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胰弹性蛋白酶对糖尿病尿微量白蛋白的影响
糖尿病肾病是糖尿病常见的慢性并发症之一,其早期临床表现为尿微量蛋白的增高,包括尿微量白蛋白(Alb)的改变.本研究通过观察弹性蛋白酶对糖尿病患者尿白蛋白的影响以研究其预防肾脏病变的功效.一、对象与方法1.观察对象:104例2型糖尿病患者均系本院住院及专科门诊病人,符合1985年WHO糖尿病诊断标准.其中男50例,女54例,年龄45～69岁,病程2个月～28年.所有患者均无急慢性肾炎、尿路感染、酮症酸中毒及近期应用肾毒性药物史.所有患者维持其原有抗糖尿病药物治疗,对有高血压者给予抗高血压药物(除血管紧张素转换酶抑制剂外)治疗.
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不同浓度弹力蛋白酶对建立兔腹主动脉瘤模型成瘤率的影响
目的 通过腹主动脉腔内低压力灌注猪胰弹力蛋白酶建立兔腹主动脉瘤模型,探索不同浓度猪胰弹力蛋白酶对兔腹主动脉成瘤率的影响.方法 新西兰雄兔50只,体质量(2.50±0.20)kg,随机分为5组:A组、B组、C组、D组、E组,每组各10只.A组经双腔导管注入生理盐水10μl,其余4组经双腔导管注入10μl浓度分别为1U/ml、10 U/ml、100 U/ml、200 U/ml的猪胰弹力蛋白酶,灌注保持7 min.术后第7天处死动物,分别于术前及术后第7天行腹主动脉彩超检查,观察灌注血管部位变化.结果 E组实验动物存活率较A组、B组、C组及D组明显下降(40％ vs 90％、90％、90％及90％).腹主动脉术后大直径随给予灌注浓度增加而增大.与术前大直径比较,A组及B组术后大直径未见明显扩张;C组、D组及E组术后大直径明显扩张;D组及E组较A组、B组及C组,术后第7天腹主动脉扩张率[(125.40±16.10)％及(248.20±5.60)％vs0％、(24.90±2.50)％及(43.90±7.69)％,P＜0.05]及成瘤率[100.0％及100.0％ vs 0％、0％及33.3％,P＜0.05]均明显升高.结论 高浓度猪胰弹力蛋白酶(100 U/ml)在低压力状态下较短时间灌注可成功建立兔腹主动脉瘤模型,且成瘤率高、死亡率低.
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弹性蛋白酶抑制剂对野百合碱诱导的肺动脉高压干预作用的研究
目的探讨丝氨酸弹性蛋白酶抑制剂ZD-0892对野百合碱性肺动脉高压的逆转作用.方法利用野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型.21天后,治疗组给予ZD-0892管饲,剂量按240 mg/(kg·d)分2次给予,模型组按同样剂量管饲ZD-0892的溶媒;而正常对照组管饲同样剂量的生理盐水.于实验第21、28、35天,使用荧光分光光度计检测肺动脉弹性蛋白的离解活性,通过右心导管法测定肺动脉压力;并在上述时间点,采用钡明胶灌注的技术对周围肺动脉进行组织病理学分析.结果注射野百合碱后的21天,大鼠肺动脉高压已经形成,肺动脉弹性蛋白酶的活性明显升高.经ZD-0892治疗1周后,肺动脉弹性蛋白酶的活性显著下降,肺动脉压力、周围肺动脉的肌化数、肌性肺动脉的中膜厚度也相应减低;治疗2周后,弹性蛋白酶的活性降低至正常水平,肺动脉压力及结构也随之恢复正常.结论内源性血管弹性蛋白酶在肺动脉高压的发生及发展中起重要作用,ZD-0892能有效地抑制其活性,进而可使野百合碱诱导的严重肺动脉高压完全逆转.
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唾液中白细胞蛋白酶抑制因子与弹性蛋白酶在牙周炎发展中的变化
目的 通过比较牙周炎发展不同阶段唾液中白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)浓度和弹性蛋白酶(elastase,EA)活性,分析机体在炎症发展不同阶段分泌的炎症相关蛋白在致炎、抗炎方面是否有差异,以及SLPI是否可以作为监测牙周炎发展和判断预后的实验室指标.方法 采集86例受试者(分成健康对照组17例、牙龈炎组18例,中度慢性牙周炎组31例、重度慢性牙周炎组20例)的非刺激性全唾液,用酶联免疫吸附测定法检测SLPI质量浓度,底物法检测EA活性；86名受试者中有15例中度或重度慢性牙周炎患者仅接受了牙周机械治疗(洁治、刮治和根面平整),在治疗前和治疗后4周均进行了唾液采集和临床指标的记录.结果 中度和重度慢性牙周炎组EA活性[分别为0.077 (0.060)和0.077(0.489)]显著高于健康对照组[0.058(0.028)]和牙龈炎组[0.058(0.024)] (P ＜0.05),而SLPI质量浓度在4个组中差异均无统计学意义[分别为1.031(1.300)、1.295 (1.162)、1.554(1.774)和1.944(4.734) μg/L,P＞0.05].SLPI与年龄呈负相关关系(r=-0.301,P＜0.05),与EA和临床指标之间无显著相关性.15例慢性牙周炎患者治疗前,唾液中SLPI质量浓度和EA活性分别是2.031 (2.449) μg/L和0.075(0.118),牙周机械治疗4周后分别降至1.405(0.659) μg/L和0.055(0.028),与治疗前相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 基础治疗后唾液中SLPI质量浓度和EA活性的变化可能反映牙周组织炎症的消退,唾液中SLPI在牙周炎症发展不同阶段无显著变化,SLPI的生成是否受到年龄的影响还需要进一步的研究证实.
关键词： 胰弹性蛋白酶 牙周炎 唾液 白细胞蛋白酶抑制因子 -
JAK/STAT信号通路在胰弹性蛋白酶诱导大鼠Kupffer细胞分泌促炎因子中的作用
目的 探讨JAK/STAT 信号通路在胰弹性蛋白酶(elastase)诱导Kupffer细胞分泌促炎症因子中的作用机制.方法 采用酶消化法和密度梯度离心法将提取的肝脏Kupffer细胞分为4组:A组(正常对照组,在培养基上清液中加入30μl/ml生理盐水);B组[用50ng/ml脂多糖(LPS)进行处理];C组(用50ng/ml LPS和1U/ml elastase进行处理);D组[用AG490(30nmol/)预先刺激0.5h后,再用LPS(50ng/ml)和elastase(1U/ml)处理].采用酶免疫吸附(EIJSA)法检测Kupffer细胞上清液中IL-6和TNF-α含量;Western blotting法检测细胞总蛋白中JAK2的表达情况.结果 与A组比较,B组在给予LPS刺激后,JAK2的表达及上清液中IL-6和1NF-α的含量均明显增加(P<0.01);C组在同时给予LPS和elastase刺激后,JAK2的表达显著升高,上清液中IL-6和TNF-α含量与B组比较亦显著增加(P<0.01);而D组在预先给予AG490处理后,JAK2蛋白的表达明显下降,上清液中IL-6和TNF-α含量也有不同程度降低,与C组比较差异有统计学意义(P<0.01),但与B组比较,各值仅有轻微变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论 抑制JAK/STAT通路的活化可下调elastase诱导Kupffer细胞分泌促炎症因子,有助于减轻急性胰腺炎时的炎症反应和肝损伤.
关键词： JAK/STAT通路 胰弹性蛋白酶 急性胰腺炎 巨噬细胞 细胞因子类 -
龈沟液微量样本中多种成分的检测
目的:以龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)样本为例,探寻微量样本中多种成分的检测方法.方法:根据酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的基本原理,确认待检测成分之间无交叉反应,样本与包被抗体在4 ℃下进行低温反应,重复使用同一样本.39份龈沟液来自4例轻、中度牙周炎患者,龈沟液洗提液分为两份,一份样本纳入A组,用ELISA方法先检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6),再用此样本检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β);另一份样本纳入B组,直接进行IL-1β检测.比较A组与B组IL-1β的检测结果.65份龈沟液样本选自9例来北京大学口腔医院修复科就诊患者,龈沟液洗提液分为两份,一份样本纳入C组,用ELISA方法先检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)后,再用此样本检测弹性蛋白酶;另一份纳入B组,直接进行弹性蛋白酶检测.比较A组与B组弹性蛋白酶的检测结果.结果:A和B组IL-1β光密度值分别为(0.5±0.4)和(0.5±0.4),差异无统计学意义(P=0.136),且高度相关(r=0.993,P=0.000);C和D组弹性蛋白酶吸光度值分别为(1.1±0.6)和(1.1±0.6),差异无统计学意义(P=0.943),且高度相关(r=0.979,P=0.000).结论:通过重复使用同一样本,可以达到用微量样本检测多种成分的目的.
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烟雾吸入对地鼠弹性蛋白酶性肺气肿的影响
为了进一步探讨慢性阻塞性肺疾患(COPD)的发病机制,复制地鼠胰弹性蛋白酶性肺气肿动物模型及附加烟雾吸入.观察1个月及3个月时肺组织形态,肺动脉压(PAP),血清丙二醛(MDA)含量;血清血管紧张素转换酶(ACE)活性及肺组织中前列腺素类(PGE2、TXB2、6-keto-PGF1α)物质含量的变化.结果发现单纯肺气肿组动物1个月,已经形成中度肺气肿,PAP、MDA、PGE2、TXB2均有显著增加(均P＜0.01).而ACE、6-keto-PGF1α显著降低(分别P＜0.01和P＜0.05).TXB2/6-keto-PGF1α比值有显著增加(P＜0.01).肺气肿3个月组较1个月,除MDA、6-keto-PGF1α及TXB2/6-keto-PGF1α有进一步变化外(P＜0.05、P＜0.01),其它指标无进一步变化.附加烟雾吸入较单纯肺气肿组,仅1个月时MDA、3个月时6-keto-PGF1α及1个月时TXB2/6-keto-PGF1α有进一步变化(P＜0.05),而ACE的下降反而回升(P＜0.05、P＜0.01)外,其它指标无明显改变.提示:气道内滴注胰弹性蛋白酶致使弹性蛋白酶与抗弹性蛋白酶之间失平衡是导致COPD的关键发病学环节.附加优质烟烟雾吸入在其发病学中仅占次要地位.
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甲基强的松龙和吲哚美辛对大鼠腹主动脉瘤的防治作用
目的:探讨甲基强的松龙、吲哚美辛对弹性蛋白酶灌注腹主动脉瘤模型的治疗作用.方法:48只雄性Wistar大鼠,随机分成3组.隔离1 cm的腹主动脉,向其内灌注2 mL(15 U)的弹性蛋白酶,恢复腹主动脉血流,关闭手术切口.术后进行如下处理.A组:腹腔内注射生理盐水(1mL/d).B组:腹腔内注射甲基强的松龙(1mg·kg-1·d-1,溶于1 mL生理盐水中).C组:腹部皮下注射吲哚美辛(1.6 mg·kg-1·-1,溶于1mL生理盐水中).于手术6,10d后分别处死动物,留取腹主动脉标本进行病理学检测.结果:A组均形成了典型的腹主动脉瘤,B组和C组腹主动脉瘤的形成均受到不同程度的抑制.结论::吲哚美辛和甲基强的松龙对弹性蛋白酶灌注腹主动脉瘤具有治疗作用.
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粪弹性蛋白酶-1试验在胰腺外分泌功能不全诊断中的意义
背景:粪弹性蛋白酶(FE)-1试验是一种间接检测胰腺外分泌功能的方法,简便、安全、无创且不受胰酶替代治疗的影响.目的:了解FE-1试验在胰腺外分泌功能不全诊断中的意义.方法:纳入21例胰腺外分泌功能不全患者(慢性胰腺炎13例,胰腺癌8例)和20例胰腺外分泌功能正常者(6例非胰腺相关疾病患者作为阴性对照,14名健康志愿者作为正常对照).以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测FE-1水平.结果:胰腺癌组、慢性胰腺炎组、阴性对照组和正常对照组间FE-1水平差异有统计学意义(P=0.003),其值依次递增.FE-1试验在慢性胰腺炎组、胰腺癌组和外分泌功能不全组中的敏感性分别为23.1%、62.5%和38.1%.特异性为100%.结论:FE-1试验对胰腺外分泌功能不全的诊断有一定意义,但尚需更多、更大样本的临床研究支持.
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胰腺癌和慢性胰腺炎中弹性蛋白酶3B(ELA3B)基因甲基化状态检测
DNA甲基化指DNA中的核苷酸与甲基基团共价结合,这是一种表观遗传修饰,在许多生物学过程中发挥重要作用.目的:探讨弹性蛋白酶3B(ELA3B)基因在胰腺癌中异常表达的潜在机制.方法:以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例胰腺癌、20例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中ELA3B mRNA的表达,以甲基化特异性PCR(MSP)检测该基因启动子区甲基化水平.结果:胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织ELA3B mRNA的表达率依次为46.7%、85.0%和100%.胰腺癌组织ELA3B基因启动子区甲基化指数(MI)显著高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织(7.02±6.31对2.33±0.97和3.31±0.75,P＜0.05),其中ELA3B mRNA表达阴性胰腺癌组织的MI显著高于ELA3B mRNA表达阳性组织(11.83±7.82对3.82±1.18,P＜0.05).结论:本实验首次检测了ELA3B基因在胰腺癌和慢性胰腺炎组织中的甲基化状态,首次揭示ELA3B基因启动子区高甲基化是导致该基因在胰腺癌组织中低表达的原因之一.
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囊性颈动脉瘤动物模型建立与研究
目的建立囊性颈动脉瘤的动物模型并研究动脉瘤的形成原因.方法选择新西兰白兔随机分成3组,采用胰弹性蛋白酶血管壁外法建立囊性动脉瘤,并通过血流动力学改变来分析与动脉瘤形成的关系.结果血管造影证实结扎对侧颈总动脉后,同侧颈总动脉上的成瘤率为100%,颈外动脉起点及颈外动脉分支起点处成瘤率为50%;不结扎对侧颈总动脉,同侧颈总动脉及颈外动脉起点上的成瘤率也为50%;其余成瘤率均为零.组织学检查显示实验侧动脉管壁破坏率为100%.结论胰弹性蛋白酶血管壁外法是建立囊性颈动脉瘤的有效方法之一,动脉管壁的结构改变和血流动力学变化是形成囊性动脉瘤的两个主要因素.
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离体肺气体容积和肺密度在肺气肿小鼠模型中的变化
目的 研究以猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱导小鼠肺气肿模型的离体肺气体容积(ELGV)和肺组织的密度变化规律,探讨ELGV和肺密度与肺气肿的相关性.方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机均分为对照组、PPE 3 d组和PPE 7 d组,气管内滴注PPE,建立肺气肿模型.以密度测量仪测量ELGV和肺组织密度,同时进行肺组织病理学观察及图像半定量分析.结果 与对照组相比,PPE 3 d组和PPE 7 d组肺湿重的差异均无统计学意义(P值均>0.05).对照组、PPE 3 d组和PPE 7 d组的ELGV分别为(0.217±0.011)、(0.271±0.016)和(0.420±0.034)cm3,PPE 3 d和PPE 7 d组显著高于对照组(P值均<0.01),PPE 7 d组又显著高于PPE 3 d组(P<0.01).对照组,PPE 3 d组和PPE 7 d组的肺组织密度分别为(0.606±0.016)、(0.541±0.033)和(0.368±0.032)g/cm3,PPE 3 d和PPE 7 d组显著低于对照组(P值均<0.01),PPE 7 d组又显著低于PPE 3 d组(P<0.01).结论 ELGV和肺组织密度与肺气肿的形态学改变密切相关,可以作为监测和评价肺气肿形态学改变的可行性指标.
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过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞CD11b及血浆弹性蛋白酶的检测
目的 探讨不同病期过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞表面黏附分子CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶活性的变化及其与疾病活动性的关系.方法 采用流式细胞仪检测12例过敏性紫癜患者活动期及缓解期外周血中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达的变化,并与12例正常人进行比较.采用ELISA法检测20例过敏性紫癜患者活动期及缓解期血浆弹性蛋白酶水平的变化,并与20例正常人进行比较.结果 活动期患者外周血中性粒细胞CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶水平明显高于缓解期(P均＜0.01);缓解期患者外周血中性粒细胞CD11b的表达与正常人对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);缓解期患者血浆弹性蛋白酶水平仍高于正常人对照组(P＜0.05).在活动期,外周血中性粒细胞CD11b的表达与血浆弹性蛋白酶水平呈正相关(r=0.73,P＜0.01);而缓解期两者无显著相关性(r=0.20,P＞0.05).结论 过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞处于激活状态,活动期较缓解期更明显.
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气管内一次性注入胰弹性蛋白酶复制兔肺气肿模型
目的:探索一种较为简单且能有效复制中、重度兔肺气肿模型的实验方法.方法:健康雄性新西兰白兔18只,随机均分为对照组和模型组.麻醉动物后,行气管插管(盲插),然后模型组气管内滴入胰弹性蛋白酶3ml(2000 U/kg),对照组气管内滴入生理盐水3 ml作为对照,测定各组肺功能,血气分析及取肺组织做光、电镜形态学观察,图文半定量分析.结果:实验第10天时,模型组有1只死亡.实验第42天,已形成明显中度全小叶型肺气肿,血气分析及肺平均内衬间隔(MIL)、平均肺泡数(MAN)与对照组比较有明显差异(P＜0.05),肺功能各项指标符合中度肺气肿.结论:气管内一次性注入胰弹性蛋白酶可简便而有效地复制兔肺气肿模型.
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人源抗菌肽LL-37衍生物GLL-37抗菌活性研究
目的:对人源抗菌肽LL-37的特定氨基酸残基进行替换,获得衍生抗菌肽GLL-37,以增强其抗蛋白酶解能力和抗菌活性.方法:肽LL-37和GLL-37均由化学合成.采用微量稀释法测定它们对6种革兰氏阴性和阳性菌的低抑菌浓度,以及在不同NaCl浓度下,它们对大肠埃希菌ATCC 25922的低抑菌浓度.将LL-37和GLL-37与弹性蛋白酶共孵育后,通过对共孵育产物进行蛋白聚丙烯凝胶电泳和抗菌活性测定,研究它们抗弹性蛋白酶水解的能力.结果:GLL-37较LL-37对弹性蛋白酶的水解作用更具抵抗力.在高浓度NaCl下,GLL-37也较LL-37具有更强的抗菌活性.结论:通过对LL-37氨基酸序列中特定氨基酸残基的替换,可增强其抗菌活性及抗弹性蛋白酶水解能力,获得的衍生肽GLL-37具有很高的研究开发价值.
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动脉瘤夹位置与动脉瘤模型的关系
目的 通过调整动脉瘤夹位置,提高弹性酶结合动脉瘤夹法兔囊状动脉瘤模型的成功率.方法 将50只雄性新西兰大白兔随机分为A、B、C组,采用弹性酶结合动脉瘤夹法建立兔囊状动脉瘤模型；A组20只采用弧形无创动脉瘤夹临时夹在右侧颈总动脉起始部及部分右侧锁骨下动脉上,B、C组各15只动脉瘤夹内侧缘分别夹在离起始段0.3 cm和1.0 cm处.造模第28天,磁共振血管成像(MRA)检查该模型动脉瘤形态,弹性纤维染色法观察其病理学变化.结果 造模第28天,MRA显示A组15只可见动脉瘤影,B组仅1只见窄颈动脉瘤,C组均未见明显动脉瘤影.A组与B、C组比较,P均＜0.01.A组动脉瘤壁增厚,内皮细胞消失；弹力纤维明显减少、甚至消失,外层胶原纤维致密增厚；炎性细胞减少.而B、C组为血管残端,组织学表现为内皮细胞及弹力纤维完整,少量炎性细胞浸润.结论 动脉瘤夹内侧缘的位置在右侧颈总动脉起始段,能明显提高弹性酶结合动脉瘤夹法兔囊状动脉瘤模型的成功率.
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TLR9-mRNA的表达与急性胰腺炎病人炎性因子变化的相关性研究
目的 探讨单核巨噬细胞TLR9-mTLR9-mRNA的表达与急性胰腺炎(AP)病人炎性因子变化的相关性.方法 24小时内被诊断为AP的病人40例,分别于第1,3,5天采集病人的EDTAK2抗凝静脉血,并检测胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子和抗炎细胞因子.分离外周血单个核细胞,采用逆转录聚合酶链式反应对TLR9-mRNA进行检测,分析其5天内表达变化规律.结果 所有AP病人在第1天、第3天、5天时单核巨噬细胞TLR9-mRNA对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).AP病人外周血单核巨噬细胞TLR9-mRNA的改变与胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子呈明显正相关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血单核巨噬细胞TLR9-mRNA的表达改变与AP病人炎性因子(胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子)表达上调有相关性,TLR9可能介导AP的发生与发展.
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犬颈动脉梭形动脉瘤模型的建立
目的 探讨建立犬颈动脉梭形动脉瘤模型的可行性.方法 10条比格犬随机分为2组,每条均在双侧颈动脉建模,每组建立10枚模型.A组采用球囊扩张联合胰弹性蛋白酶消化诱导,B组采用静脉囊移植法.以建模后4周造影显示模型大直径/正常颈动脉直径≥1.5,认为模型建立成功,对比梭形动脉瘤模型成功率.结果 A组1支血管破裂,剔出实验.2组手术成功率分别为90％和100％.4周血管造影随访显示A组建模成功2例,B组10例.建模的成功率分别为20％和100％.结论 静脉囊移植法建立的梭形动脉瘤模型具有良好的稳定性及可重复性,球囊扩张联合胰弹性蛋白酶消化诱导建立梭形动脉瘤模型有待进一步改进.
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弹力酶诱导的兔囊状动脉瘤早期形态学研究
目的研究猪胰弹力酶诱导的兔囊状动脉瘤的早期形态学及病理学变化特征.方法使用35只新西兰大白兔制作猪胰弹力酶诱导的囊性动脉瘤模型后,在第3、7、14、21、30天通过静脉血管造影观察动脉瘤模型的形态学动态变化特征及动脉瘤管腔内形态变化特征.结果静脉血管造影显示:术后第3、7、14、21天平均瘤颈、瘤高及瘤宽不断增大；术后第30天瘤颈、瘤高及瘤宽无明显增大.整体标本观察可见术后3d瘤腔内主要为血栓填充；术后7d瘤腔内血栓减少,瘤腔顶部血栓出现完整纤维膜;术后14～30d,瘤腔顶部血栓逐渐机化.结论猪胰弹力酶诱导的兔动脉瘤腔内初主要为血栓填充,随后血栓逐渐机化,瘤腔不断增大,在21d左右形态趋于稳定.
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扶正化瘀方对肝纤维化大鼠弹力蛋白酶表达的影响
迄今为止,对弹力蛋白酶是否参与肝纤维化的形成与降解过程知之甚少.细胞外基质(ECM)的弹力纤维随着肝纤维化的进展逐渐增加[1].我们曾报道正常大鼠肝细胞、肝窦壁内皮细胞等均有弹力蛋白酶mRNA表达[2].本研究进一步观察了弹力蛋白酶在肝纤维化组织中的表达以及抗肝纤维化药扶正化瘀方对弹力蛋白酶表达的影响.
