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抗菌肽LL-37抑制呼吸道合胞病毒复制的核心功能区的研究
目的 研究抗菌肽LL-37抑制呼吸道合胞病毒复制的核心功能区.方法 ①根据LL-37的氨基酸序列,合成从N-端到C-端的系列短肽P1到P6.②RSV感染Hep-2细胞,同时分别加入LL-37和合成的不同短肽,用实时定量聚合酶链反应检测RSV N基因的表达,分析LL-37和各种短肽对RSV复制的影响.③Hep-2细胞分别加入LL-37和不同的短肽,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中趋化因子RANTES、IL-8及MCP-1的表达水平.结果 ①根据LL-37合成的N-端短肽不具有抑制RSV复制的功能(P＞0.05),但不同区段的C-端短肽可不同程度地抑制RSV的复制(P＜0.05或P＜0.01).②LL-37可诱导趋化因子IL-8、RANTES和MCP-1的表达(P＜0.05),但C端短肽P6对上述趋化因子的表达没有影响(P＞0.05).结论 由LL-37的C-端22氨基酸残基组成的区域是抑制RSV复制的核心功能区.LL-37可诱导趋化因子IL-8、RANTES和MCP-1的表达,但C-端短肽不能诱导趋化因子的表达.
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血浆肝素结合蛋白在新生儿脓毒症早期诊断中的应用价值
目的 探讨血浆肝素结合蛋白(HBP)对早期诊断新生儿脓毒症(NS)及脓毒症严重度分级的临床价值.方法 回顾性研究方法,选取2016年12月至2017年8月在湖南省儿童医院NICU住院的一般脓毒症患儿39例、严重脓毒症患儿37例、脓毒性休克患儿16例分别作为相应试验组,并选取同时期在各新生儿科住院的局部感染患儿34例及非感染患儿35例分别作为相应对照组;分别测定各组患儿入院时的HBP、降钙素原(PCT)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平并采用非参数统计方法比较各指标组间差异的显著性;运用受试者工作特征曲线(ROC)比较各指标对感染和脓毒症诊断的效能.结果 一般脓毒症组、严重脓毒症组及脓毒性休克组HBP(H=91.764,P<0.01)、PCT (H=51.757,P<0.01)及hs-CRP(H=28.418,P<0.01)水平均显著高于局部感染组和非感染组,差异有统计学意义;严重脓毒症[52.35(33.65,88.15)(ng/ml)]和脓毒性休克组[73.55(60.61, 145.51)(ng/ml)]血浆HBP水平明显高于一般脓毒症组[34.12(23.04,41.79)(ng/ml)],差异有统计学意义(H=24.092,P<0.01);三组患儿血清PCT 与hs-CRP水平差异无统计学意义[(HPCT=1.909,Hhs-CRP=0.292),P>0.05];HBP诊断新生儿脓毒症和新生儿感染的曲线下面积(AUC)分别为0.885和0.904,均高于PCT和hs-CRP;当诊断阈值(cut-off值)取19.8 ng/ml时,HBP诊断新生儿感染的敏感度和特异度分别为85.7%和82.9%,当cut-off值取28.0 ng/ml时,HBP诊断新生儿脓毒症的敏感度和特异度分别为80.4%和88.4%.结论 HBP在新生儿脓毒症早期诊断及临床分级方面优于PCT和hs-CRP,可能具有较好的临床应用价值.
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胸腔积液肝素结合蛋白检测对肺炎旁胸腔积液鉴别诊断的临床价值
目的 探讨胸腔积液肝素结合蛋白(HBP)检测在胸腔积液患者中对肺炎旁胸腔积液(PPE)鉴别诊断的应用价值.方法 病例对照研究.收集2018年2至7月在衢州市人民医院住院的189例胸腔积液患者的胸腔积液标本,其中肺炎旁胸腔积液(肺炎组)72例,结核性胸腔积液(结核组)24例,恶性胸腔积液(恶性组)46例,其他原因引起的漏出液(漏出液组)47例.对所有胸腔积液进行常规分析和胸腔积液乳酸脱氢酶(LDH)、胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)、胸腔积液总蛋白(TP)检测,并采用酶联免疫吸附法测定胸腔积液HBP水平.各组总体水平差异采用Kruskal-Wallis H检验,方差齐性多组比较采用单因素方差分析,方差不齐多组比较采用LSD检验,计数资料比较采用卡方检验.绘制ROC曲线评价胸腔积液中HBP、LDH、ADA、TP水平在PPE鉴别诊断中的应用.结果 胸腔积液HBP浓度在肺炎组为316.1(99.5,399.8)ng/ml,结核组为64.7(18.6,96.8)ng/ml,恶性组15.2(8.4,33.3)ng/ml,漏出液组14.1(6.5,23.0)ng/ml.肺炎组胸腔积液HBP水平与其他3组之间比较,差异有统计学意义(H=120.3,P<0.05).当cut-off值为64.2 ng/ml时受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.953,灵敏度为88.9％(64/72),特异度为89.7％(105/117),阳性预测值为84.2％(64/76),阴性预测值为92.9％(105/113),总符合率为89.4％(169/189).结论 胸腔积液HBP水平诊断效能高,能较好区分胸腔积液患者的PPE,可能是PPE鉴别诊断的生物标志物.
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肝素结合蛋白和降钙素原及C反应蛋白在脓毒症早期诊断中的价值比较
目的 探讨肝素结合蛋白(HBP)在脓毒症诊断及分级中的临床应用价值.方法 采取回顾性研究方法,选取2014年8月至2016年11月在温州医科大学附属第三医院和温州市中心医院ICU就诊的脓毒症患者31例、严重脓毒症患者16例、脓毒性休克患者12例及局部感染非脓毒症患者37例,测定各组患者HBP、降钙素原(PCT)及C反应蛋白(CRP)水平,利用非参数检验分析比较各组间检测指标的差异;通过ROC曲线分析各检测指标对脓毒症的检测效能;Spearman相关检验分析HBP、PCT及CRP与多项临床及实验室指标的相关性.结果 HBP在严重脓毒症[(100.65±58.82)ng/ml与(31.86±36.87)ng/ml,Z=-3.856,P<0.05;(100.65±58.82)ng/ml与(24.96±17.49)ng/ml,Z=-3.556,P<0.05]及脓毒性休克[(148.28±99.73)ng/ml与(31.86±36.87)ng/ml,Z=-4.432,P<0.05;(148.28±99.73)ng/ml与(24.96±17.49)ng/ml,Z=-4.157,P<0.05]患者中升高,CRP[(154.64±62.90)mg/L与(92.56±67.49)mg/L,Z=-2.749,P<0.05;(154.64±62.90)mg/L与(79.21±51.80)mg/L,Z=-3.218,P<0.05]及PCT[(32.86±39.93)ng/ml与(2.70±6.24)ng/ml,Z=-3.395,P<0.05;(32.86±39.93)ng/ml与(4.21±14.94)ng/ml,Z=-4.092,P<0.05]仅在脓毒性休克患者中升高,与对照和脓毒症组相比,差异有统计学意义;HBP的ROC曲线下面积大(AUC=0.687)且具临床诊断意义(P<0.05),佳诊断界值(18.58 ng/ml)时具有较优检测敏感度(0.729);HBP(APTT:r=0.244,P=0.016;PT:r=0.351,P<0.001;INR:r=0.314,P=0.002;D二聚体:r=0.334,P=0.001;血乳酸:r=0.394,P<0.001)、CRP(APTT:r=0.271,P=0.008;PT:r=0.348,P=0.001;INR:r=0.264,P=0.009;D二聚体:r=0.257,P=0.012;血乳酸:r=0.329,P=0.001)及PCT(APTT:r=0.375,P<0.001;PT:r=0.523,P<0.001;INR:r=0.535,P<0.001;D二聚体:r=0.254,P=0.013;血乳酸:r=0.422,P<0.001)与凝血功能、血乳酸呈正相关.结论 HBP在脓毒症临床诊断及分级中具有一定参考意义,有可能成为严重脓毒症及脓毒性休克早期诊断的生物标记物.
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肝素结合蛋白和正五聚蛋白3在新生儿细菌感染性疾病诊断中的价值
目的 探讨肝素结合蛋白(HBP)和正五聚蛋白3(PTX3)对新生儿细菌感染性疾病的临床诊断价值.方法 采用回顾性分析方法,选取2017年3月至11月武汉大学人民医院新生儿科30例新生儿脓毒症(脓毒症组)、84例局部细菌感染新生儿(一般感染组)及50例单纯高胆红素血症新生儿(对照组).一般感染组和脓毒症组的114例细菌感染新生儿中,有39例合并休克(休克组),75例未合并休克(非休克组).分别采用免疫比浊法和双位点夹心酶联免疫吸附实验测定HBP和PTX3水平,并收集血清降钙素原(PCT)及全血白细胞(WBC)计数等实验室检查数据.非正态分布数据的比较采用非参数检验,各指标诊断性能比较采用受试者工作特征曲线(ROC),各指标相关性分析采用Pearson相关系数.结果 脓毒症组、一般感染组和对照组HBP值分别为(64.41±78.51)ng/ml、(47.16±50.59)ng/ml、(31.97±20.76)ng/ml,PTX3值分别为(2.23±1.44)ng/ml、(1.76±0.94)ng/ml、(1.26±0.66)ng/ml,PCT值分别为(31.92±36.65)ng/ml、(7.72±9.28)ng/ml、(1.87±5.02)ng/ml.脓毒症组PTX3、PCT水平显著高于一般感染组(Z=3.74,Z=5.01,P均<0.05);也显著高于对照组(Z=3.98,Z=5.20,P均<0.05).脓毒症组HBP水平高于一般感染组,但差异无统计学意义(Z=1.16,P>0.05);也高于对照组,差异有统计学意义(Z=2.37,P<0.05).休克组PTX3和PCT水平显著高于非休克组(Z=2.20,Z=3.70,P均<0.05);休克组HBP水平高于非休克组,但差异无统计学意义(Z=0.37,P>0.05).HBP、PTX3、PCT诊断新生儿细菌感染性疾病曲线下面积(AUC)分别为0.683、0.802、0.869;HBP、PTX3、PCT三者联合诊断优于单指标诊断,AUC大为0.910.PTX3与PCT呈正相关(r=0.242,P<0.05).结论 PTX3和PCT能有效辅助临床诊断新生儿细菌感染性疾病,联合PTX3、PCT和HBP诊断优于单指标诊断.
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抗菌肽hCAP18在结肠癌患者血清中的表达及其临床应用价值
目的 探讨结肠癌患者血清中抗菌肽人类阳离子抗菌蛋白18 (hCAP18)水平的变化及其在结肠癌辅助诊断和预后中的价值.方法 采用病例对照研究.选择同济大学附属同济医院胃肠外科2014年1月至2015年6月结肠癌患者标本68例及同期体检科40名健康对照者进行研究,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中hCAP18的浓度,并比较结肠癌患者术前和术后血清中hCAP18的浓度变化情况;免疫组化检测结肠癌组织中的hCAP18的表达;采用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)——酶联免疫吸附试验(ELISA)法和软琼脂克隆形成实验检测hCAP18对结肠癌细胞增殖能力的影响.通过分析受试者工作特征曲线(ROC)判断hCAP18浓度在结肠癌诊断中的敏感度、特异度.采用t检验和单因素方差分析等方法进行统计学分析.结果 血清hCAP18水平在结肠癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者中分别为(0.46 ±0.18) mg/L、(0.65 ±0.45) mg/L、(1.26 ±0.68)mg/L、(2.35±1.06) mg/L,均值为(1.16±0.88)mg/L;显著高于健康对照组的(0.19±0.07) mg/L,差异有统计学意义(t =5.290,P＜0.05);在结肠癌患者肿瘤切除后30 d血清中hCAP18的浓度为(0.26±0.06)mg/L,明显低于术前均值(1.16±0.88) mg/L,差异有统计学意义(t=3.971,P＜0.05);免疫组化结果显示与癌旁组织相比,结肠癌组织中hCAP18高表达;BrdU-ELISA法检测的结果显示,用浓度为0.05 ～1.00 mg/L的hCAP18在处理后,HCT116和SW480细胞的增殖能力明显增加;软琼脂克隆形成实验显示结肠癌细胞HCT116和SW480经1.00 mg/L hCAP18处理后,HCT116细胞克隆簇大小由(145.40±35.20) μm增加到(370.80±32.65) μm,差异有统计学意义(t=10.50,P＜0.05),数量分别由(8.50±2.30)个增加到(42.80±6.60)个,差异有统计学意义(t=3.945,P＜0.05);SW480细胞克隆簇的大小由(101.00±27.10) μm增加到(369.00±27.29) μm,差异有统计学意义(t=15.58,P＜0.05),数量分别由(6.20±1.70)个增加到(46.00±7.20)个,差异有统计学意义(t=4.775,P＜0.05);血清hCAP18检测结肠癌的ROC曲线下为0.93(95％ CI=0.859 ～0.999),对结肠癌诊断的敏感度和特异度分别达到91.17％和80.00％,优于结肠癌肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)[0.78(95％口=0.699 ～0.933)]对结肠癌的辅助诊断效能,差异有统计学意义(t=4.519,P＜0.05).结论 血清hCAP18检测对结肠癌的辅助诊断具有良好的敏感度和特异度,有可能成为一项潜在的检测指标应用于结肠癌的无创诊断和病情检测;hCAP18能促进结肠癌细胞的增殖,在结肠癌的进展过程中扮演着重要的作用.
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炎性因子在小儿脓毒症早期的临床对比初探
目的 探讨脓毒症诊断前不同时间点的炎性因子[肝素结合蛋白(HBP)、降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]的临床价值对比.方法 采取回顾性研究模型,选取2014年1月至2016年10月舟山市妇幼保健院儿科病房小儿脓毒症患者24例,平均年龄(4.08±1.68)岁,男性16例,女性8例.收集患儿诊断脓毒症时刻的前72 h(A组)、前48 h(B组)、前24 h(C组)血浆;同期选取22名无器质性疾病的小儿健康体检者抽取血浆作为正常对照组,平均年龄(4.07±1.58)岁,男性12名,女性10名.酶联免疫吸附法检测肝素结合蛋白(HBP)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10),免疫荧光法检测降钙素原(PCT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP).采用重复测量的方差分析和多重比较检验各时间点的差异,受试者工作特征曲线分析其诊断价值.结果 HBP在正常对照组、A组、B组、C组的血浆水平分别为(9.69±1.30) μg/L、(12.82±2.03) μg/L、(15.46±1.02) μg/L、(18.60±1.10)μg/L,HBP的B组、C组时间点分别高于A组和B组水平(t=5.62,P＜0.01;t=10.25,P＜0.01),A、B、C组均高于正常对照组(t=6.27,P＜0.01;t=16.82,P＜0.01;=25.16,P＜0.01).受试者工作特征曲线(ROC曲线)显示,HBP在A组的诊断效能(AUC)分别为0.823,均高于其他4种炎性因子(IL-6、IL-10、PCT、hs-CRP)(Z=2.41,P＜0.01;Z=2.02,P＜0.05;Z=0.38,P＞0.05;Z=0.32,P＞ 0.05),HBP在B组的诊断效能(AUC)分别为0.898,均高于其他4种炎性因子(IL-6、IL-10、PCT、hs-CRP)(Z =0.43,P＞0.05;Z =0.46,P＞0.05;Z =0.26,P＞0.05;Z=0.57,P＞0.05),PCT在C组的诊断效能(AUC)为0.941,高于其他4种炎性因子(IL-6、IL-10、HBP、hs-CRP)(Z=0.12,P＞ 0.05;Z=0.08,P＞ 0.05;Z=0.03,P＞0.05;Z=0.10,P＞0.05).结论 HBP具有较宽的诊断窗口期,可作为小儿脓毒症的早期预测指标之一.IL-6、IL-10、PCT及hs-CRP在小儿脓毒症的不同时期也分别具有一定的诊断价值.
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肝素结合蛋白与降钙素原和C反应蛋白及白细胞计数对呼吸道局部细菌感染诊断的应用价值
目的 探讨血液中肝素结合蛋白(HBP)、降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)水平以及白细胞(WBC)计数在呼吸道局部细菌感染中的诊断价值.方法 采用前瞻性研究模型,选取2015年10月至2017年3月在中南大学湘雅三医院收治的呼吸道细菌感染患者66例,呼吸道非细菌感染患者37例,同时选取同一时期健康体检者39名作为健康对照组.分别采用双位点夹心酶联免疫吸附试验、荧光免疫法和免疫比浊法测定样品中HBP、PCT及CRP水平;采用血细胞分析仪和其配套试剂检测外周血WBC,统计分析各组4个指标的差异,正态分布计量资料比较采用t检验,方差齐性的非正态分布计量资料比较采用单因素方差分析,方差不齐的非正态分布计量资料比较采用秩和检验.建立受试者工作特征曲线并计算曲线下面积以分析HBP、PCT、CRP及WBC计数对呼吸道局部细菌感染诊断的价值.结果 呼吸道细菌局部感染组患者、非细菌感染组患者和健康对照组中HBP值分别为36.30 (7.78 ～ 89.36) ng/ml、5.57 (4.37～8.23) ng/ml、2.84 (1.53～6.51) ng/ml,PCT值分别为0.08 (0.04 ～0.83) ng/ml、0.09 (0.04～0.30) ng/ml、0.04(0.03～0.08)ng/ml,CRP值分别为56.20(19.33 ～76.23) mg/L、34.40 (2.15～83.95) mg/L、(2.20 ±-0.99)mg/L,WBC计数值分别为(10.59±4.58)×109个/L、8.40 (5.80～11.88) ×109个/L、(6.14±1.31)×109个/L.呼吸道细菌感染组患者血液HBP水平与非细菌感染组、健康对照组比较,差异均有统计学意义(Z=-4.828,P＜0.001;Z=-5.685,P＜0.001).细菌感染组患者血液PCT、CRP及WBC计数水平与非细菌感染组比较,差异无统计学意义(F=0.045,P＞0.05;F=0.100,P＞0.05;F=2.417,P＞0.05);和对照组比较,差异有统计学意义(Z=-2.881,P＜0.05;Z=-6.595,P＜0.001;t=6.499,P＜0.001).HBP、PCT、CRP及WBC计数诊断呼吸道局部细菌感染曲线下面积分别为0.89、0.69、0.95及0.85,HBP鉴别诊断细菌感染和非细菌感染曲线下面积为0.80.结论 HBP能够快速有效地辅助诊断呼吸道局部细菌感染,其鉴别诊断价值优于PCT、CRP、WBC计数等常用手段.
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人源抗菌肽LL-37衍生物GLL-37抗菌活性研究
目的:对人源抗菌肽LL-37的特定氨基酸残基进行替换,获得衍生抗菌肽GLL-37,以增强其抗蛋白酶解能力和抗菌活性.方法:肽LL-37和GLL-37均由化学合成.采用微量稀释法测定它们对6种革兰氏阴性和阳性菌的低抑菌浓度,以及在不同NaCl浓度下,它们对大肠埃希菌ATCC 25922的低抑菌浓度.将LL-37和GLL-37与弹性蛋白酶共孵育后,通过对共孵育产物进行蛋白聚丙烯凝胶电泳和抗菌活性测定,研究它们抗弹性蛋白酶水解的能力.结果:GLL-37较LL-37对弹性蛋白酶的水解作用更具抵抗力.在高浓度NaCl下,GLL-37也较LL-37具有更强的抗菌活性.结论:通过对LL-37氨基酸序列中特定氨基酸残基的替换,可增强其抗菌活性及抗弹性蛋白酶水解能力,获得的衍生肽GLL-37具有很高的研究开发价值.
