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联合转染P53、AS基因对K562细胞增殖的抑制作用
本研究观察联合转染p53、血管生成抑素(angiostattn,AS)基因对人K562细胞的抑制作用,并初步探讨其机制.用脂质体转染法将pVITRO2-hp53-hAS转染K562细胞17天后,以RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过MTT生长曲线、流式细胞术检测细胞周期来观察细胞生物学改变;用细胞免疫化学观察VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达差异.结果表明:转染成功后目的基因在细胞中获得稳定表达,目的基因转染组细胞上升幅度均比空载体转染组细胞低(p＜0.05),且双基因组细胞上升幅度(后1天的A290 nm值0.264±0.011)比p53组(后1天的A290 nm值0.652±0.039)和AS组(后1天的A290 nm值0.604±0.017)低(p＜0.05).转染后,VEGF和Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达加强.结论:联合转染p53和AS基因对K562细胞增殖有较强的抑制作用,且比单独转染组作用强,两者协同作用的机制可能是共同影响bcl-2、bax表达的途径.
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c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用
我们采用c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染的方法,通过一系列实验,观察对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的抑制作用.
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c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸转染对卵巢癌SKOV3细胞的作用
目的:探讨c-erbB-2与c-raf-1基因ASODN联合转染对人卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制.方法:实验分为7组:对照组、c-erbB-2正义治疗组、c-raf-1正义治疗组、c-erbB-2反义治疗组、c-raf-1反义治疗组、全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组.脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定与免疫组织化学检查,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别.结果:与对照组比较,全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组,转染72h的光密度值分别为0.151(P＜0.005)和0.073(P＜0.005),增殖抑制率分别达到了88.7%和94.5%,克隆形成率分别为19.4%(P＜0.01)和12.8%(P＜0.01),凋亡率分别为24.3%(P＜0.05)和31.5%(P＜0.01),同时明显地下调了c-erbB-2、c-raf-1、PCNA、c-jun、c-fos基因蛋白质的表达水平.结论:c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用优于单反义基因,其对卵巢癌细胞增殖的抑制作用可能通过下调c-erbB-2、c-raf-1、PCNA、c-jun、c-fos基因蛋白的表达水平实现.
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CD与bcl-Xs基因联合转染卵巢癌细胞株对5-氟胞嘧啶作用的影响
目的了解自杀基因胞嘧啶脱氨酶基因(cytosine deaminage,CD)及其前药5-氟胞嘧啶(5-fluorucytosine,5-FC)和bcl-Xs基因转移联合作用对卵巢癌细胞株生长的影响.方法以复制缺陷型腺病毒为载体将CD基因和bcl-Xs基因体外转染大鼠卵巢癌细胞株NUTU-19细胞,加入含5-FC的培养基.MTT法检测培养细胞吸光度值,计算细胞存活率.结果单一bcl-Xs基因转移及单一CD/5-FC系统作用对NUTU-19细胞的生长抑制作用均随病毒滴度的增加而增大;将两者联合作用于NU-TU-19细胞,其生长抑制率比两者单独使用时的生长抑制率之和更高,表现为协同效应(P＜0.0001).结论CD/5-FC系统与bcl-Xs基因转移联合使用对NUTU-19细胞的生长抑制具有协同作用.
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iNOS基因在胶质细胞中转录激活机制初探
目的:通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶:组成激活型MAPK激酶3(MKK3b)和MAPK激酶6(MKK6b),进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制.方法:MKK3b或MKK6b与接有荧光素酶(luciferase,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS-Luc);cAMP反应元件(CRE-Luc)和核因子кB(NFкB-Luc)联合转染C6胶质细胞株.结果:MKK3b/MKK6b能引起iNOS-Luc的激活,并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制.MKK可以诱导cAMP反应元件(CRE-Luc)介导的和核因子кB(NFкB-Luc)依赖的转录活性.显性抑制型(dominant negative,dn)CRE结合蛋白(dnCREB)和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)都是p38MAPK的靶向作用目标.结论:转染这两种转录因子产生相反的影响:dnCRE增强了iNOS-Luc的表达,而dnC/EBP则引起抑制作用,对CRE-Luc也具有相同的影响.
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联合转染VEGF和PCNA-ASODN对血管成形术后再狭窄的影响
目的 探讨联合转染血管内皮生长因子(VEGF)基因和增殖细胞核抗原反义寡核苷酸(PCNA-AsODN)对血管成形术后再狭窄的影响.方法 32只新西兰纯种大白兔随机平均分为对照组、转染VEGF组、转染PCNA-ASODN组、联合转染VEGF和PCNA-ASODN组(联合转染组).构建兔的股髂动脉球囊损伤术后再狭窄模型,以医用生物蛋白胶作为缓释载体,将300μgPCNA-ASODN或VEGF均匀喷布于处理血管段外膜.取损伤处理血管段标本,光学显微镜观察损伤血管内膜、中层结构和局部血栓形成情况;电子显微镜观察新生内膜内皮细胞及内膜、中膜,计算内膜/中膜(I/M)面积比与厚度比;采用RT-PCR法检测VEGF与PCNA基因的表达,采用免疫组化从蛋白质水平检测VEGF与PCNA的表达.结果 联合转染组与其他组相比,其血管内皮较完整、光滑,内膜轻度增生,平滑肌细胞排列规则,外膜无明显变化;I/M面积比与厚度比明显较低(P<0.05);RT-PCR检测VEGF表达水平明显升高(P<0.05);免疫组化检测血管组织中VEGF蛋白表达阳性率较高(P<0.05).结论 联合转染VEGF和PCNA-ASODN能更有效地抑制球囊损伤术后的血管内膜增生和再狭窄的发生.
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联合基因联合转染胶质瘤细胞皮下接种对机体免疫功能的影响
我们用腺病毒作载体,将B7-1基因和IL-2基因联合转染脑胶质瘤细胞后小鼠皮下接种,观察了其对机体免疫功能的影响.
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RNAi沉默c-erb、B-2、c-raf-1表达对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用
目的:探讨应用RNA干扰技术沉默c-erbB-2、c-raf-1基因表达,研究其对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用及其分子机制.方法:实验分成3组:空白对照组、正常对照组、c-erbB-2、c-raf-1dsRNA联合干扰组.脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、电镜检测、RT-PCR,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、细胞周期、mRNA及蛋白质表达有无差别.结果:c-erbB-2、c-raf-1dsRNA联合干扰组,转染72h的OD值为0.073(P＜0.005),增殖抑制率达到了94.5%,凋亡率为76.5%(P＜0.01),明显地下调c-erbB-2与c-raf-1基因mRNA及其蛋白质的表达水平.结论:在舌癌Tca8113细胞株增殖的抑制作用研究中,c-erbB-2、c-raf-1dsRNA联合干扰具有显著沉默c-erbB-2、c-raf-1基因表达.
关键词： 舌鳞癌 RNA干扰 转录后沉默(PTGS) 联合转染 -
联合转染t-PA基因与PCNA反义寡核苷酸防治血管重建术后再狭窄研究
近年来大量研究发现,血管重建术后再狭窄的发生率为30%～50%,且再狭窄的发生发展涉及多个基因异常表达;单纯调控某一个基因预防RS的发生不能达到预期效果.
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联合转染tPA基因和PCNA反义寡核苷酸抑制兔自体移植动脉再狭窄研究
目的研究血管局部联合转染组织型纤溶酶原激活物(tPA)基因和增殖细胞核抗原反义寡核苷酸(PCNA-ASODN)对自体移植动脉血管再狭窄的防治作用.方法 120只新西兰雄性白兔,按数字表法随机均分为4组(对照组、PCNA-ASODN组、tPA组、tPA+PCNA-ASODN组).将同一只兔的左、右髂外动脉(各1.0 cm长)对换移植,移植血管及吻合口缝线分别用pBudCE4.1/tPA和PCNA-ASODN液浸泡.于术后3、7、14、28及56 d取移植血管制片,显微镜下观察内膜增生情况,计算机图像分析测量其内膜面积和移植血管狭窄率,扫描电镜观察移植血管壁血栓形成情况,并分别用RT-PCR和免疫组织化学染色法检测tPA基因的mRNA表达率与PCNA阳性细胞百分率.结果术后3、7、14和28 d时,tPA组与tPA+PCNA-ASODN组的tPA基因mRNA表达率明显高于另2组(P＜0.01),PCNA-ASODN组、tPA组和tPA+PCNA-ASODN组PCNA阳性细胞百分率均明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01). tPA+PCNA-ASODN组和PCNA-ASODN组、tPA组各时相血管壁内膜增生比对照组明显减轻,内膜面积和管腔狭窄程度显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且tPA+PCNA-ASODN组又明显低于另2组(P＜0.05).扫描电镜观察显示,tPA组和tPA+PCNA-ASODN组血管壁只见少量血小板附着,未见血栓形成,而对照组血管壁可见大量血小板附着,且有血栓形成.结论血管局部联合转染tPA基因和PCNA-ASODN能有效抑制VSMC增殖和血栓形成,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄.
关键词： 组织型纤溶酶原激活物 增殖细胞核抗原 反义寡核苷酸 联合转染 再狭窄 -
Bcl-2与HER-2反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用
目的探讨Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸(ASODN)联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的干预作用及其分子机制.方法实验分成正常对照组、Bcl-2正义干预组、HER-2正义干预组、Bcl-2反义干预组、HER-2反义干预组、Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合干预组,共6组.脂质体转染后不同时间分别进行电镜观察、RT-PCR检测,以观察不同条件处理后各组细胞的凋亡、Bcl-2与HER-2基因表达有无差别.结果Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合干预组,转染后出现凋亡小体和各期凋亡细胞;Bcl-2基因表达下降36%,HER-2基因表达下降51%.联合转染作用优于单反义基因转染作用.结论Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合转染能够促进肿瘤细胞凋亡并下调Bcl-2与HER-2基因的表达.
