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UPLC-MS/MS法测定人血浆中双氯芬酸钠及其代谢物的浓度
目的 建立同时测定人血浆中双氯芬酸钠及其代谢物4’-OH双氯芬酸钠的方法.方法 用蛋白沉淀法处理血浆,色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18,流动相为乙腈-0.06％甲酸水溶液(40:60),流速为0.7 mL· min-1,柱温40℃,离子源为电喷雾离子源,正离子多离子反应监测(MRM)扫描分析.结果 血浆中双氯芬酸钠及其4’-OH双氯芬酸钠线性范围分别为10～3000 ng·mL-1(r=0.998)和10 ～300 ng·mL-1(r=0.997),定量下限均为10 ng·mL-1.提取回收率在95.1％ ～ 102.3％,日内、日间RSD均小于10％.结论 该方法操作简便快速,特异性强,灵敏度高,可用于双氯芬酸钠的药代动力学研究.
关键词： 双氯芬酸钠 4’-OH双氯芬酸钠 超高效液相串联质谱 药代动力学 -
UPLC-MS-MS法测定大鼠血浆中8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚的浓度及其药物动力学研究
8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚是藏药小叶莲中的主要成分,具有较好的抗乳腺癌活性.本文首次建立了快速、灵敏的测定大鼠血浆中8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚浓度的UPLC-MS/MS方法.以8-异戊烯基山柰酚为内标,采用watersACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μmrn),以0.1％甲酸水-乙腈为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min-1,柱温为30℃C.通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,负离子多反应监测(MRM)模式,用于定量分析的离子反应分别为m/z451.30→177.25(8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚)、m/z 353.25→298.15 (8-异戊烯基山柰酚).8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚浓度为0.1-2000 ng/mL时线性关系良好(r=0.9954),高、中、低三个浓度的提取回收率在103％-115％范围内,日内、日间精密度均小于15％,准确度在-6％～15％之间.该方法简单快速灵敏,适用于检测8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚的血药浓度并进行大鼠体内的药物动力学研究.药物动力学试验结果表明,雌性大鼠口服灌胃给药100 mg/kg的8,2'-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚,2小时达到血浆峰浓度,生物半衰期为6.79小时,20小时内能维持一定量的血药浓度,有利于药物在生物体内产生作用.
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UHPLC-MS/MS法测定雷公藤甲素人血浆蛋白结合率
目的 研究雷公藤甲素在人血浆中的蛋白结合率.方法 采用UHPLC-MS/MS法测定透析内液及外液中雷公藤甲素浓度,同时估算其与人血浆的蛋白结合率.结果 雷公藤甲素的线性关系、精密度与准确度、提取回收率和稳定性均符合方法学要求.实验结果表明,雷公藤甲素低、中、高(0.8、0.4、0.2 μg/mL)3个浓度中,雷公藤甲素的人血浆蛋白结合率分别为(88.61±1.45)％、(89.28±2.64)％、(88.67±1.59)％.结论 雷公藤甲素与人血浆具有高强度蛋白结合率.
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17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠体内的组织分布研究
目的 研究17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠体内的组织分布.方法 运用UHPLC-MS/MS法测定尾静脉注射给药后,SD大鼠各器官组织中17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠的量.结果 17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠肾脏含量高,其次是大肠、肝、肺、心、脾和胃.结论 17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠在大鼠体内的组织分布的研究中用甲醇沉淀蛋白处理样品效果优干固相萃取法.
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3种抗菌药物对辛伐他汀在人肝微粒体中代谢的影响
目的 体外研究人肝微粒体中罗红霉素、左氧氟沙星和氟康唑分别对辛伐他汀代谢的影响.方法 分别将罗红霉素、左氧氟沙星、氟康唑与辛伐他汀在人肝微粒体中共孵育,采用UPLC-MS/MS测定辛伐他汀的浓度.结果 罗红霉素和左氧氟沙星对辛伐他汀的代谢没有影响,氟康唑剂量依赖性抑制辛伐他汀的代谢,其IC50值为36.6 μmol·L-1.结论 氟康唑显著抑制辛伐他汀的代谢,罗红霉素与左氧氟沙星对辛伐他汀在人肝微粒体中代谢无明显药物相互作用.
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挥发性离子对试剂应用于固相萃取超高效液相串联质谱法检测动物性食品中的壮观霉素,链霉素,二氢链霉素和新霉素
目的:建立检测动物性食品中的壮观霉素,链霉素,二氢链霉素和新霉素药物残留的方法.方法:偏磷酸提取,C18固相萃取小柱净化浓缩后,使用七氟丁酸离子对试剂作为流动相,UPLC-MS/MS法测定动物性食品中这四种氨基糖苷类.结果:四种氨基糖苷类药物在80 μg/L～ 2000 μg/L浓度范围内呈现良好的线性关系,壮观霉素,链霉素,二氢链霉素方法低定量检测限为8 μg/kg,新霉素方法低定量检测限为16 μg/kg,从100 μg/kg、150 μg/kg和300 μg/kg三个添加浓度检测结果可以看出:方法平均回收率为67％～93％,RSD 0.8％ ～ 9.5％.结论:本方法可以满足国际上食品安全的低限量标准的要求.
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液质联用法同时测定人血清中5种非典型抗精神病药物浓度
目的:建立一种快速、准确的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),用于临床上测定人血清中氯氮平、N-去甲基氯氮平、喹硫平、阿立哌唑及齐拉西酮5种常用的非典型抗精神病药物的血药浓度.方法:以氯氮平-d3、喹硫平-d8、阿立哌唑-d8和齐拉西酮-d8稳定同位素为内标,血清样品经过前处理后采用UPLC-MS/MS对上清液进行分析.结果:空白血清对药物的检测无干扰,氯氮平、N-去甲基氯氮平、喹硫平、阿立哌唑及齐拉西酮在1.00～l 000 μg/L范围内线性良好,相关系数r＞0.9988;日内、日间精密度(RSD)均小于15％,回收率90％～110％;样品在室温12 h、4℃冰箱48 h、自动进样器24h及反复冻融3次的情况下都能保持稳定.结论:本方法前处理操作简单,能够快速、准确、高通量地检测所选择的5种非典型抗精神病药物的血药浓度.
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UPLC-MS/MS法分析10种不同蜜源蜂蜜中的黄酮类组分
目的:建立超高效液相色谱质谱分析方法,比较不同蜜源蜂蜜中黄酮类组分的区别.方法:不同蜜源蜂蜜经D101型大孔吸附树脂提取纯化后采用UPLC-MS/MS进行分析.色谱柱采用Inertsil ODS-3柱(2.1 mm×75 mm,2μm),以甲醇-0.02％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,柱温40℃;以儿茶素、表儿茶素、芦丁、芸香柚皮苷、桑黄素、杨梅素、山柰酚、生松素等16个黄酮类对照品作为对照,采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)进行分析.结果:儿茶素、表儿茶素、芸香柚皮苷、芦丁、桑黄素、杨梅素、柚皮素、槲皮素、染料木素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、生松素、汉黄芩素、白杨素和高良姜素的质量浓度分别在0.835～83.5 μg·mL-1(r=0.998 5)、0.562～22.48 μg·mL-1(r=0.999 0)、0.095 2～4.76μg· mL-1(r=0.995 5)、0.052 2～1.307 μg· mL-1(r=0.998 0)、1.608～40.2 μg·mL-1(r=0.997 0)、0.45～9.0μg· mL-1(r=0.998 5)、0.006 9～0.69 μg· mL-1(r=0.999 5)、0.022 5～4.498 μg· mL-1(r=0.999 5)、0.0406～4.055 μg·mL-1(r=0.999 5)、0.073 3～3.665 μg·mL-1(r=0.999 5)、3.26～32.6μg·mL-1(r=0.996 5)、0.0214～1.072 μg· mL-1(r=0.999 0)、0.047 2～1.18 μg· mL-1(r=0.998 5)、0.001 4～0.353 μg· mL-1(r=0.999 5)、0.058～2.925μg·mL-1(r=0.999 5)、0.222 4～11.12 μg·mL-1(r=0.997 5)范围内与峰面积呈良好的线性关系,提取回收率分别为2.7％、3.8％、0.26％、0.00％、70.6％、59.3％、83.0％、87.8％、83.4％、81.1％、93.3％、89.9％、86.1％、95.9％、89.8和93.3％,基质效应(n=5)在94.29％～115.72％之间,18h内基本稳定,其中杨梅素6h内稳定(RSD=2.3％).不同蜜源蜂蜜之间黄酮类组分及其含量有一定程度的差异.如洋槐蜜中槲皮素、白杨素、生松素和山柰酚为主,木犀草素、染料木素、汉黄芩素等为辅;柑橘蜜中以槲皮素、山柰酚、高良姜素和汉黄芩素为主,木犀草素和芹菜素为辅;油菜蜜中以山柰酚和槲皮素为主,白杨素、生松素、柚皮素、染料木素、木犀草素和汉黄芩素等为辅等.某些化合物有可能成为蜂蜜中的潜在标志组分,如洋槐蜜中的染料木素及柑橘蜜中的汉黄芩素,与其他蜜源蜂蜜中的组分含量相比,具有含量占比高或蜂蜜和蜜源花中均有等特点.结论:该方法选择性强,灵敏度高,所得结果准确可靠,同时有助于单花蜜蜜源来源的鉴定.
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超高效液相串联质谱法分析牛肉中残留的β-受体激动剂
目的:建立牛肉中9种β-受体激动剂的UPLC-MS/MS分析方法,为食品安全监测提供数据支撑.方法:样品用β-葡萄糖醛苷酶酶解4h,高氯酸沉淀除杂,调节pH后,过MCX固相萃取小柱净化,氮气吹干后甲酸溶液复溶,进行UPLC-MS/MS分析.色谱柱:BEH C18(50mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:0.1％甲酸乙腈溶液(A)-0.1％甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0～1 min,维持5％A;1 ～3 min,5％A线性变化至50％A;3 ～4 min,50％A线性变化至60％A;4～5 min,60％A线性变化至99％A;5～5.5 min,99％A线性变化至5％A;5.5～7.5 min,维持5％A);流速:0.4mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10 μL.结果:9种β-受体激动剂在0.5～10.0 μg·kg-1添加浓度范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9990,较高浓度时回收率范围为62.7％ ～ 107.9％,定量下限(LLOQ)规定为添加回收试验中S/N≥10时的低添加浓度,结果均小于0.5μg·kg-1.结论:经方法学验证,本方法专属性好,简便、准确、快速,适用于牛肉中β-受体激动剂的检测.
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人肝微粒体中氯吡格雷及其代谢产物药物浓度测定方法建立及应用
目的:建立测定人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其活性代谢产物(AM)和非活性代谢产物(CCAM)药物浓度的检测方法,并将其应用于氯吡格雷的体外代谢研究.方法:AM含有巯基,需用衍生化试剂2-溴-3'-甲氧基苯乙酮(MPB)将肝微粒体孵育体系中的AM衍生化成MP-AM进行测定.分别采用蛋白沉淀法和液液萃取法处理人肝微粒体孵育体系样品,测定氯吡格雷原药及MP-AM和CCAM药物浓度.氯吡格雷原药浓度的测定在HPLC仪上进行,采用Accurasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(磷酸调pH 2.85)(22∶ 78),流速1 mL·min-1,检测波长235 nm;MP-AM和CCAM的浓度测定在UPLC-MS/MS仪上进行,采用Thermo C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸卜水(含0.1％甲酸)(9∶1),流速200 μμL·min-1,正离子模式多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为MP-AM m/z503.6→353.8,CCAM m/z 307.7→197.8,内标氯雷他定m/z 382.8→336.9.结果:人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷,MP-AM和CCAM线性范围分别为0.5～ 200 μmol·L-1、1～200 ng·mL-1和10 ～2 000 ng ·mL-1,定量下限分别为0.5μmol·L-、1 ng·mL-1和10 ng·mL-1,回收率分别在95.4％～ 98.8％、59.4％～73.4％和54.8％ ～ 72.8％之间,氯吡格雷原药的批内、批间精密度RSD均小于9.4％,MP-AM的批内、批间精密度RSD均小于11.4％,CCAM的批内、批间变异均小于9.7％.内标氯雷他定的回收率分别为96.7％和66.7％.稳定性试验中,在各种贮存条件下氯吡格雷、MP-AM和CCAM均稳定性良好.CCAM生成的酶促反应动力学参数Km值为(15.86±1.83) μmol·L-1,Vmax值为(620.2-19.74) pmol·min-1·mg-1,Clint值为(39.15±2.06)μμL ·min-1·mg-1;AM生成开始随着底物浓度的增加而增加,在底物浓度为20 μmol·L-1时其生成量达到大,随后随着底物浓度的增加其生成量反而降低.结论:所建立的测定方法操作简便快速,重复性好,特异性强,灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其AM和CCAM药物浓度的测定.
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UPLC-MS/MS法测定吸毒者头发中10种毒品代谢物的含量
目的:建立快速、准确的UPLC-MS/MS方法测定人头发中残留的海洛因、冰毒、摇头丸、苯环己哌啶、美沙酮、可尤因、氯胺酮等10种毒品.方法:头发样品经清洗、剪碎,甲醇-乙腈-2 mmol·L-1甲酸铵溶液(25∶25∶50),超声提取,5种同位素内标物,采用ZorbaxECLIPSE Plus C18(2.1 mm×50mm,1.8 μm)色谱柱,0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水为流动相,流速0.35mL·min-1梯度洗脱,质谱采用ESI+离子源,MRM监测模式,检测6-乙酰基吗啡、吗啡、可待因、甲基安非他明、亚甲二氧基甲基苯丙胺、亚甲二氧基乙基苯丙胺、亚甲二氧基苯丙胺、苯环己哌啶、美沙酮、苯甲酰爱康宁、可卡因、去甲可卡因、古柯乙烯、去甲氯胺桐、氯胺酮、6-乙酰基吗啡,16种化合物的定量离子对和定性离子对.结果:16种化合物在2～1000ng·mL-1浓度范围内线性良好,日间和日内精密度RSD均小于14.6％,回收率在83.3％～110％.结论:本方法可用于吸毒者头发中残留的10种毒品代谢物的含量测定.
