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川芎嗪中间体2-氯甲基-3,5,6三甲基吡嗪的合成优化
目的 对比"一步法"与"四步法"的制备方法,同时对"四步法"的关键步骤进行探讨,确定并优化川芎嗪中间体2-氯甲基-3,5,6三甲基吡嗪(TMP-Cl)的合成方法.方法 分别通过自由基卤代的"一步法"以及氧代、乙酰化、水解和温和卤代的"四步法"合成TMP-Cl,结合HPLC监测反应进程,并借助HRMS、1H-NMR和13C-NMR确认化合物结构.结果 本实验"四步法"中首次采用未见报道的TsCl/TEA/DMAP体系进行温和卤代反应,单步产率近100%.综合对比研究发现,"四步法"副产物少且反应条件温和,终产物产率高达80%.而"一步法"反应剧烈,副产物较多,主产物产率在50% 左右.结论 "四步法"反应条件温和、刺激性小、产率高、后处理简单,是TMP-Cl的佳合成方法,对于川芎嗪衍生物的后期设计、合成具有实际参考意义.
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快速、高通量MTHFR基因C677T多态性检测方法的建立
目的:建立亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因C677T多态性的快速检测方法.方法:提取健康人外周血基因组DNA,采用PCR扩增含677位点的MTHFR基因片段.对PCR产物中残余的dNTPs和游离单链引物消化处理后进行TDI反应,测定荧光偏振值并分析C677T基因型.同时采用PCR-RFLP方法分析C677T基因型进行比较.结果:100例标本中,TDI-FP分析MTHFR C677T基因型:C/C 40例、T/T 14例、C/T 46例;PCR-RFLP分析MTHFR C677T基因型:C/C 40例、T/T 12例、C/T 48例;其中两种方法检测结果不一致的两例标本经焦磷酸微测序证实为T/T纯合子.结论:建立了一种新的基于TDI-FP的MTHFR C677T基因分型方法,该方法较RFLP方法更为准确,且快速、简便、通量高,适用于临床大批量标本的筛查.
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5,7-双羟色胺损毁大鼠中缝背核对内侧前额叶皮层锥体神经元电活动的影响
目的:研究5,7-双羟色胺(5,7-DHT)损毁大鼠中缝背核后内侧前额叶皮层(mPFC)中锥体神经元放电频率和放电形式的变化.方法:应用在体细胞外电生理学记录的方法,观察5,7-双羟色胺损毁大鼠中缝背核后,mPFC锥体神经元自发电活动的变化.结果:实验组大鼠锥体神经元的放电频率显著升高(P＜0.001),使其从0.52±0.10Hz升至1.25±0.20Hz,放电形式趋向爆发(P＜0.001).结论:脑内5-HT递质系统对内侧前额叶皮层锥体神经元的电活动有显著影响.
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HPLC测定阿胶益寿口服液中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量
目的:建立阿胶益寿口服液中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定的HPLC方法.方法:用AE.Kromasil-C18柱(150mm×4.6mm,5μm),乙腈-水(15.8:84.2)为流动相,检测波长:320nm,柱温28℃,流速1.0ml· min-1.结果:在0.0956～0.382μg,进样量与峰面积线性关系良好,r=0.9996(n=5).平均回收率98.8％,RSD为1.5％.结论:本法准确度高,专属性好,简便快捷,可作为该成分含测定的方法.
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老年髋部骨折类型同胰岛素样生长因子及其结合蛋白表达的相关性研究
目的 研究不同类型老年女性髋部骨折中外周、局部IGF-I及IGFBP-3,4,5表达差异及相关性.方法 选取年龄大于65岁老年女性髋部骨折患者,比较外周及局部IGF-I及IGFBP-3,4,5表达差异及其相关性.结果 共收集46例患者血清及局部指标,粗隆间骨折组粗隆区BMD较股骨颈骨折组低(P<0.001),股骨颈组血清及局部IGFBP-4含量较粗隆问骨折组低(P<0.001),而IGF-I及IGFBP-3,5含量高于粗隆广日J骨折组(P<0.001).局部蛋白同血清指标无相关性,相同指标间只有局部IGFBP-4 mRAN同血清相关指标成正相关(R=0.544,P<0.001).结论 外周血清及局部中IGF-I及其结合蛋白表达的差异可能是导致不同类型老年髋部骨折的病理机制之一,但除IGFBP-4外,其他因子可能通过不同的调节机制影响老年髋部局部的骨代谢.
关键词： 髋部骨折 血清胰岛素样生长因子I 血清胰岛素样生长因子结合蛋白3 4 5 -
母亲MTHFR基因C677T多态性与国人子代先天性心脏病易感性的Meta分析
目的 系统评价母亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因C677T位点多态性与国人子代先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)易感性的相关性.方法 通过检索PubMed、Embase、Web of science、中国生物医学文献数据库、中文科技期刊全文数据库、中国期刊全文数据库及万方数据库,检索时间为建库至2017年1月,纳入国人MTHFR基因C677T位点多态性与CHD易感性的病例对照试验研究.以病例组和对照组MTHFR基因C677T位点基因型分布的比值比(odds ratio,OR)为疗效测量指标,采用revMan 5.3进行统计分析.结果 共纳入9篇文献,其中病例组(CHD患儿母亲)1 221例,对照组(健康儿童母亲)1 108例.Meta分析结果显示,母亲MTHFR基因C677T位点TT/TC、TT/CC、TC/CC、TT/TC+ CC、TT+TC/CC多态性与国人CHD易感性相关,OR分别为1.85(95％ CI 1.50～2.28)、2.33(95％CI 1.81 ～3.00)、1.24(95％ CI 1.00 ～ 1.54)、2.00(95％CI 1.64～2.44)和1.55(95％ CI 1.27～ 1.89),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 母亲MTHFR基因C677T位点多态性与国人子代CHD易感性相关.
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高活性溴酚化合物2,5'-二溴-4,5,2'-三羟基二苯甲酮在大鼠体内的排泄特征研究
目的 建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定大鼠粪便和尿液中2,5'-二溴-4,5,2'-三羟基二苯甲酮(LM49),并研究大鼠ig给予LM49后在粪便和尿液中的排泄特征.方法 采用甲醇提取生物样品中的LM49,Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,甲醇/乙腈/水(磷酸调pH至3.0)(68:5:27)为流动相,体积流量0.8 mL/min,检测波长261 nm,柱温25℃.雄性SD大鼠单次ig给予100 mg/kg的LM49后,收集0～12、13～24、25～36、37～48 h的粪便和尿液,采用RP-HPLC法测定LM49,计算排泄量、排泄率、累积排泄率.结果 单次口服给予大鼠100 mg/kg的LM49后,48 h内LM49在粪便中的排泄主要集中在13～36 h,占整个排泄量的77.4％,累积排泄率为13.9％;其尿液中0～12 h的累积排泄率为0.05％,13～48 h未检测到LM49.结论 LM49口服吸收不完全,有较高的粪便排泄率,原型尿排泄甚少,推测可能被代谢分解或在组织器官中蓄积.
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HPLC测定安尔眠胶囊中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷
目的 建立安尔眠胶囊中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H2209)的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法,以Dionex Acclaim 120(@)C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,以乙腈-1％甲酸溶液(23∶77)为流动相,体积流量1.0 mL/min,检测波长320 nm,柱温25℃.结果 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.010～0.200 μg呈现良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为97.35％,RSD为2.07％.结论 该方法准确可靠,适用于安尔眠胶囊中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定.
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HPLC法测定通乐颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷
目的 建立测定通乐颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex C18柱,检测波长为320 nm,流动相为乙腈-水(20:80),体积流量为1.0 mL/min.结果 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在10～100 μg/mL与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 7),平均回收率为99.74％.结论 本方法准确、简便、重复性好,可用于通乐颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定.
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白藜芦醇衍生物大鼠在体肠吸收特性研究
目的:研究白藜芦醇衍生物[(E)-3,5,4'-三甲氧基-1,2-二苯乙烯(BTM-0512)]在大鼠肠道的吸收特性.方法:采用大鼠在体肠循环实验,考察不同的药物浓度、肠段及胆汁对吸收参数的影响.BTM-0512在大鼠肠循环液中的药物浓度采用HPLC法测定;循环液中酚红浓度采用UV法测定.结果:在肠道正常pH情况下,低、中、高3个浓度的BTM-0512的吸收速率常数(Ka)分别为0.6290,0.5329(扎胆管),0.5330(未扎胆管),0.6791 h-1,表明不同浓度BTM-0512在肠道的吸收速率常数相近,且胆汁对BTM-0512肠道吸收没有影响(P>0.05);在十二指肠、空肠、回肠,结肠的吸收速率常数分别为0.9492,0.5216,0.3835,0.1185 h-1,统计结果显示,不同肠段间吸收有明显差异(P<0.05).结论:BTM-0512在肠道内是以被动扩散的方式被吸收,呈现一级动力学过程.因BTM-0512在整肠段均有吸收,剂型设计时可考虑肠溶制剂.
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白藜芦醇衍生物在大鼠尿液中代谢产物结构及代谢途径研究
目的:研究大鼠尿液中白藜芦醇衍生物(E)-3,5,4'-三甲氧基-1,2-二苯乙烯(BTM-0512)的主要代谢产物结构及代谢途径.方法:尿样采用C_(18)同相萃取小柱(SPE)处理,用LC/MS/MS技术分析推测BTM-0512在大鼠体内代谢产物的结构,结合UV、IR、NMR等技术对代谢产物M1进行结构确证.结果:BTM-0512在大鼠体内有多种代谢物,所建立的LC/MS/MS方法可用于寻找并鉴定主要代谢产物.结论:首次从大鼠尿液中鉴定出3个I相和1个Ⅱ相代谢产物(M1-M4),推断出BrIM-0512在大鼠体内的代谢途径,并确证了代谢产物M1的结构.
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HPLC法同时测定陈皮饮片中5种黄酮类化合物的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定陈皮药材中5种黄酮类化合物柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮及红橘素的含量,并对结果进行聚类分析.方法:采用Waters Synunetry 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;检测波长为300 nm;流速1.0 mL·min-1.结果:柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮及红橘素的线性范围分别为1.00～9.00 μg·mL-1(r=0.9998)、1.00～9.00 μg·mL-1(r=0.9999)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9997)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9999)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9994);加样回收率(n=5)分别为96.8%,99.4%,93.3%,94.4%,95.8%.结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性.试验结果显示,全国不同省市、不同产地陈皮饮片的含量存在差异.同时也说明多指标成分定量分析比单一指标成分定量分析能更伞面地反映陈皮饮片的内在质量.
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大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(BTM-0512)药代动力学研究
目的:建立RP-HPLC法测定大鼠血浆中自藜芦醇衍生物3,5,4'-O-三甲基白藜芦醇(BTM-0512)浓度的方法并进行药代动力学研究,为该化合物的进一步开发提供实验依据.方法:取血浆样品,以乙腈沉淀蛋白,用Hypersil C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)分离,己烯雌酚为内标,乙腈-水(65∶35)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长319 nm.结果:BTM-0512的线性范围为0.01～10.0 μg·mL-1,r＞0.999;日内、日间精密度RSD小于10.0%;相对回收率在98.2%～101.3%之间,低检出限为0.005 μg·mL-1,低定量限为0.01μg·mL-1.结论:本方法灵敏度高,操作简便、准确,经方法学确证和稳定性评价,可用于大鼠血浆中BTM-0512的测定及药代动力学研究.
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HPLC-MS法测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(E)-3,5,4'-三甲氧基二苯乙烯的浓度
目的:建立测定大鼠血浆中自藜芦醇衍生物(E)-3,5,4'-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的液相色谱-质谱法(HPLC-MS)定量分析方法.方法:血浆样品0.1 mL,经乙腈沉淀蛋白后,以ODS Hypersil C18(5μm,250 mm×4.6 mm)为固定相,甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵(0.2%甲酸)(80:20,v/v)为流动相,流速为0.85 mL·min-1;采用HPLC-MS,选择离子临测(SIM)法检测(E)-3,5,4'-三甲氧基-1,2-二苯乙烯([M+H]+,m/z 271.3),卡马西平([内标,M+H]+,m/z 237.5),保留时间分别为8.9,4.0 min.结果:(E)-3,5,4+-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的线性范围为0.01～5.0μg.mL-1,r>0.999;只内、日间精密度RSD小于12.9%;相对回收率在94.8%～104.7%之间,低检出限为0.005 μg·mL-1结论:经方法学确证和稳定性评价,该方法成功用于大鼠血浆中(E)-3,5,4'-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的定量测定.
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RP-HPLC同时测定心安宁片中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量
目的:建立心安宁片中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,以Nova-Pak C18(5μm,150 mm×4.6 mm)柱为分析柱,乙腈-水(15:85)为流动相,流速:0.8 mL·min-1,检测波长:320 nm,柱温:40℃,以外标法检测.结果:葛根素在29.76～297.μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为101.2%,RSD为1.6%(n=6);2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在1.824～18.24μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为99.32%,RSD为2.2%(n=6).结论:该法快速、简便,分离度好,可同时测定心安宁片中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量.
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RP-HPLC法测定固肾生发胶囊中二苯乙烯苷的含量
目的:建立反相高效液相色谱法对固肾生发胶囊中二苯乙烯苷(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)的含量进行测定.方法:采用DiscoveryTM HPLC C18色谱柱(250 mm×4.6 nm,5μm),以乙腈-水(23∶77)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长320 nm.结果:二苯乙烯苷进样量在0.0431～0.302 μg范围内呈良好的线性关系;加样回收率(n=9)为101.0%,RSD为1.7%.结论:本方法用于固肾生发胶囊中二苯乙烯苷的含量测定,简便、准确、可靠,重复性好.
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HPLC法测定益视颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量
目的:采用HPLC法测定益视颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量,以控制益视颗粒的质量.方法:采用Alltech C18色谱柱(250 mm×4.6pm,5 μm),流动相乙腈-甲醇-水(16:10:74),流速1.0 mL·min-1,检测波长为320 nm,进样量20μL.结果:2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷浓度在4.9～58.8μg·mL-1范围之间有良好的线性关系,加样平均回收率为98.68%,RSD为1.6%.结论:所建方法可用于益视颗粒的质量控制.
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精乌颗粒质量标准研究
目的:研究精乌颗粒定性定量质量标准.方法:利用TLC作为墨旱莲的定性鉴别方法,展开剂为苯-正己烷-石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(2.5∶2.5∶1∶3.5∶1);HPLC作为2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法,采用迪马C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(25∶75),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为320nm.结果:TLC定性鉴别能检出供试品中墨旱莲;2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为0.02～0.3 mg·mL-1,r=0.9998;平均回收率为99.03%,RSD为0.97%(n=5).结论:本方法快速、简便、准确,重现性好,结果可靠,可用于精乌颗粒质量控制.
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固相萃取-高效液相色谱法测定安神补脑液的含量
目的:采用固相萃取(SPE)-高效液相色谱法测定安神补脑液中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量.方法:以甲醇-水(32:68)为流动相,Inertsil ODS(2)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,流速为1 mL·min-1,检测波长为320nm.结果:2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的浓度在8.160～122.4μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.1%.结论:方法简单,灵敏度高,可用于安神补脑液中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定.
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LC-MS法鉴定艾滋病治疗药物去羟肌苷的有关物质
目的:采用高效液相色谱-质谱联用技术鉴定艾滋病治疗药物去羟肌苷的有关物质结构.方法:InertSurstain C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.386％醋酸铵溶液加氨水调节pH至8.0为流动相A,以甲醇-乙腈(50∶50)为流动相B,进行梯度洗脱,电喷雾正离子化高分辨TOF/MS和MS/MS检测并解析有关物质结构.TOF/MS雾化气压力345 kPa,温度350℃,干燥气流量10 L· min-1,毛细管电压4 kV,碎片电压100 V,MS/MS测定氩气CID压力0.2 Pa,碰撞能量25 eV.结果:检测到去羟肌苷原料中共有8个有关物质,通过有机反应机制分析和质谱解析鉴定了他们的结构,他们分别是9-(2-氧基-丁酸)-1,4,5,7,8,9-六氢-嘌呤-6-酮、次黄嘌呤、肌苷、2'-去氧肌苷、9-(2-羟基-乙酰基)-1,9-双氢-嘌呤-6-酮、3'-去氧肌苷、2',3'-脱水肌苷、9-(2-羟乙基-4-丙酸甲酯-四氢呋喃)-1,9-双氢-6H-嘌呤-6-酮.结论:采用色谱-质谱联用技术能有效地鉴定去羟肌苷的有关物质,可为其质量控制研究提供参考.
关键词： 艾滋病治疗药物 嘌呤核苷类药物 去羟肌苷 杂质鉴定 9-(2-氧基-丁酸)-1 4 5 7 8 9-六氢-嘌呤-6-酮
