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高效液相色谱-质谱法测定酒中甜蜜素含量的研究
目的 本文采用UPLC-MS/MS法对市售30种酒中甜蜜素进行测定.方法 采用Acquity UPLCTM BEHC18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱分离,甲醇-0.1％乙酸(90+ 10)作为流动相洗脱,运用三重四极杆质量分析器定性定量分析.结果 该方法测定酒中甜蜜素具有良好的线性关系,测定方法检出限为0.010 μg/ml,定量限为0.021 μg/ml,加标回收率为75.0％～ 105％,精密度RSD值为10.5％～ 12.1％.30种酒样品中,有13个样品检测出甜蜜素,含量水平为0.027 ～891μg/ml.结论 该方法测定酒中甜蜜素,具有较高的灵敏度和选择性,样品测定结果表明存在乱用甜蜜素现象.
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九味防瘟散中麝香酮的含量测定及稳定性研究
目的:建立九味防瘟散中麝香酮含量测定方法,以麝香酮为指标研究该制剂的稳定性.方法:以HPLC-MS法测定麝香酮的含量；研究九味防瘟散在不同温度和包装条件下的稳定性.结果:麝香酮浓度在0.2～20 mg·L-1线性关系良好(r =0.999 9),精密度、回收率、稳定性、重复性均符合实验要求.稳定性方面,去外包装组麝香酮损失速率＞包装组,35℃时麝香酮损失速率＞4℃,密闭包装组麝香酮损失速率＞密封包装组.结论:HPLC-MS法测定九味防瘟散中的麝香酮含量灵敏、快捷、简便、准确.九味防瘟散须在冷处密封条件下保存.
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液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽
目的寻找MHCⅠ类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽. 方法人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸-磷酸盐(pH3.3)液洗脱,洗脱物经粗分离,得到相对分子质量(Mr)＜5?000的各种多肽组分混合液;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞(T2,HLA-A2)进行细胞表位重建,加入特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),51Cr释放法测杀伤活性;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱-质谱(RP-HPLC-MS)检测,对活性峰手工读谱分析其一级结构;后进行氨基酸同源性分析. 结果酸洗1010hHCC细胞,样品蛋白质浓度2mg/ml;通过RP-HPLC-MS检测,其质谱图经手工解析,氨基酸序列为SXXVHXNEV,X=1或L;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV,是肝细胞生长因子受体的第1?075～1?083肽段,第1?080位点发生突变,由F变为L,由HLA-A2分子递呈. 结论细胞膜温和酸洗技术结合RP-HPLC-MS联用技术,是寻找肝癌抗原肽的有效方法,尚未见相同研究报道.发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物,可能具有重要生物学意义.
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固相微萃取在生物体液分析中的研究进展
固相微萃取是一种无溶剂样品预处理技术.固相微萃取以其无需使用溶剂、样品用量少、有一定的富集作用等特点而受到广大分析工作者的关注.本文着重综述了该方法的装置、原理、影响因素及其应用,尤其是在使用气相色谱-质谱联用、高效液相色谱-质谱联用技术分析生物体液中的应用.
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高效液相色谱-质谱联用测定大鼠不同脑区的游离型神经甾体
目的建立大鼠不同脑区3种游离型神经甾体的测定方法.方法甾体分两步萃取,首先用乙酸乙酯-正己烷(90:10)提取甾体,然后经固相萃取纯化.游离型甾体进行衍生化后应用高效液相色谱-质谱分离测定,选择甲基睾丸酮作为内标.结果去氢表雄酮的线性范围为0.030-2.00μg·L-1,孕烯醇酮和别孕烯醇酮的线性范围为0.025-2.00μg·L-1.正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠不同脑区甾体去氢表雄酮(DHEA),孕烯醇酮(PREG)和别孕烯醇酮(AP)的含量分别为额叶皮质(0.70±0.23),(4.8±1.9),(1.1±0.6)ng·g-1,海马(0.57±0.28),(6±3),(0.5±0.3)ng·g-1,杏仁核(1.5±1.0),(9±5),(1.4±0.9)ng·g-1,纹状体(0.52±0.14),(7.7±2.8),(0.5±0.6)ng·g-1,伏隔核(2.9±1.6),(18±9),(1.6±1.3)ng·g-1,垂体(4.0±2.0),(27±12),(0.8±0.5)ng·g-1,下丘脑(1.7±1.2),(16±10),(0.8±0.7)ng·g-1.结论 3种神经甾体都有良好的线性关系和准确度,本方法可满足大鼠不同脑区内游离型甾体的分离测定.
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R,S-1-(2-甲氧基苯基)-4-[3-(萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪在大鼠血浆中代谢产物的研究
目的研究R,S-1-(2-甲氧基苯基)-4-[3-(萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪(nafiopidil,NAF)在大鼠血浆中的代谢产物.方法用LC/MS法对大鼠口服NAF后的血浆样品进行分析,根据检测到的代谢产物与原形药的质谱行为及类似结构化合物的代谢规律,推测可能的代谢产物.合成对照品,通过比较代谢产物和合成对照品的色谱和质谱行为,对Ⅰ相代谢物予以确认.通过质谱信息及酶水解的方法间接鉴定Ⅱ相代谢物.结果大鼠血浆中发现Ⅰ相代谢物:R,S-1-(2-羟基苯基)-4-[3-(萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪(DMN)、R,S-1-(2-甲氧基-4-羟基苯基)-4-[3-(萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪(PHN),R,S-1-(2-甲氧基苯基)-4-[3-(4-羟基萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪(NHN)及Ⅱ相代谢物:NAF和NHN与β-D-葡糖醛酸形成的结合物.结论 NAF在大鼠血浆中的主要代谢途径是苯环、萘环羟基化和苯环邻位甲氧基的脱甲基化.此外,萘羟化代谢物和原形药与内源性分子β-D-葡糖醛酸形成结合物也是原形药的代谢方式之一.
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注射用哌拉西林钠/舒巴坦钠(8:1)在比格犬体内的药代动力学
目的 研究注射用哌拉西林钠/舒巴坦钠(8:1)中哌拉西林钠及舒巴坦钠在比格犬体内的药代动力学.方法 三周期交叉试验设计,6只比格犬静脉滴注给予受试和参比药物(按哌拉西林钠计143 mg·kg-1,按舒巴坦钠计为18 mg·kg-1)后,用HPLC-MS法同时测定血浆中哌拉西林和舒巴坦的浓度,用DAS 2.0软件计算药代动力学参数.结果 静脉滴注给药后血浆中受试和参比药物的哌拉西林的cmax分别为(710.28±148.44),(743.70±212.02) μg·mL-1;t1/2分别为(0.60±0.23),(0.62±0.22) h;AUC0-t分别为(360.01±28.19),(377.64±107.36) μg·h·mL-1;以AUC0-t计算,哌拉西林的相对生物利用度平均为(99.6±18.0)%;血浆中的舒巴坦的cmax分别为 (70.95±14.59),(88.34±16.31) μg·mL-1;t1/2分别为(0.84±0.27),(0.71±0.09) h;AUC0-t分别为(59.59±4.52),(55.68±7.57) μg·h·mL-1;以AUC0-t计算,舒巴坦的相对生物利用度平均为(108.4±14.2)%.结论 本方法准确可靠,操作简便,适用于药代动力学研究.
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螺内酯片在健康人体内药代动力学及生物等效性
目的 研究螺内酯片(利尿药,抗高血压药)在健康人体内的相对生物利用度,并进行生物等效性评价.方法 采用随机交叉自身对照试验设计,18名健康男性受试者分别单剂量口服螺内酯受试制剂或参比制剂25 mg后,取静脉血,采用HPLC-MS法测定其活性代谢产物坎利酮的血浆浓度,计算主要药代动力学参数.以方差分析进行均数的差别检验,以双单侧t检验进行生物等效性判定.结果 受试者分别口服受试制剂和参比制剂后,坎利酮的主要药代动力学参数如下:AUC0→72分别为(684.8±184.4)、(682.1±212±7)μg·h·L-1,AUC0→∞分别为(803.8±249.6)、(774.3±259.3)μg·h·L-1,tmax分别为(2.1±0.3)、(1.9±0.4)h,Cmax分别为(51.3±12.4)、(54.1±12.9)μg·L-1,t1/2分别为(25.0±9.2)、(22.1±6.0)h.受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(102.2±19.0)%.结论 受试制剂与参比制剂为生物等效制剂.
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国产罗格列酮胶囊在健康人体的相对生物利用度
目的研究健康受试者口服罗格列酮胶囊的药代动力学.方法20名健康受试者随机服用罗格列酮受试和参比制剂各4 mg,用HPLC-MS法测定血浆中罗格列酮的浓度.结果经3P97程序处理,主要药代动力学参数如下.罗格列酮胶囊剂:t1/2为(5.18±0.84)h,AUC0-24h为(2.13±0.21)μg·h·mL-1,Cmax为(305.31±38.21)ng·mL-1,tmax为(1.1±0.4)h;罗格列酮片剂:t1/2为(5.10±0.64)h,AUC0-24h为(2.20±0.20)μg·h·mL-1,Cmax为(318.84±38.38)ng·mL-1,tmax为(1.2±0.3)h.罗格列酮受试和参比制剂的相对生物利用度为(97.6±12.7)%.结论2制剂具有生物等效性.
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单次口服瑞舒伐他汀钙片在中国健康志愿者的药代动力学
目的 研究瑞舒伐他汀钙片(降血脂药)在中国健康志愿者体内单次给药的药代动力学特征.方法 选择健康受试者12例,按3×3拉丁方设计,分别单次给与瑞舒伐他汀钙片5,10和20 mg后,采用LC-MS测定不同时间血中瑞舒伐他汀的浓度,以BAPP软件进行数据处理,求算药代动力学参数.结果 3个不同剂量组瑞舒伐他汀的主要药代动力学参数:Cmax分别为(6.54±2.06),(10.61±3.35),(22.85±7.32)ng·mL-1;AUC0-72分别为(77.83±25.43),(136.12±48.63),(275.98±81.98)h·ng·mL-1;tmax分别为(3.7±1.2),(3.8±0.8),(3.4±1.0)h;t1/2分别为(23.26±5.54),(25.64±14.02),(20.54±5,80)h;CL/F分加为(65.40±19.05),(76,96±36.47),(76.18±33.35)L·h-1;各剂量组的Cmax、AUC0-72、AUC0-∞随剂量的增加而成比例的增大,各组的Ka、Ke、tmax、t1/2ka、t1/2、MRT、CL/F等差异无统计意义.结论 口服给药剂量为5～20 mg时,瑞舒伐他汀钙在国人体内具有线性药代动力学特征.
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克林霉素磷酸酯阴道凝胶在健康志愿者的药代动力学
目的研究克林霉素磷酸酯阴道凝胶(抗细菌性阴道病药)在健康女性受试者的药代动力学.方法健康女性志愿者10名,多剂量每次给予克林霉素磷酸酯阴道凝胶5 g(相当于克林霉素100 mg),每日1次,连续用药3日;而单剂是用量相同,1次给药.用HPLC-MS法测定血清中克林霉素浓度,用DAS药代动力学程序进行数据处理.结果克林霉素磷酸酯阴道凝胶单剂和多剂给药,符合一级消除药代动力学的二室模型,克林霉素主要药代动力学参数tmax分别为(4.88±0.94),(4.70±0.59)h;Cmax分别为(38.30±22.77),(44.87±26.71)ng·mL-1;t1/2分别为(15.30±2.62),(14.78±2.49)h;AUC0→∞分别为(783.45±351.19),(1015.68±456.95)ng·h·mL-1.结论克林霉素磷酸酯阴道凝胶单次和多次给药,Cmax降低,t1/2延长,提示该药以局部作用为主;亦可吸收入血,缓慢产生全身作用.
关键词： 克林霉素磷酸酯阴道凝胶 药代动力学 高效液相色谱-质谱 -
盐酸纳曲酮片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度
目的 研究进口与国产盐酸钠曲酮(解毒药)在健康人体的生物等效性.方法 20名健康志愿者交叉口服受试制剂或参比制剂50 mg.用HPLC-MS测定其血药浓度,计算主要药代动力学参数及相对生物利用度,判断其是否有生物等效性.结果 在0.10～41.08 ng·mL-1,线性关系良好,低定量限为0.10 ng·mL-1.受试制剂和参比制剂的药代动力学参数:f1/2分别为(3.59±0.49),(3.76±0.48)h;tmax分别为(1.0±0.4),(1.0±0.5)h;Cmax分别为(16.30±8.31),(15.83±7.17)ng·mL-1.以AUC0-16计算受试片剂的相对生物利用度为(102.2±13.9)%.2制剂的主要药代动力学参数无显著性差异.结论 2种制剂具有生物等效性.
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阿奇霉素软胶囊在健康志愿者的药代动力学与相对生物利用度
目的 建立人血浆中阿奇霉素(大环内酯类抗生素)的高效液相色谱-质谱测定方法,用于研究阿奇霉素软胶囊在人体的药代动力学及相对生物利用度.方法 18 例健康男性志愿者单剂量口服阿奇霉素软胶囊受试制剂或参比制剂 500 mg 后,用建立的方法测定阿奇霉素的血药浓度,用 3P97 药代动力学软件求算药代动力学参数,以双单侧 t 检验进行生物等效性评价.结果 受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数:Cmax 分别为(676.6±283.1),(663.4±298.3)ng·mL-1;tmax 分别为(1.9±0.5),(2.0±0.6)h;t1/2分别为(50.4±14.3),(49.1±14.5)h;AUCo-144 分别为(5025.1±881.9),(4857.5±946.8)ng·h·mL-1;AUCo-∞分别为(5827.3±898.0).(5638.9±998.5)ng·h·mL-1.相对生物利用度为Fo-144=(105.8 4±22.8)%.结论 2 制剂为生物等效制剂.
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高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中麦考酚酸的浓度
目的 建立高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中麦考酚酸浓度的方法.方法 以苯巴比妥为内标,色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB- C18(2.1 mm×150 mm,3.5 μm),流动相为0.05%乙酸铵-乙腈(45∶55),流速为0.2 mL·min-1,柱温35 ℃,电喷雾离子源 (ESI)正负离子同时检测.结果 麦考酚酸的线性范围为0.5~100.0 μg·mL-1;低检测限分别为0.1 μg·mL-1.高、中、低3个浓度的日内标准偏差小于3%,日间标准偏差小于15%,绝对回收率均大于70%.结论 本方法简便、快速、灵敏、重现性好,能有效检测人血浆中麦考酚酸的含量.
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HPLC-MS/MS同时测定人尿液中氟莱哌素的代谢物——对氟马尿酸和对氟苯甲酸
目的 建立HPLC-MS/MS法同时测定人尿液中对氟马尿酸和对氟苯甲酸浓度的方法.方法 以双氯芬酸钠为内标,尿液样品经甲基叔丁基醚萃取后,氮气吹干,流动相复融,用CAPCELL PAK C18 MGⅡ色谱柱进行分离,流动相为0.05％甲酸甲醇-水(90:10),流量为4 mL·min-1,柱温为18℃；大气压电喷雾离子源(ESI),多重反应选择离子监测(MRM),负离子模式检测.结果 对氟马尿酸和对氟苯甲酸线性范围为20～4000 g·mL-1(r＞0.99).高、中、低质控样品的日内RSD＜ 6％,日间RSD＜ 7％,绝对回收率均＞75％.结论 本方法简便、快速、灵敏、重现性好,能够有效地检测人尿液中2种代谢物的含量.
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高效液相色谱-质谱法研究盐酸阿莫地喹片在健康人体的药代动力学
目的建立高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)方法研究盐酸阿莫地喹片(抗恶性疟药)在中国健康人体内的药代动力学.方法血浆样品经乙醚萃取后,用HPLC-MS测定血浆中阿莫地喹的浓度并计算药代动力学参数.结果阿莫地喹不受血浆中杂质干扰,线性范围为1.0～100.0 ng·mL-1,回收率和精密度均符合测定要求.其药代动力学参数:AUC0→36为(269.8±78.9)ng·h·mL-1,AUC0→∞为(310.7±83.0)ng·h·mL-1,Cmax为(39.8±16.4)ng·mL-1,tmax为(0.96±0.50)h,t1/2为(14.9±5.4)h.结论HPLC-MS测定阿莫地喹法,简便、快速、灵敏、准确,适于其药代动力学及生物利用度研究;盐酸阿莫地喹片在中国健康人中,口服吸收迅速,消除较慢,安全性好.
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HPLC-MS/MS法测定达卡巴嗪脂质体的血药浓度
目的 建立高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)测定血浆中达卡巴嗪(DTIC)的浓度.方法 以电喷雾离子源(ESI)正离子模式,甲硝唑(MTZ)为内标定量,达卡巴嚷检测离子对为m/z 183.2→m/z 166.1;甲硝唑检测离子对为m/z172.1→m/z 128.1,乙腈沉淀蛋白处理,用Dikmatech Easy Guard ⅡHolder AssemLly保护柱,Dikmatech C18(2.1mm×50 mm,3μm)分析柱分离样品,流动相:水(含10 mmol·L-1乙酸铵,0.1％乙酸,用氨水调pH至6.0)-乙腈=94∶6(v∶v);流速:0.3 mL·min-1.结果 达卡巴嗪标准曲线方程为y=0.106X+0.0969(R=0.998 8),在0.5 ～20μg·mL-1线性关系良好,定量下限为0.5 μg·mL-1,达卡巴嗪日内和日间精密度的相对标准偏差为1.30％～3.00％和2.19％ ～8.78％.结论 本文建立的方法灵敏可靠,可用于测定血浆中达卡巴嗪脂质体的浓度.
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高效液相色谱-质谱联用法同时测定苯巴比妥、丙戊酸钠、苯妥英钠和卡马西平的血药浓度
目的 建立高效液相色谱-质谱联用法以便同时测定人血浆中苯巴比妥、丙戊酸钠、苯妥英钠和卡马西平(均为抗癫痫药物)的血药浓度.方法 以霉酚酸为内标,血浆样品经乙睛直接沉淀蛋白后,采用Zorbax Eclipse XDB-C18 色谱柱(2.1 mm×150.0mm,3.5 μpm)进行分离,以0.05%乙酸铵-甲醇(47.53)为流动相,流量0.2 mL·min-1,柱温30℃;通过电喷雾离子源(ESI ),正负离子同时检测.结果 苯巴比妥、丙戊酸钠、苯妥英钠和卡马西平线性范围分别为0.5～80.0,2.5～200.0,0.5～40.0和0.2～24.0 μg·ML-1;低检测限分别为0.05,0.20,0.10和0.01μg·mL-1;γ均大于0.99.高、中、低3个浓度的日内精密度小于3%,日间精密度小于15%,绝对回收率均大于70%.结论 本方法简便、快速、灵敏、重现性好,能够有效地检测人血浆中4种药物的含量.
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基因多态性对比卡鲁胺药代动力学的影响并比较不同剂型比卡鲁胺的药代动力学特征
目的 探讨腺苷三磷酸结合盒转运蛋白G2(ABCG2)和细胞色素P(CYP)3A4基因多态性对比卡鲁胺药代动力学的影响,比较比卡鲁胺的胶囊剂和片剂的药代动力学特性.方法 健康男性受试者随机分为2组,分别单剂量口服受试药品或参比药品50 mg,用高效液相色谱-质谱法测定血浆中比卡鲁胺的浓度,用Phoenix WinNonlin 6.4计算药代动力学参数,并进行生物等效性评价.用SPSS软件进行分析,考察基因多态性对比卡鲁胺药代动力学的影响.结果 受试药品与参比药品比卡鲁胺的Cmax分别为(900.00±159.20)和(902.40±146.10)ng·mL-1,tmax分别为(26.40±9.60)和(35.30±19.80)h,AUC0-t分别为(1.96×105±3.28×104)和(2.02×105±4.84×104)ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为(2.03×105±3.62×104)和(2.11×105±5.63×104)ng·h·mL-1,Cmax的90％置信区间为88.93％ ～111.39％;AUC0-t的90％置信区间为85.97％～ 110.76％;AUC0-∞的90％置信区间为85.18％～111.51％.28例受试者的ABCG2基因型之间的药代动力学参数进行方差分析和多重比较,CC型与AA、CA型比较,AUC0-t之间差异有统计学意义(P＜0.05);AUC0-∞在CC型和AA型之间差异有统计学意义(P＜0.05);CL/F在CC型和AA型之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 两种制剂生物等效.ABCG2中CC型的AUC略低于AA型和CA型,而CC型的CL/F略高于AA型和CA型.
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托伐普坦片在健康人体的生物等效性
目的 研究托伐普坦片的生物利用度,评价其生物等效性.方法 用三周期自身交叉试验设计,36名健康男性受试者分别单剂量口服受试药物1,受试药物2或参比药物30 mg,用高效液相色谱-质谱法测定血浆中托伐普坦的浓度,用Phoenix WinNonlin 6.1计算药代动力学参数,并进行生物等效性评价.结果 受试药物1,受试药物2和参比药物中托伐普坦的cmax分别为(244.76±123.46),(241.30±90.36)和(244.92±108.52) μg·L-1,tmax分别为(2.10±1.14),(2.15±1.26)和(1.96±0.87)h,t1/2分别为(8.52±3.77),(8.87±4.71)和(7.44±3.11)h;AUC0-tn分别为(1978.59±873.20),(1958.74±903.51)和(1835.98±643.02) μg·L-1·h.受试药物1的相对生物利用度F0-tn、F0-∞分别为(114.68±52.66)％和(114.65 ±52.43)％,受试药物2的相对生物利用度F0-tn、F0-∞分别为(112.22±53.35)％和(112.77±53.07)％.结论 2种受试药物和参比药物均具有生物等效性.
