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质谱联用技术在生物样品分析中的应用
质谱分析具有分析范围广、灵敏度高、样品用量少、分析速度快、重复性好、操作简易、损耗低、分离与鉴定可同时进行等优点,已广泛应用于环境科学、能源化工、生物医药等领域.本文综述了近 3 年国内外关于质谱联用技术在生物样品分析中应用的文献,并着重介绍了质谱技术在药物代谢动力学和生物等效性、毒代动力学、药代动力学-药效学、群体药代动力学、药物及代谢物结构确证与裂解规律和代谢组学中的应用,以期为生物样品分析的进一步发展提供参考.
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生物样品分析中基质效应和准确度的确定
在生物样品分析中,除了被分析药物本身高活性和高度不稳定性等因素造成的问题之外,生物样品中基质效应的存在也会使生物样品分析的复杂性和难度加大.目前人们通常采用加样回收的方法考察生物样品分析方法的准确度.如果分析方法准确度不合格,所得到的数据也是无意义的,但一些作者并没有充分认识到准确度的重要性.本文主要通过引用国际权威机构的分析方法验证指南以及国内新版药物分析教科书中有关内容对准确度进行阐述.值得注意的是,在药代动力学研究中,血清中药物测定数据的准确性以及是否可用取决于回收率结果是否合乎要求,但关于药物在生物体内的分布问题上,即使采用加样回收方法也不一定能保证数据是准确的.
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高效液相色谱质谱联用检测血浆莎巴比星的基质效应影响因素
目的:考察EDTA-K2和肝素锂抗凝血浆不同前处理方法和液相条件对于高效液相色谱质谱联用法检测莎巴比星及其代谢产物M3基质效应的影响.方法:以含不同抗凝剂的空白血浆配制低、中、高浓度样品,乙酸乙酯或氯仿液液萃取,流动相:A:0.1％甲酸水,B:乙腈,等度洗脱或梯度洗脱.莎巴比星、M3和内标多柔比星检测离子对分别为:m/z 644→130,m/z 646→333.2,m/z 544→360.采用提取后加入法,评价各浓度莎巴比星和M3在2种抗凝剂血浆中基质效应的差异以及方法优化对基质效应的影响.结果:低浓度时,EDTA-K2组莎巴比星和M3基质效应分别为123％和110％,肝素锂组分别为143％和160％.基质效应在不同抗凝剂组间差异有统计学意义(莎巴比星:P ＜0.05;M3:P ＜0.05).氯仿萃取肝素锂抗凝血浆中莎巴比星低、中、高浓度基质效应分别为142％,94％和78％,M3分别为123％,102％和89％.梯度洗脱莎巴比星低、中、高浓度基质效应分别为108％,81％和73％,而M3分别为93％,83％和73％.终低浓度莎巴比星和M3基质效应分别为85.4％和98.7％,高浓度分别为88.5％和96.0％.结论:肝素锂抗凝血浆中莎巴比星及其代谢物M3的基质增强效应更强,且在不同浓度存在较大差异,优化前处理方法以及液相方法后基质效应得到显著改善.
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HPLC体内药物分析:问题与对策
1问题HPLC主要是一门实验科学,色谱分离条件的优化是色谱技术应用中面临的主要问题.如在生物样品分析中,如何避开常见内源性物质、临床联合用药和代谢产物对被测药物的干扰?这是选择一个良好的色谱条件、预处理条件和优化内标物工作中至关重要的问题.
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高效液相色谱法在合成药物及生物样品分析中的应用(二)
1 HPLC在合成药分析中的应用高压液相色谱法由于具有分离效能高,分析速度快,方法重现性好,适用的样品类型广泛等优点,近几年来被广泛应用在合成药的质量控制方面.现将近年来对合成药的分析及其技术条件列于表1中.
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LC-MS法测定人血浆中盐酸莫索尼定的浓度及其制剂的药动学和生物等效性研究
盐酸莫索尼定(Moxonidine hydrochloride)为第二代中枢抗高血压药物,它主要作用于延髓外侧头端的I1咪唑啉受体,通过抑制外周交感神经活性而产生降压作用.本研究建立了测定人血浆中莫索尼定的LC-MS方法,操作简便,灵敏度高,线性范围0.019 76～9.88 μg/L.实验结果表明方法学符合生物样品分析要求.通过测定血浆中盐酸莫索尼定的浓度,观察受试和参比的2种制剂的血药浓度经时过程,估算相应的药代动力学参数.结果表明2种盐酸莫索尼定制剂的药代动力学参数相近.其cmax、AUC0-τ、AUC0-∞经对数转换后先进行方差分析,再进行双单侧t检验.双单侧t检验结果表明:2种制剂的上述3个参数生物等效,tmax经非参数法检验无显著性差异(P>0.05),因此受试和参比制剂生物等效.
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现代质谱法在药物代谢动力学研究中的应用
就现代质谱法在药物代谢物的结构鉴定与定量分析、体内药动学高通量筛选和药物生物利用度的测定等药物代谢动力学方面进行了综述,指出现代质谱法在药动学研究中有广阔的应用前景.
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串联质谱在生物样品手性药物立体选择性定量测定中的应用
液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的选择性和灵敏度较高,广泛应用于直接拆分或定量测定生物样品中的手性药物.超临界流体色谱(SFC)因其在质谱兼容和分析速度方面优于液相色谱,使得SFC-MS/MS成为一种新的手性药物立体选择性定量测定技术.本文综述了LC-MS/MS法和SFC-MS/MS法在生物样品手性药物立体选择性定量测定中的应用.
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直接进样液相色谱法在生物样品分析中的应用
生物样品基质复杂,在色谱分析前先要除去其中的蛋白质等大分子物质,以免损害色谱柱.常用的前处理方法多为离线操作,耗时费力,还会造成样品损失和污染,而直接进样的方法能减少前处理步骤,并能有效预浓缩和净化生物样品.这一过程可以通过柱切换技术实现自动化,尽可能地减少了生物样品的前处理步骤和潜在的样品污染,提高方法的重现性.本文对目前生物样品的液相色谱分析方法中样品自动化处理的进展进行了综述.具体集中于直接进样技术,如限进性填料和其他自动化在线固相萃取过程,还包括新兴的对样品更具选择性的自动化萃取相技术,如分子印迹聚合物.并对这些方法和潜在的应用前景进行了简要讨论.
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生物样品分析中两台仪器之间的交叉验证
目的:明确交叉验证在生物样品分析测试中的必要性,建立生物样品分析中两台分析测试仪器之间交叉验证的操作规程.方法:参阅国际上有关方法学确证的指导原则及文献,通过一定数量的外标样品和给药后样品在两台分析测试仪器上的分析结果,经过统计,判定是否符合交叉验证的可接受标准.结果:本实验中通过对28个样本量的样品分析,双机测试的结果符合标准,双机测试的数据可以合并使用.结论:生物样品分析中,需要双机测试结果数据合并的时候,需要进行交叉确证.
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固相萃取-高效液相色谱法在生物样品分析中的应用与进展
目的:综述固相萃取-高效液相色谱法在生物样品分析中的应用.方法:查阅关于固相萃取-高效液相色谱法的国内外文献.结果:从SPE的填料、SPE-HPLC技术及其自动化、SPE操作的影响因素、SPE-HPLC在生物样品分析中的应用等方面进行了概括.结论:SPE-HPLC技术在生物样品分析中巳得到广泛应用,适合于生物样品的分析.SPE-HPLC技术的应用促进了生物样品分析的研究.
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生物样品分析方法验证中的交叉验证
目的:明确交叉验证在生物样品分析方法中的作用、地位和必要性.方法:参阅国际上有关方法学验证的指导原则及文献,总结分析方法交叉验证在生物样品分析中的重要性和必要性,并通过实例建立不同实验室生物样品分析中的交叉验证流程,探讨现有操作流程的局限性.结果与结论:交叉验证结果表明,不同实验室的分析结果存在一定差异,但是符合可接受标准.交叉验证在生物样品分析中具有重要意义,需要得到重视并建立完善的操作流程及考核标准.
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液相微萃取及其在生物样品分析中的应用
液相微萃取(LPME)是一种新型的样品前处理方法,该方法集采样、萃取、浓缩于一体,操作简单,且还具有快捷、廉价、富集效果好等特点,另外,它所需要的有机溶剂非常少,是一种环境友好的样品前处理新方法.本文介绍了该方法的发展概况和当前国内外所采用的主要萃取模式.综述了这种新型样品前处理方法近年在生物样品分析中的应用.
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HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中麻醉椒苦素的浓度及其药动学研究
目的:建立大鼠血浆中卡瓦内酯麻醉椒苦素的液相色谱质谱联用定量分析方法,并用于大鼠体内药物动力学研究.方法:采用Waters Symmetry Shield C8(3.0 mm×150 mm,5.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液(60∶40,v/v).三重四极杆质谱仪进行多反应监测(MRM)模式,电喷雾离子源(ESI)正离子检测.生物样品预处理采用乙酸乙酯液-液萃取,考察麻醉椒苦素灌胃给药后,大鼠体内药物动力学特征.结果:在大鼠血浆中麻醉椒苦素浓度与峰面积比呈良好线性关系(r=0.9998),线性范围为10 ～20000 μg·L-1,定量下限为10 μg·L-1,样品分析时间为5.5 min.日内、日间精密度(RSD)均小于5.3％,准确度在±10.3％之内.SD大鼠灌胃给药麻醉椒苦素120mg· kg-1后,平均血药峰浓度为8.92 mg·L-1,血药浓度达峰时间平均为4.00h.结论:所建立的HPLC-MS/MS定量分析方法特异、快速、灵敏,可用于麻醉椒苦素临床前药物动力学研究.
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LC-MS/MS法测定氢溴酸东莨菪碱在大鼠体内的组织分布
目的:研究氢溴酸东莨菪碱在大鼠体内各组织的分布特点.方法:液相色谱分离采用C18(3.0 mm× 100 mm,3.5 μm)色谱柱,甲醇-2 mmol·L-1甲酸铵溶液(40∶60,甲酸调pH至3.52)为流动相,流速0.4 mL·min-1；质谱检测采用ESI离子源,正离子MRM方式检测.采取大鼠灌胃给药,运用液相色谱-质谱/质谱法测定氢溴酸东莨菪碱在大鼠各个组织中的药物浓度.结果:氢溴酸东莨菪碱在各个组织中的一定浓度范围内线性关系良好,各个组织中低、中、高浓度氢溴酸东莨菪碱的回收率及精密度均符合方法学要求.氢溴酸东莨菪碱在体内分布广泛,以脾、肝、肺中分布较高.结论:本方法简便、准确,灵敏度高,可用于氢溴酸东莨菪碱的体内分析研究.
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LC-MS/MS法测定人血浆中非洛地平的浓度
目的:建立人血浆中非洛地平浓度的LC - MS/MS测定方法,并将其应用于临床试验中非洛地平血药浓度的测定.方法:以尼莫地平为内标,人血浆样品经乙醚-正己烷(1∶1,v/v)萃取处理后,进行LC - MS/MS分析.采用Hypersil BOS - C18(150 mm ×2.1 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(12∶88,v/v)；使用电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测(MRM)模式检测,用于定量分析的非洛地平和内标尼莫地平的监测离子分别为m/z384.1→338.0和m/z419.0-301.1.结果:4.5 min完成1次分析,血浆内源性物质对测定无干扰,非洛地平在0.1038～10.38μg·L-1浓度范围内线性关系良好(r2 ＞0.99),定量下限为0.1038 μg·L-1,批内精密度(RSD)不大于9.6％,批间精密度(RSD)不大于10.4％.非洛地平与内标化合物的平均提取回收率分别为99.4％和103.5％,平均基质效应分别为110.1％和108.4％,且均不存在显著浓度依赖性.结论:本文所建立的方法准确快速,灵敏度高,专属性强,可用于临床试验中非洛地平制剂低剂量给药后非洛地平血药浓度的测定.
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反相高效液相色谱法测定隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中两性霉素B的含量
目的:建立反相高效液相色谱法测定人脑脊液中两性霉素B,并用于隐球菌性脑膜炎患者脑脊液样品的测定.方法:采用Agilent C18(5 μm,4.6 mm ×250 mm)色谱柱,流动相为0.005 mol·L-1乙二胺四乙酸二钠-甲醇(21:79),流速1.0 mL·min -1,检测波长380 nm,室温下进样20μL.结果:由于患者脑脊液中药物的含量测定范围较大,故采用2个浓度线性范围:1.25 ～30 μg·mL-1(r =0.9999),高、中、低3种浓度的平均回收率为94.9％,日内RSD≤1.38％,日间RSD≤2.67％；0.11～5μg·mL-1(r =0.9999),高、中、低3种浓度的平均回收率为93.1％,日内RSD≤1.73％,日间RSD≤4.09％.结论:本法灵敏度高,重现性好,专属性强,可用于椎管内持续给予两性霉素B的临床药代动力学研究及脑脊液中该药物浓度的临床检测.
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LC/MS测定中生物样品的基质效应问题
基质效应是指在LC/MS测定中,色谱分离时共洗脱的物质改变了待测成分的离子化效率,所引起的信号的抑制或提高.由于生物样品中存在大量内源性干扰物质,基质效应的影响更为显著.本文对生物样品LC/MS分析测定中基质效应产生的机制、测定基质效应的方法、减小基质效应的措施以及在方法学验证中如何考察基质效应进行了综述.
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电感耦合等离子质谱在药物分析中的应用
电感耦合等离子质谱是一种常用的元素分析方法,具有检出限低、准确度高、动态线性范围宽且多种元素同时测定等优点,在药物分析领域的应用中发挥着重要作用.本文综述了近年来电感耦合等离子质谱在药物分析中的应用现状,主要包括微量元素含量测定、有害重金属元素分析、元素形态分析、药物代谢和药物动力学研究、生物样品分析、药品质量控制等方面,并对这一分析方法作了展望.
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LC-MS/MS生物分析中试验样品再分析失败后的调查和解决方案
试验样品再分析(ISR)如今已普遍用于法规依从的生物分析实验室,是评估生物分析方法的重现性、可靠性和准确度的基本措施之一.虽然统计数据显示,LC-MS/MS生物分析中95％以上的ISR符合接受标准,然而失败时依然值得进行充分的科学调查与评估,以发现其根本原因.本文从稳定性问题、人为因素、样品处理过程、方法固有缺陷等方面对小分子化学药物的ISR失败原因进行分类分析,并举例讨论ISR影响因素及改进措施,列出ISR失败后需查根溯源,重测ISR,撰写调查报告并分享讨论等调查流程,并就如何降低ISR失败率提出法规依从,充分了解化合物特性,使用真实样品考察稳定性的解决方案,后对其前景进行展望.
