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赤芍801加水蛭素治疗急性脑梗死疗效观察
目的:观察赤芍801加水蛭素治疗急性脑梗死的临床疗效.方法:选取185例急性脑梗死,按入院顺序随机分为治疗组101例、对照组84例.治疗组用赤芍801注射液6ml加入5%葡萄糖或生理盐水250ml中静脉滴注, 1次/d,连用14天.并同时给予水蛭素注射液6 ml加入5%葡萄糖液250 ml中静脉滴注,1次/d,连用7天.对照组仅用赤芍801注射液6ml加入5%葡萄糖或生理盐水250ml中静脉滴注,每日治疗次数和疗程同治疗组.两组患者视病情轻重及合并症给予脱水剂、降血压、降血糖等治疗.结果:治疗组疗效明显优于对照组,具有显著性差异(P＜0.05).结论:赤芍801加水蛭素静滴治疗急性脑梗死安全、有效,无毒副作用.
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水蛭肽研究应用进展
水蛭素(hirudin)由活血化淤中药水蛭的唾液腺分泌,1955年Markwardt[1]从医用水蛭咽周腺体中成功分离出的水蛭素纯品是迄今为止强的直接凝血酶抑制剂.80年代末,Dodt等[2]测定出水蛭素的氨基酸全序列,使基因重组表达水蛭素的研究取得成功.
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心血管疾病抗血栓治疗的现状
低分子肝素的应用有取代肝素之势;来自水蛭素的Hirulog多肽比肝素抗凝安全.根据国际正常化比值(INR)华法林应用十分重要.特异、高效的纤溶酶原激活剂增加溶栓的再通率.抗血小板GⅡb/Ⅲa受体拮抗剂应用于急性冠状动脉综合征及介入治疗是目前突出的进展.
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水蛭素对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响
目的：探讨水蛭素对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）和人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）生长的影响及剂量依赖关系，明确水蛭素抗再狭窄的有效性和可行性。方法用体外培养的HCASMC和HCAEC 3~5代，加入96孔细胞培养板，设置调零孔、对照孔、加药孔（6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/ml不同浓度水蛭素共9组，每组6个复孔），培养48 h后用噻唑蓝比色试验（MTT法）检测不同浓度水蛭素干预下两种细胞的活力和抑制率变化。结果与对照组相比，低浓度（0.025～0.1 mg/ml）水蛭素在对HCASMC增殖的影响方面无统计学差异（P均＞0.05），而中高浓度（0.2～6.25 mg/ml）的水蛭素抑制HCASMC增殖，差异有统计学意义（P均＜0.05），且其抑制率随水蛭素浓度升高而增加。与对照组相比，0.025～3.13 mg/ml的水蛭素在对HCAEC增殖的影响差异无统计学意义（P均＞0.05），但0.05～0.2 mg/ml的水蛭素对HCAEC有一定的促增殖作用；而高浓度（6.25 mg/ml）的水蛭素对HCAEC增殖的抑制增加，差异有统计学意义（P均＜0.05），其抑制率达到44.6%。结论中高浓度水蛭素可呈剂量依赖性抑制HCASMC的生长，低中浓度水蛭素对HCAEC无明显抑制作用，且能在抗血栓的同时保护HCAEC甚至促进HCAEC生长。
关键词： 水蛭素 人冠状动脉平滑肌细胞 人冠状动脉内皮细胞 抑制率 -
凝血酶致脑微血管内皮细胞凋亡作用
脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMVEC)在脑疾病发生、发展中占重要地位[1].近年来,BMVEC的体外培养方法已获成功[2].凝血酶是一种血清丝氨酸蛋白酶,除参与凝血外,它还促进BMVEC收缩并增加其通透性[3],并与肺动脉内皮细胞及神经元凋亡相关[4～6].本实验用体外原代培养的大鼠BMVEC研究凝血酶的作用,并用其受体拮抗剂水蛭素探讨致病机制.
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水蛭素对大鼠缺血皮瓣血运恢复与新生血管生成的影响
目的 探讨水蛭素对皮瓣远端缺血组织血流灌注量及新生血管生成的影响.方法 选取35只SD大鼠,每只背部构建左右缺血皮瓣,将左右皮瓣完全随机分为水蛭素组与对照组.术后即刻(0 d)和术后1～3 d于皮瓣近段、中段、远段各位点,水蛭素组分别皮下注射0.5U水蛭素生理盐水溶液,对照组分别皮下注射等量生理盐水,分别以激光多普勒血流成像仪、免疫组织化学法及Western印迹法检测每日皮瓣血流灌注状态、微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)和血小板应答蛋白-1(TSP-1)的表达,并于术后6d测定皮瓣成活面积.结果 术后1～6 d,水蛭素组皮瓣血流灌注量及VEGF表达水平明显高于对照组(P＜0.05);术后4d水蛭素组MVD明显高于对照组(P＜0.05);术后1～4 d,水蛭素组皮瓣组织中TSP-1表达明显低于对照组(P＜0.05);水蛭素组皮瓣成活面积显著大于对照组(P＜0.05).结论 水蛭素通过加速恢复血流灌注、调节血管生成相关因子、促进缺血皮瓣新生血管生成,从而提高皮瓣组织的成活率.
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水蛭素注射液治疗脑出血的临床疗效观察
目的观察水蛭素注射液对自发性脑出血血肿吸收、血肿周围低密度区改变及对神经功能恢复的影响.方法将465例入选的自发性脑出血患者随机分为治疗组(308例)和对照组(157例).治疗组给予水蛭素注射液,6 ml加入5%葡萄糖液250 ml中静脉滴注,1次/d.分别于发病第1、4、10、21天利用CT测量血肿体积及血肿周围低密度区,采用欧洲卒中量表进行神经功能缺损评分.结果治疗组血肿体积第10天为(21±10)ml,第21天为(14±7)ml,对照组第10天为(27±8)ml,第21天为(25±9)ml,两组比较差异有显著意义;治疗组在20d时血肿周围密度区为1.5 mm,对照组为3 mm,两组比较差异有显著意义;治疗组第10、20天欧洲卒中量表评分分别为62±19、66±24,对照组分别为46±16、51±14,两组比较差异有显著意义,P＜0.05.结论水蛭素注射液能促进脑出血血肿的吸收,使血肿周围低密度区缩小和促进神经功能恢复.
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水蛭素对脑出血大鼠蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3信号通路的影响
目的 探讨水蛭素对脑出血大鼠脑组织蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响.方法 采用随机数字表法,将216只健康雄性Wistar大鼠分为假手术组、模型组和水蛭素组,每组72只.将大鼠自体动脉血注入尾状核建立脑出血模型,假手术组以等量等渗盐水代替自体动脉血.水蛭素组分别于模型建立后6、24、72、120 h注入水蛭素,假手术组和模型组则于同时点给予等量等渗盐水.对不同时点时3组脑出血大鼠神经行为学评分、脑含水量及脑系数进行比较;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞仪检测脑细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法检测脑组织磷酸化JAK2(p-JAK2)及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达.结果 (1)与同时点假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分、脑含水量、脑系数、脑细胞凋亡率及p-JAK2和p-STAT3的表达均明显升高,组间差异均有统计学意义(均P<0.05);与同时点模型组比较,水蛭素组大鼠神经行为学评分、脑含水量、脑系数、脑细胞凋亡率均明显降低,组间差异均有统计学意义(均P<0.05).(2)造模后6、24、72、120 h,模型组p-JAK2分别为0.632±0.036、0.783±0.045、1.250±0.071、1.006±0.052,p-STAT3分别为0.155±0.005、0.193±0.006、0.379±0.012、0.317±0.010;水蛭素组p-JAK2分别为0.267±0.014、0.248±0.013、0.329±0.018、0.283±0.016,p-STAT3分别为0.139±0.004、0.081±0.001、0.283±0.009、0.174±0.005.水蛭素组p-JAK2和p-STAT3的表达均低于模型组,组间差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 水蛭素可降低脑出血大鼠脑细胞凋亡,其保护机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关.
关键词： 水蛭素 脑出血 凋亡 JAK2/STAT3信号通路 大鼠 -
水蛭素合用阿司匹林与单用阿司匹林或氯吡格雷治疗短暂性脑缺血发作的随机对照研究
目的:探讨水蛭素合用阿司匹林治疗短暂性脑缺血发作(TIA)的疗效和安全性.方法:89 例TIA 患者随机分为3 组:(1)氯吡格雷组(n ＝29),口服氯吡格雷75 mg/d ;(2)阿司匹林组(n=30),口服阿司匹林100 mg/d ;(3)水蛭素合用阿司匹林组(n=30),口服水蛭素0.32 g ,3 次/d ,阿司匹林100 mg/d .观察治疗后90 d 内TIA 复发或进展为脑梗死的病例数,观察出血等不良事件发生率.结果:治疗后90 d内总的脑梗死发生率为4.5%,3 组之间无显著差异.水蛭素合用阿司匹林组和氯吡格雷组90 d 内的TIA 复发风险分别较单用阿司匹林降低69%(P ＝0.007 8)和65%(P＝0.017 0).总的出血发生率为2.25%,均发生在水蛭素合用阿司匹林组.结论:水蛭素合用阿司匹林可降低90 d 内TIA 复发率的效果优于单用阿司匹林,与单用氯吡格雷相似,但出血风险增高.
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增生性玻璃体视网膜病变的免疫组化研究及水蛭素的影响
目的:通过研究PVR形成过程中胞外基质和细胞增殖的规律,观察水蛭素预防和治疗PVR的疗效.方法:利用免疫组化技术观察模型组和水蛭素组玻璃体腔中Ⅳ型胶原(ⅣC)、纤粘连蛋白(FN)、层粘连层白(LN)和增殖细胞核抗原(PCNA)的分布和变化规律.结果:模型组FN、LN、ⅣC和PCNA早期大量分布于玻璃体腔内与内界膜相连,后期形成网状支架组织有细胞附于其上;水蛭素组FN、LN、ⅣC和PCNA也主要分布在玻璃体腔内,但阳性率明显低于模型组,无增殖膜形成.结论:水蛭素在PVR形成过程中具有抑制细胞增殖和胞外基质分泌的作用.
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水蛭素对兔增生性玻璃体视网膜病变闪光视网膜电图的影响
目的观察水蛭素对实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)闪光视网膜电图(flash electroretinograme,F-ERG)b波的影响.方法将日本大耳白兔34只随机分为正常对照组、模型对照组、生理盐水组、高剂量和低剂量治疗组,各组分别分为短期组和长期组.采用眼穿通伤加注血法制备PVR模型,各治疗组在造模同时分别将生理盐水配制的高、低剂量水蛭素注入玻璃体腔.分别在3天和28天检测闪光视网膜电图b波波幅.结果与模型对照组比较,高、低剂量治疗组均能提高闪光视网膜电图b波波幅(P＜0.01),高剂量治疗组优于低剂量治疗组(P＜0.05).结论水蛭素能改善实验性PVR的视网膜功能,对视网膜有保护作用.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 水蛭素 视网膜电图 -
水蛭素对外伤性增生性玻璃体视网膜病变增殖膜抑制机制的探讨
目的 探讨水蛭素抑制外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathv,PVR)增殖膜的作用及机理.方法 采用兔眼后段穿通伤制备的外伤性PVR模型,利用HE染色和免疫组化SP法结合图像分析半定量观察模型组、水蛭素组和生理盐水组玻璃体腔增殖膜的形态计量学、增殖细胞血小板源生长因子受体-β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)积分光密度(IOD)以及Ki67阳性细胞数的改变.用线性回归分析增殖膜面积与PDGFR-β、Ki67的量以及后两者之间的关系.结果 水蛭素组增殖膜的面积、周长、平均体积、体积密度、数密度低于观察模型组和生理盐水组(P＜0.05～0.01);水蛭素组Ki67阳性细胞数、PDGFR-βIOD明显低于观察模型组和生理盐水组(P＜0.05～0.01).模型组与生理盐水组之间以上指标差异无显著性(P＞0.05).水蛭素组增殖膜面积与PDGFR-β、Ki67的量呈正直线相关,前者r＝0.570,P＜0.01,后者r＝0.657,P＜0.01;PDGFR-β与Ki67的量呈正直线相关r＝0.719,P＜0.001.结论 水蛭素能抑制增殖膜增殖细胞PDGFR的活化及降低其下游分子Ki67的产生,推测通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路产生了抑制增殖细胞的作用.
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水蛭素对外伤性增生性玻璃体视网膜病变细胞外基质的影响
目的探讨水蛭素对外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferativ vitreoretinopathy,PVR)细胞外基质形成的影响。方法制造穿孔性眼外伤的动物模型，将水蛭素0.1ml(10单位)注入兔玻璃体腔内，对照组注入0.1ml生理盐水，用放射免疫法测定玻璃体腔内层粘连蛋白(Laminin，LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,ⅣC)的含量。结果在外伤后1周水蛭素组与对照组比较LN和ⅣC含量下降(P<0.05)。结论水蛭素对外伤性PVR细胞外基质的形成具有一定的抑制作用。
关键词： 水蛭素 增生性玻璃体视网膜病变 细胞外基质 -
凝血酶调控肾小球系膜细胞产生明胶酶A、B的分子机制研究
在体外培养条件下观察了凝血酶对人肾小球系膜细胞表达细胞外基质降解酶--明胶酶A(MMP-2)及明胶酶B(MMP-9)的调节作用.发现在无血清RPMI1640培养12h后,酶谱法显示系膜细胞培养上清液中MMP-2活性极低,未检测出明显的MMP-9酶解活性,但加入凝血酶后,可剂量依赖性地上调其MMP-2、MMP-9活性;RT-PCR结果表明,在无血清RPMI1640培养12h后,系膜细胞仅表达低水平MMP-9 mRNA,加入凝血酶后,MMP-9 mRNA转录水平随刺激浓度的增加而明显上调,但凝血酶对MMP-2 mRNA的转录过程无明显影响;凝血酶的上述作用可被其特异性阻断剂--水蛭素部分性地拮抗.说明凝血酶分别在基因转录和(或)蛋白质修饰水平调节人肾小球系膜细胞表达MMP-2、MMP-9,从而参与肾小球组织重构及炎症性损伤.
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聚乙二醇不同修饰度对水蛭素活性和半衰期的影响
目的:通过优化聚乙二醇(PEG)对水蛭素的化学修饰反应条件,得到具有生物学活性、半衰期延长的修饰产物.方法:通过改变化学反应中聚乙二醇与水蛭素的比例获得不同修饰度的产物;采用SDS-PAGE分析产物的修饰度;TH发色底物法分析聚乙二醇修饰前、后水蛭素的活性;用凝胶过滤层析对水蛭素的PEG修饰产物进行分离纯化;采用部分活化凝血酶时间(APTT)鉴定PEG修饰水蛭素在动物体内延长半衰期的效果.结果:化学反应中PEG与水蛭素摩尔比超过3∶ 1时,水蛭素被修饰后抗凝活性明显下降.凝胶过滤层析方法分离得到不同修饰程度的水蛭素.活性分析表明,连接1个和2个聚乙二醇分子的水蛭素保持了原有活性,并可不同程度地延长体内半衰期;连接3个以上PEG的水蛭素活性明显降低.结论:通过控制PEG对水蛭素的修饰反应条件,得到了具有生物学活性、体内半衰期延长的修饰产物.
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不稳定性心绞痛抗凝治疗中疏血通低分子肝素纳的疗效比较
UA(不稳定心绞痛)是一种临床工作中常见的心血管急、危、重症的一种.为控制其症状及其发展,减少或防止心肌梗塞的发生、抗凝是治疗过程中的重要环节.
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水蛭素对凝血酶诱导血管内皮细胞与中性粒细胞表达黏附分子的影响
目的:研究水蛭素对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞黏附分子(ICAM-1)和中性粒细胞表达膜整合素CD11b的影响.方法:用酶消化法获得HUVEC,密度梯度离心和重力沉降法分离人外周血细胞中性粒细胞.用酶联免疫吸附测定HUVEC在凝血酶、水蛭素作用下ICAM-1的变化,同时以免疫荧光流式细胞术检测中性粒细胞表达CD11b水平的变化.结果:与对照组相比,凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1显著增多,随时间延长,ICAM-1的表达递增,高峰在24 h.凝血酶使中性粒细胞CD11b的表达也显著上调,6 h平均荧光强度明显增加,随时间延长逐渐升高,高峰在24 h.水蛭素和肝素对凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1和中性粒细胞表达CD11b均有明显的抑制作用,且水蛭素抑制ICAM-1的表达强于肝素,尤其在ICAM-1表达的高峰期,对CD11b表达的抑制作用水蛭素与肝素无明显差别.结论:水蛭素可以明显抑制凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1和中性粒细胞表达CD11b.
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凝血酶诱导血管内皮细胞生长因子的表达及水蛭素的抑制作用
目的:研究凝血酶对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及重组水蛭素的作用.方法:将原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的第2～5代与凝血酶(4.0u*mL-1)共同孵育,按不同分组加入水蛭素(6.0u*mL-1)和肝素(6.0u*mL-1).在不同时间,通过MTT比色检测细胞生长活性,以检测细胞损伤程度;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法评价VEGF mRNA的表达.结果:凝血酶对血管内皮细胞损伤的作用从2h即可出现,24h开始减轻.凝血酶对VEGF的表达呈现双峰状:诱导后1h即有VEGF表达增高,2h减低后再次升高,24h达高.重组水蛭素可以有效地阻断凝血酶的上述作用.结论:凝血酶诱导HUVECs损伤并显著上调VEGF mRNA的表达,该过程可被水蛭素有效抑制.
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水蛭素的给药途径及其相关剂型研究进展
作为一种抗凝防栓良药,水蛭素(hirudin)特别是重组水蛭素的研究日益深入.针对水蛭素存在的一些缺陷,如半衰期短、临床应用时还存在一定的出血危险、预防动脉血栓的效果并不理想等,一些新的水蛭素衍生物、重组水蛭素模拟肽都在研发中,同时对水蛭素的不同给药途径/方式及新剂型的研究也在深入开展.现结合水蛭素的药动学/药效学特征、药理作用等方面的研究对水蛭素(包括重组水蛭素)的不同给药途径,尤其是非注射给药途径如口服、肺部、鼻腔、眼部给药等,以及相关剂型如大分子结合物注射给药缓释系统、壳聚糖-藻酸盐或PEG-藻酸盐微囊、鼻腔喷雾剂、缓释微丸、PLGA微球等的研究进展进行综述,以期为水蛭素的进一步临床应用提供科学依据.
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水蛭素滴眼液的研究
目的:制备水蛭素滴眼液,考察其稳定性及其对白内障防治作用.方法:以溶红细胞试验筛选促吸收剂,用正交试验(L9(33))确定水蛭素滴眼液的处方组成.选用硒性白内障和半乳糖性白内障大鼠动物模型考察水蛭素滴眼液对白内障的防治作用.结果:在pH7.4硼酸缓冲液中,以0.5%EDTA和0.5%壳聚糖作为该滴眼液的促吸收剂.该制剂在4℃冰箱和室温放置12个月,其抗凝活力,外观和pH值均无改变.本制剂对眼无刺激性,减轻晶状体浑浊程度,降低MDA含量,增大SOD活力,增加γ蛋白含量.结论:本制剂性质稳定,对硒性及半乳糖性大鼠白内障有显著的防治作用.
