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  • 卡介苗促进人树突细胞miRNA-99 b调控CD4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg失衡

    作者:甄利波;陈园园;邱美华;金春;陈凌燕;朱敏

    目的 探究牛型结核分枝杆菌减毒活菌-卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染人树突细胞(Dendritic cells,DCs)对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化的作用.方法 使用BCG感染体外培养的人DCs,然后与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞共培养,采用qRT-PCR检测DCs中的miRNA-99b表达水平及CD4+T淋巴细胞中的Foxp3、ROR-γt、IFN-γ及IL-10基因转录水平.利用miRNA-99b反义寡核苷酸转染DCs,与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞共培养后,再次检测CD4+T淋巴细胞相关基因转录水平.采用SPSS 15.0对数据进行分析.结果 BCG感染的DCs中miRNA-99b基因转录水平明显高于未感染BCG的DCs中的转录水平(t=7.06,P<0.05).与感染BCG的DCs共培养的CD4+T淋巴细胞中的IFN-γ基因[(45.61±4.46)比(3.54±1.73),t=32.32,P<0.01]、IL-10基因[(4.17±1.06)比(1.26±0.67),t=2.24,P<0.05]转录水平明显高于与未感染BCG的DCs共培养的CD4+T淋巴细胞,而ROR-γt基因转录水平低于与未感染BCG的DCs共培养的CD4+T淋巴细胞[(0.08±0.02)比(0.63±0.10),t=0.42,P<0.01].与转染NC-siRNA的DCs共培养的CD4+初始T细胞相比,阻断DCs中miRNA-99b的表达后,共培养的CD4+初始T淋巴细胞Foxp3基因[(0.12±0.01)比(1.57±0.90),t=1.06,P<0.05]、IFN-γ基因[(0.03±0.01)比(0.64±0.35),t=0.44,P<0.05]、IL-10基因[(0.03±0.01)比(0.76±0.09),t=0.54,P<0.01]表达均降低,ROR-γt基因表达增加[(17.03±5.51)比(1.32±0.14),t=11.54,P<0.01].结论 BCG通过调控DCs中miRNA-99b的表达进而诱导初始CD4+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡,导致感染的发生、发展.

  • miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力

    作者:马鹏举;汲乾坤;李祥生;常海刚;周文科;金保哲

    目的 研究miRNA -99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制.方法 用re-al-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中 miRNA-99b及mTOR的表达.miRNA-99b 模拟物与野生型或突变型mTOR 3′ UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3′UTR结合.应用real-time PCR法和Western blot检测 miRNA-99b模拟物转染 U251细胞后,细胞中 miRNA-99b、mTOR mRNA 和mTOR 蛋白的表达,Transwell 法检测细胞的侵袭能力.mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化.统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性.结果 脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b 模拟物和野生型 mTOR 3′UTR重组载体共转染的 U251细胞的荧光强度明显降低.miRNA-99b 模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降.改变mTOR表达后,U251细胞中miR-NA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力.Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达 miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组.结论 过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点.

  • m iR-99b在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达

    作者:李连香;于翠革;陈丽宏;杨晓梅

    目的:研究miRNA‐99b(miR‐99b)在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达。方法:宫颈癌患者55例分别于新辅助化疗前后收集肿瘤组织标本行micRNA的提取、反转录、实时定量PCR检测miR‐99b的表达。结果:宫颈癌新辅助化疗后miRNA99b表达显著上升,与治疗前表达比较有统计学差异(P<0.05)。结论:新辅助化疗可通过上调miRNA‐99b表达,实现对宫颈癌的抑制。

  • 长链非编码RNA UCA1与 miRNA-99b在膀胱癌细胞株和膀胱癌组织表达的相关性分析

    作者:谢小娟;潘晶晶;侯慧莲;李旭;陈葳

    目的:验证LncRNA UCA1与miRNA‐99b的相关性。方法:采用荧光定量PCR法检测UCA1和miRNA‐99b在过表达和敲低表达 UCA1的膀胱癌细胞、膀胱癌组织中的表达。结果:在敲低 UCA1表达的膀胱癌细胞5637中,UCA1表达下调60%,而miRNA‐99b的表达上调250%;在过表达UCA1的膀胱癌细胞 UM UC2中,UCA1表达上调410%,而miRNA‐99b的表达下调60%;UCA1在膀胱癌中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),而miRNA‐99b在膀胱癌中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);UCA1与miRNA‐99b在膀胱癌组织中的表达呈负相关(R=‐0.502,P<0.05)。结论:UCA1负向调节miRNA‐99b的表达,但是它对miRNA‐99b的调节在膀胱癌发生发展中的作用机制还需深入研究。

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