能是结肠癌BRAFV600E突变的天然抑制剂.
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菊苣根、茎的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌及 粪肠球菌抑菌差异性研究
目的 研究新疆出产的菊苣根、茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌抑菌效果,为明确菊苣较好的抑菌药效部位提供参考.方法 牛津杯法测定根、茎提取物的抑菌圈直径;倍半稀释法测定根、茎提取物对供试菌的小抑菌浓度(MIC);生长曲线法测定根、茎提取物对供试菌增殖的影响;酶标法测定细菌胞外溶液中碱性磷酸酶(AKP)浓度变化.结果 菊苣根、茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌均有明显抑制增殖的作用;菊苣根对两种菌小抑菌浓度均为64 g·L-1,菊苣茎对两种菌小抑菌浓度分别为50 g·L-1、64 g·L-1;菊苣茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用较好,而菊苣根95％乙醇提取物则对粪肠球菌抑制作用更好;菊苣根乙酸乙酯萃取物对上述两种菌的抑菌效果皆优于95％乙醇提取物(P<0.01).结论 菊苣根、茎95％乙醇提取物均可明显抑制两种菌的增殖,且菊苣茎对金黄色葡萄球菌抑制作用更明显,菊苣根对粪肠球菌抑制效果较好;菊苣根佳抑菌药效为乙酸乙酯萃取部分.
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孕期炎症子代大鼠海马和皮层COX-2通路的改变
目的 观察并探讨孕期炎症子代大鼠海马和皮层环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)及下游产物改变的机制.方法 ♀SD大鼠随机分为对照组和脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)组,LPS组孕鼠在孕期d 11、14、18分别腹腔注射LPS 300μg·kg-1,对照组给予生理盐水.记录子鼠出生后d 3、10、20、30的体质量;d 30采用水迷宫实验、旷场实验和自发活动测试等,检测子鼠神经系统发育情况;采用苏木精-伊红染色,观察脑组织病理学改变;ELISA检测炎性因子的含量;Western blot检测COX-2的蛋白表达.结果 LPS组子鼠的体质量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);LPS组子鼠学习和记忆功能明显受损,水平运动和自发活动明显减少(P<0.05),海马和皮层的神经细胞核固缩明显(P<0.05,P<0.01);LPS组子鼠海马和皮层中PGD2、PGE2、PGI2、TNF-α、IL-6和IL-1β 的含量明显升高(P<0.05,P<0.01);LPS组子鼠海马和皮层中COX-2蛋白水平明显升高(P<0.01).结论 COX-2及下游通路改变可能与孕期炎症致子代大鼠脑损伤的机制有关.
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拮抗内源性孤啡肽可通过下调 microRNA-1途径抑制大鼠再灌注性心律失常
目的 研究内源性孤啡肽(N/OFQ)对大鼠再灌注性心律失常(RA)的影响,以及microRNA-1(miR-1)在其中的作用.方法 将SD大鼠随机分为3组,即假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)及孤啡肽受体拮抗剂(UFP-101)预处理组(U+I/R组),每组8只.通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠缺血/再灌注模型,记录各组大鼠再灌注期间心律失常的发生情况并对其进行评分;采用qRT-PCR法检测miR-1、GJA1及KCNJ2基因表达水平;采用Western blot法检测Cx43、kir2.1蛋白表达情况.结果 拮抗内源性N/OFQ可明显降低大鼠RA及致心律失常评分(P<0.01).qRT-PCR及Western blot结果提示,与Sham组相比,I/R组miR-1表达增多(P<0.01),而Cx43及其mRNA表达下降(P<0.05),kir2.1表达下降(P<0.01);与I/R组比较,U+I/R组miR-1表达下降(P<0.05),Cx43及kir2.1表达增多(P<0.05).结论 内源性N/OFQ可上调miR-1,使Cx43及kir2.1蛋白表达受到抑制,从而导致缺血/再灌注性心律失常.
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红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用
目的 研究红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用,进一步探讨红景天苷抑制补体成分,以及对神经保护的作用机制.方法 CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型,经不同浓度红景天苷作用后,利用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;qPCR检测Egr1、Egr4、C3等mRNA表达;Western blot检测Egr1、Egr4、C3等蛋白表达.PC12细胞低氧损伤后,C3a受体拮抗剂作用并同时给药,检测caspase-3活性、Egr1、Egr4的表达水平;siRNA干扰Egr4表达后,检测caspase-3活性及Bax、Bcl-xl、C3的表达水平.结果 红景天苷能明显降低CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型的caspase-3活性及Bax、C3的蛋白表达,促进Bcl-xl、Egr1、Egr4的蛋白表达;C3a受体拮抗剂作用后,能够抑制caspase-3活性及Egr1、Egr4的表达;siRNA干扰Egr4表达后,能逆转caspase-3活性及Bax、Bcl-xl的表达水平,但对C3作用不明显.结论 红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型具有神经保护作用,与红景天苷抑制补体成分C3,促进Egr4的表达水平,进而抑制细胞凋亡有关.
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VGX-1027抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应
目的 探讨VGX-1027能否抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.方法 将成年健康C57BL/6小鼠随机分为对照组、VGX-1027(50 mg·kg-1)+PBS组、PM2.5组、VGX-1027(12.5 mg·kg-1)+PM2.5组、VGX-1027(25 mg·kg-1)+PM2.5组和VGX-1027(50 mg·kg-1)+PM2.5组.小鼠在鼻腔滴入PBS或PM2.5混悬液(7.8 mg·kg-1)前1 h,腹腔注射PBS或相应剂量的VGX-1027,每天1次,连续2 d.24 h后,测定小鼠气道高反应,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色评估肺部炎症积分,ELISA检测BALF炎性因子水平,Western blot测定肺组织NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NLRP3和caspase-1的表达水平.结果 PM2.5鼻腔滴入引起明显的肺部炎症和气道高反应.12.5 mg·kg-1 VGX-1027不能抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润;而25、50 mg·kg-1的VGX-1027明显抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润,降低BALF中炎症细胞数量和炎性因子的水平;下调NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NL-RP3和caspase-1的表达水平.结论 VGX-1027可抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.
