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表皮生长因子受体抗体对人舌鳞癌细胞增殖和放射敏感性的影响
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种在细胞生存信号路径中起重要作用的跨膜酪氨酸蛋白因子,其过度表达与恶性肿瘤进展有关;采用EGFR单克隆抗体(EGFRmAb)竞争性的抑制其正常配体与受体的结合,可以抑制肿瘤的生长和发展.笔者选用人舌鳞癌Tca8113细胞系观察EGFRmAb对其增殖和放射敏感性方面的影响.
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c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用
我们采用c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染的方法,通过一系列实验,观察对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的抑制作用.
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MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达
我们采用RT-PCR法检测人舌鳞癌Tca8113细胞株的总RNA,以确定一些基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达状况,为进一步在口腔肿瘤组织中检测相关的基因以及开展肿瘤特异性免疫治疗和基因治疗奠定基础.
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二氢卟吩e6光动力学疗法对人舌鳞癌细胞株Tca8113的杀伤作用
目的:探讨二氢卟吩e6 (Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法:向体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞中加入Ce6,浓度分别为5、10、20、50和100μg/ml,孵育1.5h,予波长630nm半导体激光照射,照射的功率密度为100mW/cm2,能量密度分别为0.5、1、2、5、10和15J/cm2,继续孵育6h,用MTS比色法测定细胞存活率.结果:(1)不受光照的条件下,较低浓度Ce6(＜10μg/ml)与细胞共同培养而对细胞的毒性较小,Ce6浓度为20μg/ml时对细胞的杀伤率约为10％.(2)光照条件下,Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量正相关,呈浓度/剂量依赖性(P＜0.01).结论:Ce62PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性.
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iNOS抑制剂1400 W对人舌鳞癌CAL-27细胞株黏附力的研究
目的：探讨缺氧条件培养下诱导型一氧化氮合酶（iNOS）抑制剂1400W对人舌鳞癌CAL-27细胞株黏附能力的影响。方法 MTT法检测1400W对人舌鳞状癌细胞CAL-27黏附能力的影响。结果细胞黏附率与对照组比较明显下降(P<0.05)。1400W作用于人舌鳞癌CAL-27细胞后，可呈时间、剂量性依赖抑制人舌鳞癌黏附能力(P<0.05)。结论1400W可明显抑制人舌鳞癌的黏附能力。1400W对人舌鳞状细胞癌生长、侵袭、转移具有预防和潜在的治疗价值。
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COX-2抑制剂对人舌鳞癌裸鼠移植瘤血管生成素蛋白表达的影响
肿瘤进展依赖于新生血管形成,而血管的生成受血管生成促进因子和血管生成抑制因子共同调节.血管生成素(an-giopoictin,Ang)是近年才发现的一族分泌性蛋白分子,近期研究表明Angl,Ang2在肿瘤血管中都表达,但其作用有待进一步证实[1,2].
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尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E2释放和生存素表达的影响
大量研究已表明,环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)在大多数正常组织中不表达,而在大多数人类肿瘤中过表达,与多种肿瘤的发生发展密切相关[1].本实验通过研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利(Nimesulide,NIM)与人舌鳞癌Tea8113细胞前列腺素E2(PGE2)和生存素(survivin)表达间的关系,探讨NIM对人舌鳞癌细胞生物学行为影响的可能机制,为Nimesulide临床应用提供必要的理论依据.
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抑癌基因Lkb1超表达载体构建及其在人舌鳞癌细胞SCC-15中的生物活性分析
目的:了解抑癌基因LKB1对人舌鳞癌细胞的影响,初步探讨其相关通路机制.方法:构建LKB1真核表达载体,通过脂质体转染人舌鳞癌细胞系(SCC-15),利用RT-PCR、Western blot和流式细胞术来检测SCC-15中基因表达和细胞周期凋亡的变化.结果:LKB1在SCC-15细胞中mRNA水平上成功过表达约300倍,蛋白表达水平也显著上调;同时发现LKB1超表达对细胞周期起阻滞作用,并可上调p53、PTEN和TGF-β,同时下调VEGF的表达,差异均有统计学意义.结论:成功构建了LKB1真核表达载体,该基因在SCC-15细胞中超表达对细胞周期起阻滞作用,调控p53、PTEN、TGF-β和VEGF基因表达,可能参与调控p53和TGF-β等多种信号通路,为进一步研究LKB1基因在恶性舌鳞癌发病的机制和临床治疗的作用提供了重要实验依据.
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人舌鳞癌细胞SOCS1基因沉默对细胞增殖和化疗药物敏感性的影响
目的:在人舌鳞癌细胞中观察细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)沉默对细胞增殖及化疗药物敏感性的影响,探讨SOCS1作为舌鳞癌治疗靶点的研究.方法:western blot、PCR及定量PCR验证SOCS1干扰序列沉默人舌鳞癌细胞系CAL27中SOCS1的表达;MTT法检测舌鳞癌细胞对化疗药物敏感性的变化;细胞计数的方法观察细胞的增殖速度;采用流式细胞术的方法检测细胞周期的变化.结果:将SOCS1干扰序列转染CAL27细胞后,SOCS1 mRNA及蛋白表达水平均明显下降.沉默SOCS1表达后,化疗药物卡铂和紫杉醇对CAL27细胞的半数抑制浓度(IC50)均显著降低(P＜0.01);转染72 h后CAL27细胞数量较对照组显著减少(P＜0.05);SOCS1表达抑制后CAL27细胞G0/G1期细胞比例明显升高,而S期和G2/M期细胞比例明显减小,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:SOCS1表达抑制后,人舌鳞癌细胞株CAL27的增殖能力下降,并且对化疗药物的敏感性增强.
关键词： 人舌鳞癌 基因沉默 细胞增殖 化疗药物 细胞因子信号转导蛋白抑制因子 -
醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响
目的:研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人舌鳞癌Tca8113细胞生长和凋亡的影响.方法:应用四唑盐比色法(MTT)及流式细胞术(FCM)观察GAA对人舌癌Tca8113细胞形态变化、增殖以及细胞凋亡的作用.结果:MTT法检测显示,作用24～72 h,GAA对人舌鳞癌Tca8113细胞生长具有抑制作用；FCM检测结果显示30 μmol/L的GAA作用48 h、15 μmol/L的GAA作用72 h后,细胞凋亡率均较对照组升高(P＜0.05).结论:GAA能抑制人舌鳞癌Tca8113的生长并诱导细胞凋亡.
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人舌鳞癌细胞中SOCS1表达抑制对细胞侵袭及凋亡的影响
目的 研究细胞信号转导抑制因子1(SOCS1)基因表达抑制对人舌鳞癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响.方法 人舌鳞癌细胞系CAL27中SOCS1沉默效果采用实时定量PCR和Western blotting方法验证;应用Transwell侵袭小室模型观察舌鳞癌细胞的侵袭力;划痕试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平.结果 SOCS1干扰片段显著下调CAL27细胞SOCS1基因的蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05).沉默SOCS1表达后,干扰组和对照组细胞体外穿膜细胞数分别为(42±9)个和(91±17)个,迁移细胞数分别为(93±14)个和(184±3)个,干扰组均明显弱于对照组(P＜0.05);SOCS1表达抑制后CAL27细胞凋亡率(11.5±2.1)％明显大于对照组(1.3±0.4)％,且凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人舌鳞癌细胞株CAL27的SOCS1基因表达抑制后,体外侵袭、迁移能力下降,且促进舌鳞癌细胞凋亡.
关键词： 人舌鳞癌 细胞信号转导蛋白抑制因子1 侵袭 凋亡 迁移 -
无血清培养法分选舌癌侧群细胞及其特性的鉴定
目的探索人舌鳞癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分选方法.方法利用流式细胞仪分选传统含血清培养方法获得的人舌鳞癌细胞系Tca8113中的侧群细胞(SP),并与无血清培养方法分离出的侧群细胞(TSC-SP)进行形态学比较和平板形成克隆实验及成瘤实验的比较,富集并验证肿瘤干细胞相关亚群.结果人舌癌细胞系Tca8113中SP细胞的含量为0.2%,而Tca8113细胞系的细胞在无血清培养基中能够成活,3～5 d 后增殖并形成悬浮的肿瘤干细胞球,并随着培养时间的延长而肿瘤干细胞球体积增大和更加致密;而应用无血清悬浮法培养的Tca8113细胞系中TSC-SP细胞的含量为0.4%;SP与TSC-SP细胞在平板形成克隆实验的形成率均为100%;接种16 d后,104、105数量级的TSC-SP和SP接种裸鼠背部均出现瘤体.结论人舌鳞癌细胞系Tca8113中含极少量的SP细胞,利用无血清培养基可以达到富集肿瘤干细胞亚群的目的.
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高温对人舌鳞癌细胞中nm23-H1基因表达影响的实验研究
目的 研究高温治疗癌症与转移抑制基因nm23-H1之间的关系,探讨高温抑制肿瘤细胞侵袭及转移的机理.方法 对人舌鳞癌Tca8113细胞行体外43℃加温,采用电镜、免疫组织化学及流式细胞术等方法,分析加热后舌癌细胞超微结构的变化及nm23-H1表达量的改变.结果 加温使Tca8113细胞中细胞器增多,形态趋向良性分化.在加热43℃时随加热时间延长,细胞中nm23-H1表达量增加,在加热30 min时达到高,此变化不随加热后培养时间的增加而改变.结论 高温能使肿瘤细胞中nm23-H1表达量增加,并使细胞形态出现一定分化,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移能力.43℃加热30 min可能是临床治疗舌鳞癌的理想位点.
关键词： 人舌鳞癌 TCA8113细胞株 高温 nm23-H1基因 -
醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞ER基因甲基化和mRNA表达的影响
目的 通过醋酸棉酚(GAA)与Cal-27(人舌鳞癌细胞)的体外培养,评价醋酸棉酚对癌细胞ER基因的甲基化程度和mRNA的表达水平,从分子水平初步研究醋酸棉酚的抗肿瘤机制.方法(1)应用CCK-8法观察GAA对人舌癌Cal-27细胞生长的作用;(2)GAA作用Cal-27细胞48 h后,用甲基化特异性PCR法评价ER甲基化的程度;(3)应用实时荧光定量法(RFQ-PCR)检测Cal-27细胞在GAA作用48 h后ER mRNA的表达变化.结果(1)CCK-8法检测显示:GAA作用Cal-27细胞24、48和72 h后,细胞的生长受到抑制;(2)MSP检测结果显示:分别以5.0、10.0μmol/L的GAA作用Cal-27细胞48 h后,ER甲基化条带的平均光度低于对照组(<0.05);(3)RFQ-PCR检测显示:2.5、5、10μmol/L GAA作用Cal-27细胞72 h后,细胞中ER的mRNA的表达水平高于对照组(<0.05).结论GAA能抑制Cal-27细胞生长,同时能降低ER基因的甲基化水平,且能增强ER基因mRNA表达,这可能是GAA抗肿瘤作用的机制之一.
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钾离子通道阻滞剂4-AP 对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响
目的：检测4-氨基啶（4-AP）对 Tca8113细胞株增殖的影响。方法：采用 CCK-8法检测不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株12、24、48 h 后对细胞的增殖抑制率；流式细胞术（FCM）检测各组细胞周期变化。采用 SPSS19．0软件对数据进行统计学分析。结果：随着4-AP 浓度的增加和干预时间的延长，Tca8113细胞形态发生改变。在浓度5～100 mmol／L 范围内作用于细胞12～48 h，4-AP 浓度和时间依赖性地抑制了 Tca8113细胞的增殖（P ＜0．01）。不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株24 h后，G0／G1期的细胞所占的比例显著升高（P ＜0．01）；S 期细胞所占的比例显著降低（P ＜0．01）；4-AP 阻滞 Tca8113细胞株于G0／G1期。结论：4-AP 可能通过调控细胞周期抑制 Tca8113细胞株的增殖对细胞株分布有影响。
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醋酸棉酚对人舌鳞癌 Tca8113细胞hMLH1基因甲基化和mRNA表达的影响
目的：研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid，GAA）对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞hMLH1基因甲基化及mRNA表达的影响。方法：应用MTT法检测GAA对人舌癌Tca8113细胞增殖的作用。应用巢式甲基化特异性PCR（nMSP）检测Tca8113细胞在GAA作用48、72 h后hMLH1甲基化状态的改变情况。应用实时荧光定量法（RFQ-PCR）检测Tca8113细胞在GAA作用72 h后hMLH1 mRNA的表达变化。结果：GAA作用Tca8113细胞24、48和72 h后，细胞增殖受到抑制。30、15μmol/L的GAA作用Tca8113细胞48、72 h后，hMLH1甲基化条带的平均光度低于对照组（P＜0．05）。5、10、15和20μmol/L GAA作用Tca8113细胞72 h后，细胞中hMLH1 mRNA的表达水平高于对照组（P＜0．05）。结论：GAA能抑制Tca8113细胞增殖，能降低hMLH1基因的甲基化水平，增强hMLH1基因mRNA表达，这可能是GAA抗肿瘤作用的机制之一。
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Src激酶抑制剂PP2对人舌鳞癌Tca8113细胞侵袭和转移的抑制作用
目的 探讨Src激酶抑制剂PP2对人舌鳞癌Tca8113细胞侵袭、迁移能力的抑制作用.方法 采用5、10、20μmol/L Src激酶抑制剂PP2处理Tca8113细胞24 h,分别使用Transwell小室和划痕法,测定PP2对Tca8113细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 处理24 h后,5、10、20μmol/L Src激酶抑制剂PP2处理组的p-Src表达均较未加药组明显下降(P均<0.05);未加药组及5、10、20μmol/L PP2处理组的穿膜侵袭细胞数分别为(232.76±28.65)个、(186.53±21.34)个、(129.18±17.96)个、(37.82±12.41)个,迁移细胞数分别为(259.38±25.27)个、(193.45±20.18)个、(143.24±18.04)个、(32.94±14.39)个,细胞迁移率分别为(11.51±0.84)％、(8.06±0.51)％、(5.13±0.57)％、(2.18±0.12)％,整体差异均有统计学意义(F=73.852、85.687、48.157,P均=0.000),且与PP2剂量呈负相关.结论 Src激酶抑制剂PP2能够有效抑制人舌鳞癌细胞Tca8113侵袭和迁移能力,并且效果呈浓度依赖性,可能对治疗人舌鳞癌具有一定的临床价值.
关键词： Src激酶 抑制剂PP2 人舌鳞癌 Transwell试验 划痕法
