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人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性及其机制的初步研究
本研究确定人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性,并对其成瘤机制进行初步探讨.将SHI-1细胞接种至裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;取肿瘤组织行病理检测、R显带核型分析;RT-PCR检测MLL-AF6融合基因和VEGF基因的转录;明胶酶谱法检测培养上清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和MMP-2的表达;体外穿膜实验观察迁移能力.结果表明:注射SHI-1细胞的16只裸小鼠均于皮下出现肿块;瘤体由白血病细胞组成;注射的裸鼠中有MLL/AF6融合基因和VEGF基因的转录;在无血清培养上清中MMP-9和MMP-2的表达明显高于对照细胞;SHI-1细胞有较强的迁移能力,MMP-2的阻断抗体可显著抑制其体外迁移能力.结论:SHI-1在裸鼠体内有极高的成瘤率,其机制可能与p53基因的异常、高水平VEGF基因的转录、金属蛋白酶的高表达和较强的体内浸润能力有关.
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一株伴有t(6;11)(q27;q23)和p53基因异常的人单核细胞白血病细胞系SHI-1的建立及鉴定
目的建立人急性单核细胞白血病(AML-Msb)细胞系并研究其生物学特性.方法从1例AML-M5b患者白血病复发时的骨髓标本分离出单个核细胞,用液体培养法进行培养.采用瑞特染色、电子显微镜、细胞化学染色、流式细胞仪、R显带核型分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光原位杂交(FISH)、半固体甲基纤维素集落培养、裸小鼠致瘤实验、荧光定量PCR、DNA荧光染色法及支原体肉汤培养法、短串联重复序列(STR)-PCR、p53基因的PCR扩增产物测序、多色FISH(M-FISH)和3H-TdR掺入实验等方法对SHI-1细胞的生物学特性进行了鉴定.结果建立了1个可持续增殖的人单核细胞白血病细胞系SHI-1;形态学和免疫表型呈现典型的单核系特征;核型分析显示SHI-1细胞系有和患者复发时骨髓细胞完全相同的异常:46,XY,t(6;11)(q27;q23),del(17)(p11);RT-PCR检出MLL-AF6融合基因的转录本;FISH检测结果显示存在6号和11号染色体之间易位、MLL基因的重排和p53基因的缺失;PCR产物测序结果显示1个p53等位基因6号外显子发生点突变ATC→ACC集落培养显示SHI-1细胞具有较强的集落形成能力;皮下接种4只裸小鼠均形成实体肿瘤;荧光定量PCR提示无EB病毒感染;DNA荧光染色法和支原体肉汤培养法未检出支原体;M-FISH证实传代至2003年3月的SHI-1细胞除有t(6;11)、del(17)(p11)外,还有t(7;13)所致的衍生7号染色体、18单体和来自8号染色体的微小体;STR-PCR结果显示SHI-1细胞系确实来自患者原代白血病细胞;IL-4和IL-15可促进SHI-1细胞的增殖,IFN-y、TNFα、IL-2、PDGF和IL-7可抑制SHI-1细胞的增殖.结论SHI-1是1个伴有t(6;11)(q27;q23)和p53基因异常的裸小鼠高致瘤性人单核细胞白血病细胞系,为白血病研究提供了一个新的有价值的工具.
