首页 > 文献资料
-
复合重组人骨形成蛋白治疗剂治疗牙根尖周病的实验研究
骨形成蛋白是具有骨诱导作用的生物活性因子,但单独应用有局限性,我们将复合重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP-2)牙髓根尖周病治疗剂(rhBMP-2治疗剂)作为根尖屏障材料,用于狗牙实验性根尖周病的治疗,以期缩短疗程提高愈合质量,并为临床应用提供理论依据.
-
重组人骨形成蛋白-2成熟肽对急性放射病小鼠股骨造血间质功能的影响
造血干细胞的增殖、分化不仅依赖于干细胞本身,而且依赖于造血微环境即造血间质结构和功能的完善.我们[1]曾报道重组人骨形成蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m)对受照小鼠造血损伤有治疗作用,但它究竟是作用于造血干细胞或是作用于造血间质细胞或两者兼而有之未见报道.笔者研究目的是利用皮下移植股骨法[2]观察骨形成蛋白(BMP)对受照小鼠股骨造血干细胞和造血间质细胞功能的影响.
-
携载BMP-2的PLGA缓释微球的制备及其成骨活性的研究
目的 以聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)制备新型缓释载药微球,携载骨生长因子2(BMP-2),研究其物理学特性以及在体内、体外对成骨的影响.方法 采用复合复乳法制备载有BMP-2的PLGA缓释微球,检测形态、粒径、载药率、包封率、释药规律.观察其在体外环境下对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化的影响,观察其在小鼠股部肌肉内异位成骨的情况.结果 缓释微球的表面光滑,平均粒径为(242.2±31.3) μm,正态分布,微球的体外释药规律符合双相动力学释药规律.随着微球缓释量的增加,携载BMP-2的微球组细胞增殖明显加快(P<0.05),BMP-2介导的BMSCs增殖呈浓度依赖性升高(P<0.05).微球体内成骨效果明显,4周后可见大量的骨小梁,并有骨髓腔形成.结论 携载BMP-2的PLGA缓释微球具有良好的载药特性,可明显促进BMSCs增殖、分化、提高成骨活性.在骨组织工程研究中具有广阔的应用前景.
-
重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒载体体外诱导成骨作用的初步研究
目的 观察重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP4)基因腺相关病毒载体诱导免骨髓间充质千细胞(BMSCs)成骨方向分化的作用.方法 全骨髓法培养兔BMSCs,应用重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒MOI值为5×104vg/cell转染兔BMSCs,观察细胞形态,行ALP染色、Von Kossa染色、茜素红染色及ALP含量测定,观察成骨活性.结果 AAV-hBMP4转染BMSCs后,细胞形态呈现典型的成骨改变,ALP染色及Von Kossa、染色茜素红染色均出现成骨的特征性改变.细胞上清ALP含量测定,实验组ALP含量明显增高(P<0.01).结论 实验获得的病毒栽体滴度高、感染性好,完全可以满足骨组织工程的需要.AAV-hBMP4转染效率高,AAV-hBMP4转染BMSCs后,BMSCs表现明显的成骨活性改变.
-
骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用
骨髓基质细胞具有多向分化潜能,在特定培养条件下可转化成多种间充质细胞.骨组织工程中为提高成骨效率,必须选择合适的培养条件,以促进骨髓基质细胞繁殖及定向分化为成骨细胞.本实验旨在观察重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)分别和联合作用条件下,对人骨髓基质细胞增殖与分化的影响,以期建立一种理想的培养体系.
-
人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外诱导成骨的比较
背景:由于骨形成蛋白的释放速度与新骨生长速度不匹配,单纯应用骨形成蛋白的效果尚不理想,因此,应有合适的载体来调节骨形成蛋白的释放速度.目的:观察重组人骨形成蛋白4基因腺相关病毒及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用.方法:全骨髓法培养兔骨髓间充质干细胞,分别应用人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒载体及绿色荧光蛋白基因腺相关病毒转染兔骨髓间充质干细胞,设定感染复数值为5×104,观察两组细胞形态改变,分别行碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素红染色及碱性磷酸酶含量测定,比较两组成骨活性差异.结果与结论:人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组转染骨髓间充质干细胞后,细胞形态呈现典型的成骨改变,碱性磷酸酶染色及Von Kossa染色、茜素红染色均出现成骨的特征性改变.绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组未观察到上述改变.人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒组碱性磷酸酶含量高于绿色荧光蛋白基因腺相关病毒组(P<0.01).提示人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞表现出更加明显的成骨活性改变.
-
人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞增殖细胞周期的影响及其抑瘤作用
本研究旨在观察人骨形成蛋白(BMP)-2对人脑胶质瘤细胞增殖、细胞周期的影响及其抑瘤作用,现将结果报道如下.
-
rhBMP-2抑制胶质瘤细胞方式的初步探讨
目的初步探讨BMP-2抑制胶质瘤细胞的作用方式.方法在培养的人脑胶质瘤细胞系SHG - 44中加入rhBMP -2,测定生长曲线,应用流式细胞仪法分析细胞周期,用FITC标记的Annexin V染色法分析凋亡和坏死的比例.结果经rhBMP -2作用的SHG -44细胞G1期所占比例明显升高(P<0.01);10μg/ml组中,完整细胞(PI-/FITC-)比例(35.6%)明显低于5μg/ml组(94.3%)和对照组 (96.9%)(P<0.01),坏死细胞(PI+/FITC+)比例(58.0%)明显高于5μg/ml组(3.1%)和对照组(0.5%)(P<0.01).结论在rhBMP -2抑制胶质瘤细胞SHG -44增殖中,诱导其坏死是主要作用,其中也有凋亡作用的参与;Annexin V染色法较流式细胞仪法可更加准确的区分正常细胞,早、晚期凋亡细胞和坏死细胞.
-
重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响
目的 研究BMP-2是否对胶质瘤细胞也具有诱导凋亡作用.方法 培养的人脑胶质瘤细胞系SHG-44中加入rhBMP-2,运用透射电镜观察凋亡的超微结构,流式细胞仪技术分析细胞DNA周期变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的改变.结果 电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂;DNA周期分析显示在G1期峰前存在一个凋亡峰(12.1%);DNA电泳呈梯状.结论 rhBMP-2在体外对人脑胶质瘤细胞系SHG-44有明显诱导凋亡的作用.
-
腭部术后聚乳酸骨形成蛋白复合移植对上颌骨生长发育的影响
本研究以实验大白鼠为研究对象,制作腭部粘骨膜缺损模型,以生物吸收降解材料聚乳酸作为载体、重组人骨形成蛋白-2作为骨生成材料,复合移植以观察大白鼠头颅三维方向生长情况,结合局部组织学观察,探讨rhBMP-2/PLA复合移植于裸露骨面,对上颌骨生长发育的影响.
-
重组35型腺病毒介导人骨形成蛋白基因对脂肪源性干细胞的诱导分化
目的 在体外运用人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein 7,hBMP-7)基因重组35型腺病毒(recombinant adenovirus's containing fibers derived from B-group serotype 35,rAd5/F35)诱导大鼠脂肪源性干细胞(adipose-derived adult stem cell,ADASC)向成骨细胞定向分化,为骨组织工程探索新的细胞来源. 方法以pcDNA1.1/氨苄青霉素hBMP 7质粒为模板扩增hBMP-7基因,将回收的PCR产物片段克隆人pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP-7.骨架质粒pBHG-fiber5/35和穿梭质粒pDC316-hBMP-7共转染293细胞,同源重组产生rAd5/F35-hBMP-7.同样的方法构建rAd5/F35-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP).在体外分别转染大鼠ADASC并留置空白对照.观察细胞形态和生长情况,ELISA检测转染基因的转录和表达,检测钙结节和骨钙素等成骨细胞表型.结果 PCR、酶切鉴定表明rAd5/F35-hBMP-7质粒构建正确.rAd5/F35-EGFP对大鼠ADASC中转染效率可达90%以上,hBMP-7基因存在于转染后的ADASC中并表达相应的蛋白,诱导组钙结节形成,电镜见胞质中有钙质成分,碱性磷酸酶阳性,骨钙素表达增强.结论 rAd5/F35介导hBMP-7基因可促进ADASC向成骨细胞定向分化.
-
重组人骨形成蛋白-7成熟肽的表达、纯化及活性的研究
目的:研究重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7m)羧基端140个氨基酸成熟肽的大肠杆菌表达、纯化及活性,为其实际应用打下基础.方法:将编码此成熟肽的cDNA亚克隆入含PL启动子的表达质粒pDH2中,构建表达质粒pDH2-B7m,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达;通过包涵体洗涤、离子交换层析纯化目的蛋白;用Western blot验证透析复性后表达蛋白的抗原性,用含荧光素酶报告基因专门用于检测BMP活性的细胞株C2C12-K4检测其活性.结果:成功构建了PL启动子控制的原核表达载体pDH2-B7m;42℃诱导5 h后表达量达到高水平,约占菌体总蛋白40.3%,表达产物以包涵体形式存在.包涵体经洗涤、离子交换层析纯化,目的蛋白纯度至少在96.0%以上.Western blot实验证实其抗原性,细胞株C2C12-K4反应的检测表明透析复性后的rhBMP-7m有较强的活性.结论:成功地在E.coli中表达了hBMP-7m重组蛋白并证明其有较强的生物活性.
-
pIRES2-EGFP-hBMP2载体在人骨髓基质细胞中的表达及意义
目的:研究人骨形成蛋白hBMP2真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达及意义.方法:利用DNA重组技术,将hBMP2片段克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中;EcoRΙ/BamHΙ双酶切鉴定;脂质体介导的方法转染HFCL细胞;荧光显微镜下观察转染细胞;免疫组化染色检测hBMP2基因的表达.结果:经酶切鉴定显示,成功地构建了重组载体pIRES2-EGFP-hBMP2.转染HFCL 48 h后在荧光显微镜下观察到转染的HFCL细胞发绿色荧光.免疫组化染色显示转染hBMP2基因的HFCL细胞浆内有细的棕色颗粒,而转染空载体的HFCL细胞免疫组化呈阴性.结论:所构建的pIRES2-EGFP-hBMP2真核表达载体在HFCL细胞中有良好的表达,为进一步研究转基因骨髓基质细胞对放射和化疗所致的造血和骨微环境破坏的改善奠定了基础.