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生物样品测定分析方法中提取回收率的探讨
目的:验证提取回收率的范围限定是否应当列入生物样品测定方法学规范中.方法:以芍药苷为代表药物,大鼠血浆为基质,分别采用蛋白沉淀法(PP)和固相萃取法(SPE)进行生物样品的前处理,对所得的精密度、准确度和提取回收率3个主要指标进行数据分析,并进行口服给药后大鼠体内芍药苷药时曲线的测定.结果:不同前处理方法所得的样品,在精密度、准确度两项指标上并无数理统计差异,提取回收率存在显著差异,但对大鼠口服芍药苷的药动学指标检测并无影响,两种方法均测得芍药苷均在30min有大吸收,Cmax-P=(597.49±58.90) ng/mL,Cmax-SPE=(615.50±22.52) ng/mL.结论:在药物研发中,根据被测药物的浓度、基质效应的影响,合理选择前处理方法,而不将提取回收率限定范围作为方法学确证的判断指标是值得提倡的环保经济的研究原则.
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LC-MS方法测定家兔阴道放置米非司酮缓释阴道环后的血药浓度
目的:建立一种简便、快速的液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法,用于家兔阴道放置米非司酮缓释阴道环后的血药浓度检测.方法:将待测血浆经乙腈沉淀后,采用LC-MS进行检测,以炔诺孕酮为内标.色谱柱:Waters Symmetry C18柱(150 mm ×2.1 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(82∶ 18)(含0.5％甲酸),流速:0.3 mL·min-1;质谱采用电喷雾离子化(ESI)方式和选择性离子检测模式(SIM),检测离子为正离子.用于定量分析的检测离子为米非司酮m/z 430.3和炔诺孕酮m/z 313.5.结果:本方法的线性范围为5～ 500ng· mL-,定量下限为5 ng·mL-1,准确度、精密度以及稳定性均符合有关要求.结论:该方法简便、准确、灵敏度高、专属性强,且血浆用量少,适合家兔血浆中米非司酮的测定.
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血液中类固醇激素分析方法的研究进展
内源性类固醇激素作为内分泌系统重要的组成成分,在机体发育、免疫调节及生育控制方面均起着不可或缺的作用.类固醇激素水平的准确测定对于临床内分泌疾病的预防、诊断及治疗十分重要.近年来生物体内源性类固醇激素的测定在临床应用中越来越广泛.主要针对2013-2018年典型的血液中类固醇激素常用的分析方法进行归纳对比,以期为类固醇激素水平的准确测定提供更多的思路,也为后期临床诊断治疗提供更加准确的依据.
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HPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中26种胆汁酸
目的:建立HPLC-MS/MS法同时定量检测大鼠血浆中26种胆汁酸的浓度.方法:大鼠血浆采用蛋白沉淀法处理,26种胆汁酸使用Symmetry C18色谱柱分离.流动相为水(0.1％甲酸+10 mmol· L-1乙酸铵)-甲醇(0.1％甲酸+10 mmol·L-1乙酸铵),梯度洗脱,流速0.15 mL· min-l,检测时间50 min.检测系统采用电喷雾离子源,负离子模式.结果:26种胆汁酸线性关系良好且色谱峰互不干扰,定量下限为0.010～0.200 μmol·L-1,日内、日间回收率均在85.9％～ 113.8％之间,精密度均在2.0％～13.3％之间,提取回收率在65.7％～104.5％之间.正常SD大鼠血浆中26种胆汁酸浓度范围为0.0192～2.83 μmol· L-1,其中猪去氧胆酸(HDCA)、去氧胆酸(DCA)、胆酸(CA)、甘氨胆酸(GCA)、β-鼠胆酸(β-MCA)和甘氨脱氧胆酸(GDCA)是SD大鼠血浆中的主要胆汁酸.结论:该方法准确有效,灵敏度高,操作简单,可在50 min内同时检测大鼠血浆中26种胆汁酸,并可为其他生物基质中的胆汁酸检测方法提供参考.
关键词： 胆汁酸 大鼠血浆 方法学验证 高效液相色谱-质谱联用 蛋白沉淀法 -
人肝微粒体中氯吡格雷及其代谢产物药物浓度测定方法建立及应用
目的:建立测定人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其活性代谢产物(AM)和非活性代谢产物(CCAM)药物浓度的检测方法,并将其应用于氯吡格雷的体外代谢研究.方法:AM含有巯基,需用衍生化试剂2-溴-3'-甲氧基苯乙酮(MPB)将肝微粒体孵育体系中的AM衍生化成MP-AM进行测定.分别采用蛋白沉淀法和液液萃取法处理人肝微粒体孵育体系样品,测定氯吡格雷原药及MP-AM和CCAM药物浓度.氯吡格雷原药浓度的测定在HPLC仪上进行,采用Accurasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(磷酸调pH 2.85)(22∶ 78),流速1 mL·min-1,检测波长235 nm;MP-AM和CCAM的浓度测定在UPLC-MS/MS仪上进行,采用Thermo C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸卜水(含0.1％甲酸)(9∶1),流速200 μμL·min-1,正离子模式多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为MP-AM m/z503.6→353.8,CCAM m/z 307.7→197.8,内标氯雷他定m/z 382.8→336.9.结果:人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷,MP-AM和CCAM线性范围分别为0.5～ 200 μmol·L-1、1～200 ng·mL-1和10 ～2 000 ng ·mL-1,定量下限分别为0.5μmol·L-、1 ng·mL-1和10 ng·mL-1,回收率分别在95.4％～ 98.8％、59.4％～73.4％和54.8％ ～ 72.8％之间,氯吡格雷原药的批内、批间精密度RSD均小于9.4％,MP-AM的批内、批间精密度RSD均小于11.4％,CCAM的批内、批间变异均小于9.7％.内标氯雷他定的回收率分别为96.7％和66.7％.稳定性试验中,在各种贮存条件下氯吡格雷、MP-AM和CCAM均稳定性良好.CCAM生成的酶促反应动力学参数Km值为(15.86±1.83) μmol·L-1,Vmax值为(620.2-19.74) pmol·min-1·mg-1,Clint值为(39.15±2.06)μμL ·min-1·mg-1;AM生成开始随着底物浓度的增加而增加,在底物浓度为20 μmol·L-1时其生成量达到大,随后随着底物浓度的增加其生成量反而降低.结论:所建立的测定方法操作简便快速,重复性好,特异性强,灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其AM和CCAM药物浓度的测定.
