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利用液相色谱-质谱联用法同时测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗
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"瘦肉精""β-兴奋剂"如何检测?
"瘦肉精"是一类能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的药物,目前可以起到此作用的物质是一类叫作β-兴奋剂(β肾上腺受体激动剂)的药物.主要包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺以及沙丁胺醇、溴布特罗、溴氯布特罗、马布特罗等β-兴奋剂.但在中国,瘦肉精通常是指盐酸克伦特罗.
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动物组织中莱克多巴胺残留的气相色谱-质谱法测定
β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精".随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β2-兴奋剂的使用逐渐增加.莱克多巴胺(ractopamine)是美国新研制出的一种β2-兴奋剂,1999年12月美国食品与药品管理局(FDA)批准莱克多巴胺可以使用在猪养殖,莱克多巴胺也是欧盟惟一允许使用的β2-兴奋剂.我国也有研制专利报道,莱克多巴胺正作为克伦特罗的替代品被广泛使用.但我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖,目前我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此建立莱克多巴胺的快速、准确的测定方法以适合市场监测十分必要.国内外对β2-兴奋剂测定的方法主要有:酶联免疫法、LC-MS法以及GC-MS法等[1,2],应永飞等[3,4]采用LC法测定饲料、动物组织中莱克多巴胺,Antignac等[5]采用LC-MS测定动物组织、尿样中莱克多巴胺.我们建立了气相色谱-质谱法测定动物组织中莱克多巴胺残留,现将结果报告如下.
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美、加进口猪肉VS莱克多巴胺残留
新闻描述:近日,广东出入境检验检疫部门连续两次从美国进口冻猪肾和加拿大冻猪小排中检出兽药残留--莱克多巴胺.
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HPLC法同时测定肉制品中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗
目的 建立同时检测肉源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗的HPLC测定法.方法 样品经60%乙醇提取后,将碱性提取液加乙醚萃取,然后过弱阳离子交换SPE小柱净化.采用C18色谱柱、以乙腈和pH3的0.01mol/L磷酸二氢钠作流动相,DAD作光谱分析定性.结果 方法 定量准确,线性好,相关系数r>0.999,相对标准偏差(RSD)均<5%,加标回收率在70.8~81.7%之间.结论 本法操作简便,结果准确,可用于同时测定肉制品中的沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗三种β-兴奋剂.
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解读非法食品添加物“瘦肉精”
瘦肉精是什么瘦肉精是肾上腺素受体激动剂类药物的俗称,主要有:盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等7种.由于盐酸克伦特罗是第一种发现可以提高胴体瘦肉率的,并曾被广泛使用,所以通常所说的瘦肉精,指的就是盐酸克伦特罗.
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DAD-FLD串联SPE-HPLC测定肉制品中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗
目的:建立一种高效液相色谱法同时测定肉制品中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗的色谱分离条件和前处理方法.方法:采用HLB固相萃取小柱对样品进行提纯和富集,反相C18柱进行分离,流动相为CH30H∶NaH2PO4(0.1%甲酸)(40∶60),流速0.8ml/min,DAD检测波长为243 nm,荧光检测激发波长为226 nm,发射波长为306 nm.结果:用本方法检测,能很好的分离三种物质.本方法相关系数可达0.999,相对标准偏差为0.75% ~2.01%,回收率在90%~110%之间.结论:本法可同时测定肉制品中的沙丁胺醇、莱克多巴胺和克仑特罗,结果准确、灵敏度高,环境污染小.
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气质联用法同时检测尿及组织中的克伦特罗和莱克多巴胺残留
目的:进一步探讨生物材料及动物肌肉组织中β2-兴奋剂的检测方法,并为药物的安全评价和合理利用提供科学数据.方法:采用气质联用法同时检测动物组织和尿样中的克伦特罗和莱克多巴胺,优化样品前处理条件和检测参数,并根据检测结果推测了莱克多巴胺衍生物可能的裂解机理.结果:采用该方法,克伦特罗和莱克多巴胺的线性关系良好,r2分别为0.9998和0.9966,相对标准偏差RSD分别为5.621%和8.829%,其检出限分别可达到0.1 ppb和4.5 ppb.结论:本文所用方法可完全满足生物材料和组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺同时检测的需要.
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GC-MS法测定动物性食品中15种兴奋剂残留量
目的:建立GC-MS法测定动物性食品中15种兴奋剂残留量的新方法.方法:样品粉碎后经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶水解用乙酸钠缓冲溶液提取,SLW固相萃取柱净化,N,O双(三甲基硅基)三氟乙酰胺+三甲基氯硅烷(BSTFA+ TMCS,99 +1)衍生化.采用选择离子监控模式(SIM)检测,GC/MS测定测定其含量.结果:15种β-兴奋剂不同水平的加标回收率范围为76.2% ~ 101.4%,相对标准偏差为2.65% ~ 9.53%.结论:本方法选择性和灵敏度高,实用性强.
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超高效液相色谱三重四极杆质谱法同时快速测定动物源食品中6种β受体兴奋剂残留
目的:建立简单、快速、同时测定动物源食品中6种β受体兴奋剂残留的超高效液相色谱三重四极杆质谱确证检测方法.方法:1.00 g样品用10 ml含0.1%乙酸的乙腈液一次提取、经5 g无水硫酸钠和10 ml正己烷同时脱水脱脂后,5.0 ml乙腈提取液氮气吹于,残渣溶于1.0 ml 10%甲醇水液,再经2 ml正己烷萃取脱脂,UPLC HSS T3柱超高效液相色谱分离后电喷雾串联质谱法检测,采用正离子方式多反应监测,基体标准定量.结果:加标水平为1.0、5.0和10.0 μg/kg时,盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林和妥洛特罗的回收率在79.4%~124.5%之间.相对标准偏差为1.2%~13.5%(n=5),莱克多巴胺和丙卡特罗回收率在59.2%~124.5%范围内,相对标准偏差为3.7%~20%(n=5).方法的定量限和确证限分别在0.02~1.0 μg/kg和0.10~1.0μg/kg之间.结论:本法快速、准确,操作简单,两位检测人员可在3 h内处理20份已绞碎均质的样品,特别适合大批量样品的快速分析.
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液质联用快速测定饲料中的莱克多巴胺和克伦特罗
目的:建立高效液相色谱电喷雾质谱测定饲料中莱克多巴胺和克伦特罗的方法.方法:采用丙酮提取样品,选用ZOBAX SB C18型色谱柱,流动相 0.02 mol/L 醋酸胺∶乙腈(80∶ 20),通过质谱对样品确证.结果:方法对莱克多巴胺和克伦特罗的平均回收率分别为 76.4% 和 78.5%,方法的低检出限分别为 15.3 μg/kg 和 30.7 μg/kg.结论:本法操作简便,结果准确,可用于测定饲料中莱克多巴胺和克伦特罗的含量.
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莱克多巴胺酶联免疫分析方法的建立
目的:建立莱克多巴胺酶联免疫分析方法.方法:采用混合酸酐法将莱克多巴胺与牛血清白蛋白偶联,并免疫新西兰白兔制备抗莱克多巴胺抗血清.以间接ELISA法测定血清效价,测得抗血清佳工作浓度为1:8000,该抗莱克多巴胺抗血清对克伦特罗、沙丁胺醇等无交叉反应性.结果:在优化的条件下,针对莱克多巴胺的酶联免疫分析方法,低检测限为0.1 ng/ml,其检测范围为0.04~25 ng/ml.结论:该方法快速、简单、准确,可以用于检测食品中莱克多巴胺的残留量.
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液相色谱-质谱联用法测定猪肉组织中3种β-激动剂
目的 建立高灵敏度的猪肉组织中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克伦特罗同时测定的方法.方法 样品匀浆好后用5%高氯酸溶液振荡提取,反相C18小柱净化浓缩,以乙腈-2mmoVL醋酸铵+0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,通过液相色谱-质谱以MRM方式检测,以D3-沙丁胺醇为内标定量. 结果 测定3种β激动剂的方法的线性范围均为0.1~10.0μg/L,线性相关系数分别为0.9998、0.9991和0.9992,定量检出限分别为0.2μg/kg、0.3μg/kg及0.5μg/kg,回收平分别为89.9%~96.7%、84.9%~90.1%及88.4%~96.2%. 结论 方法简便,灵敏度好,选择性好,适合于猪肉组织样品中沙丁胺醇、莱克多巴胺及克伦特罗残留进行检测及结构确证.
关键词: 沙丁胺醇 莱克多巴胺 克伦特罗 酶联免疫法 高效液相色谱质谱联用法:猪肉组织 -
AlphaLISA法同时测定动物组织中克伦特罗和莱克多巴胺
目的:建立同时测定动物组织中克伦特罗(clenbuterol,CLB)和莱克多巴胺(ractopamine,RAC)的纳米均相时间分辨荧光免疫(amplified luminescent proximity homogeneous assay linked immunosorbent assay,AlphaLISA)分析方法.方法:样品经β-葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酯酶和乙酸铵酶解提取,正己烷脱脂,滤膜过滤,滤液与生物素化抗原、抗体、供体微珠和受体微珠进行酶联免疫,AlphaLISA进行检测.结果:CLB和RAC在0.1~50 ng/mL范围内呈良好的线性关系(R2>0.98),检测限为0.02 ng/mL;在5、10、20μg/kg 3个添加水平下CLB+ RAC(1∶1)、CLB和RAC的回收率分别为88.8%~102.8%、86.6%~98.3%和84.2%~103.2%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于12%.结论:该方法快速简单、结果准确可靠,适用于检测和筛选动物组织中的RAC和CLB.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定肌肉组织中6种β-受体激动剂残留
目的:建立检测肌肉组织中6种β-受体激动剂残留的LC - MS/MS方法.方法:样品酶解后,经乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取,固相萃取法净化,以BEH C18(50 mm ×2.1mm,1.7 μm)为分离柱,0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,超高效液相色谱-串联质谱配有电喷雾离子源进行检测.结果:此方法的线性范围为0.25~5 ng·mL-1,线性相关系数 R2≥0.9858,检出限为0.25 μg·kg-1.平均回收率为80.58% ~91.87%,RSD小于5%(n=5).结论:该方法样品前处理简便,灵敏度高,可用于肌肉组织中β-受体激动剂残留的监测.
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7个β-受体激动剂的电喷雾质谱裂解规律研究
目的:对7个β-受体激动剂 (西马特罗、西布特罗、克伦特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇、氯丙那林) 的电喷雾质谱裂解规律进行研究.方法:采用电喷雾正离子化-四极杆飞行时间质谱,碰撞气为高纯氮气,干燥气温度为350℃,干燥气流速10 L·min-1,毛细管出口电压为125 V,对7个不同类型β-受体激动剂进行质谱分析.结果:β-受体激动剂在正离子检测模式下易发生质子化,形成[M+H]+的准分子离子,用高分辨质谱对准分子离子进行碰撞诱导解离,形成特征碎片离子,根据精确质量数对碎片离子进行确证,分析各类β-受体激动剂的裂解规律.结论:本文提出的电喷雾质谱裂解规律可为β-受体激动剂的筛查、确证提供参考.
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UPLC-MS/MS法测定动物源性食品中4个四环素类药物和10个β受体激动剂类药物残留
目的:建立同时测定动物源性食品中4个四环素类药物和10个β受体激动剂类药物残留的新型超高效液相色谱-串联质谱方法.方法:样品用三氯乙酸-乙腈提取并去除蛋白质,然后用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm ×2.1mm,1.7 μm)分离,以0.05%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱(0~10.0 min,3.0% A→90.0% A;10.0 ~ 10.1 min,90.0%A→3.0%A; 10.1 ~ 13.0 min,3.0%A),将待测药物分为多个时间段进行MRM扫描,四环素采用外标法定量,β受体激动剂类药物采用内标法定量.结果:土霉素、金霉素、四环素及强力霉素在5.0~100.0 ng·mL-1范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.990;检出限为2.0 ng·mL-1,定量限为5.0 ng·mL-,10种β受体激动剂在1.0~ 50.0 ng·mL-1范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.990;检出限为0.5 ng·mL-1,定量限为1.0 ng·mL-1.结论:本研究前处理方法简单快捷,质谱采用多时间段MRM扫描方法,灵敏度显著提高,能够高效、灵敏地同时检测动物源性食品中的四环素类和β受体激动剂类药物.
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超高效液相串联质谱法分析牛肉中残留的β-受体激动剂
目的:建立牛肉中9种β-受体激动剂的UPLC-MS/MS分析方法,为食品安全监测提供数据支撑.方法:样品用β-葡萄糖醛苷酶酶解4h,高氯酸沉淀除杂,调节pH后,过MCX固相萃取小柱净化,氮气吹干后甲酸溶液复溶,进行UPLC-MS/MS分析.色谱柱:BEH C18(50mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~1 min,维持5%A;1 ~3 min,5%A线性变化至50%A;3 ~4 min,50%A线性变化至60%A;4~5 min,60%A线性变化至99%A;5~5.5 min,99%A线性变化至5%A;5.5~7.5 min,维持5%A);流速:0.4mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10 μL.结果:9种β-受体激动剂在0.5~10.0 μg·kg-1添加浓度范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9990,较高浓度时回收率范围为62.7% ~ 107.9%,定量下限(LLOQ)规定为添加回收试验中S/N≥10时的低添加浓度,结果均小于0.5μg·kg-1.结论:经方法学验证,本方法专属性好,简便、准确、快速,适用于牛肉中β-受体激动剂的检测.
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莱克多巴胺单克隆抗体的制备及竞争性ELISA检测方法的建立
本研究利用偶联的莱克多巴胺(Rac)作为免疫原,筛选出能稳定分泌针对莱克多巴胺的单克隆抗体的细胞株D1289.其分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgGl.单抗腹水的效价不低于1:1×107,与Rac的类似物克伦特罗不发生交叉反应.在此基础上.利用获得的单抗研究建立Rac的竞争性酶联免疫吸附检测法(cELISA),结果表明:所建立的问接竞争ELISA方法检测校准曲线的线性范围在0.01 ng/mL~10 ng/mL(R2=0.9353).
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超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品4种β-受体激动剂
研究了动物性制品中苯乙醇胺A、莱克多巴胺、克仑特罗、马步特罗残留的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。样品经酶解、PCX固相萃取柱净化浓缩后用C18色谱柱分离,以乙酸铵与乙腈为流动相进行梯度洗脱,串联四极杆质谱检测器检测,内标法定量分析。化合物在0-10μg/kg范围内的标准曲线相关系数均≥0.999,定量检出限均为0.5μg/kg;0.5μg/kg、1.0μg/kg、5.0μg/kg 3个浓度添加水平的回收率为70.2%-119.8%,相对标准偏差为3.8%-19.1%。本方法具有简便快捷、灵敏度高、选择性强,定性准确等特点。
关键词: UPLC-MS/MS 克伦特罗 苯乙醇胺A 莱克多巴胺 β-受体激动剂