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颅内动脉粥样硬化血管壁中人巨细胞病毒即刻早期基因的表达
目的通过检测颅内动脉血管壁中人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(IE)基因的表达,研究HCMV感染与动脉粥样硬化的相关性.方法选取35份有动脉粥样硬化的死亡病例颅内动脉和20份死亡病例的正常颅内动脉,分别应用原位杂交和PCR方法检测动脉管壁中HCMV IE基因DNA.结果两种方法均发现动脉粥样硬化组HCMV IE基因检出率较正常对照组高,二者相比差异有显著意义(P=0.018,P=0.032),而且Ⅲ～Ⅳ级动脉粥样硬化的检出率高于Ⅰ～Ⅱ级动脉粥样硬化(P=0.027,P=0.009).结论颅内动脉粥样硬化的血管壁中有HCMV存在,因此推测HCMV感染与颅内动脉粥样硬化的病理过程及病变程度有关.HCMV IE基因的表达可能是血管组织病变的早期改变.
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腺病毒早表达蛋白1A对大鼠细胞间黏附分子1的影响
目的 探讨腺病毒早表达蛋白1A(E1A)对脂多糖、肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠肺泡上皮细胞炎症介质细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及其机制.方法 致炎因素脂多糖和TNF-α作用于稳定表达E1A的大鼠肺泡上皮细胞、对照质粒转染细胞和正常大鼠肺泡上皮细胞,采用流式单抗和RT-PCR法分析ICAM-1蛋白水平和mRNA水平的表达情况;转录因子报告系统和凝胶电泳迁移变动分析(EMSA)研究核因子(NF-κB)、活化蛋白1与ICAM-1基因上游调控元件结合的情况.结果 (1)与对照质粒组和正常细胞组相比,E1A阳性组细胞经10 mg/L脂多糖和10 pg/L TNF-α刺激后,ICAM-1蛋白表达(任意荧光强度)为109±15和185±20,比对照质粒转染组细胞(60±13,86±22)和正常CCL149细胞(61±20,89±12)明显升高(F值分别为14.46、73.64,P均＜0.01);(2)RT-PCR显示E1A阳性组细胞ICAM-1 mRNA的表达在脂多糖、TNF-α刺激后3 h和6 h均比对照质粒转染组细胞明显增高;(3)转录因子荧光素酶报道系统及EMSA结果显示,E1A组在脂多糖、TNF-α作用前后,细胞核内NF-κB与ICAM-1基因上游调控序列结合形成的阻滞条带强度均明显高于对照组;而活化蛋白1与ICAM-1基因上游调控序列特异性结合形成的阻滞条带在E1A阳性组和对照组在刺激因素作用前后比较无明显差异;(4)在脂多糖作用后,NF-κB抑制剂N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)可使E1A组ICAM-1蛋白表达强度下降(109±15,50±10);TNF-α作用后E1A组ICAM-1蛋白表达强度也明显下降(185±20,55±13),TPCK处理前后比较,差异有统计学意义(t值分别为8.4、12.2,P值分别为0.01和0.00).结论 E1A可明显上调炎症介质ICAM-1的表达,上调转录因子NF-κB、活化蛋白1的活性;E1A上调ICAM-1的表达主要通过NF-κB实现.
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腺病毒E1A蛋白对核因子-κB活化的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预作用
目的 探讨腺病毒E1A蛋白(E1A蛋白)对转录因子核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预作用.方法 构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×10~5个细胞,试验重复3次.采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,NAC进行干预,荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-KB和AP-1转录活性的变化,Western blot法检测核因子-κB和AP-1蛋白的表达.两个样本均数的比较采用t检验,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用ISD-t检验,结果荧光素酶活性(相对光单位):刺激前E1A组为9 698±98,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为101 195±234和170 385±443,均明显高于对照组(2 077±107、67 846±332和95 743±211);刺激前转染AP-1的E1 A组为9 034±78,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为26 343±398和31 731±332,均明显高于对照组(2 845±93、10 772±432和11 005±556).细胞内核因子-κB蛋白表达(积分吸光度值):刺激前E1A组分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9～89.9±1.6和94.1±1.9～99.8±1.6,均明显高于对照组(刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8～80.8±3.6和73.4±4.9～83.2 4±6.7);在脂多糖和TNF-α作用后E1A组细胞核内AP-1蛋白表达的积分吸光度值(72±4～73±4和83±4～86±8)与对照组(71±4～74±7和84±6～86±6)无明显差别.给予NAC预处理后再用脂多糖和TNF-α刺激,E1A组核因子-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.98±0.20和1.90±0.20)明显低于脂多糖或TNF-α单独作用组(3.20±0.10和3.30±0.10).结论 腺病毒E1A蛋白持续表达可引起细胞内核因子-κB的过度活化,抗氧化物质NAC能明显拮抗E1A蛋白上调核因子-κB活化的作用,推测其机制可能与氧化应激有关.
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中药补肾益气活血作用对生长受限胎鼠脑及肝细胞外信号调节激酶-1与丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响
目的探讨补肾益气活血方剂对生长受限胎鼠脑及肝细胞外信号调节激酶-1(ERK-1)和丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响.方法采用被动吸烟法建立孕鼠的生长受限模型,对48只孕鼠随机分成生长受限组(12只)、精氨酸治疗组(12只)、补肾益气活血方剂(简称中药)中药治疗组(12只), 另选12只正常孕鼠组成正常组.运用Western-blot方法,分别检测各组孕鼠所生产胎鼠的脑组织及肝组织内ERK-1和MKP-1的表达.结果 (1)脑组织:生长受限组、精氨酸治疗组、中药治疗组和正常组ERK-1的表达分别为7.63±0.22、10.03±0.41、11.03±0.30、11.44±0.09;MKP-1的表达分别为7.41±0.38、10.35±0.60、10.60±0.14、11.60±0.62.(2)肝组织: 生长受限组、精氨酸治疗组、中药治疗组和正常组ERK-1的表达分别为4.73±0.54、5.83±0.17、11.37±0.12、12.34±0.14;MKP-1的表达分别为9.07±0.61、10.66±0.08、14.27±0.73、14.92±0.17.(3)在肝组织和脑组织中,生长受限组ERK-1和MKP-1的表达较正常组明显降低(P<0.01),中药治疗组较生长受限组明显升高(P<0.01),且接近于正常组的表达水平(P>0.05).脑组织ERK-1的表达,中药治疗组较精氨酸治疗组明显升高(P<0.05);MKP-1的表达,两组比较,差异无显著性(P>0.05),肝组织ERK-1和MKP-1的表达中药治疗组较精氨酸治疗组都明显升高(P<0.01).结论补肾益气活血方剂通过影响ERK-1和MKP-1的表达,可引起生长相关基因表达增强和凋亡抑制,这可能是该方剂防治胎鼠生长受限的机制之一,且其作用优于精氨酸.
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人巨细胞病毒感染妊娠早期绒毛组织中即刻早期基因与晚期基因的表达及形态学变化的体外研究
目的观察妊娠早期绒毛组织感染人巨细胞病毒(hCMV)后,即刻早期基因与晚期基因的表达及绒毛组织形态学变化.方法采用绒毛组织体外培养技术,建立体外hCMV感染妊娠早期绒毛模型;采用间接免疫荧光法和原位杂交法,检测不同hCMV浓度、不同感染时间,即刻早期蛋白(IEP)72-IEP86和晚期基因(LG)mRNA的表达;同时应用透射电镜观察妊娠早期绒毛组织的形态学变化.结果 (1)以浓度为100半数致细胞病变滴度(TCID50)、 200 TCID50 及300 TCID50 的hCMV感染绒毛组织后,细胞滋养细胞、合体滋养细胞及间质细胞均可见IEP72-IEP86表达.(2)100 TCID50 hCMV 感染后,绒毛组织无LG mRNA表达;200 TCID50及300 TCID50 hCMV感染第0～2天后,合体滋养细胞及间质细胞LG mRNA均呈阳性表达,细胞滋养细胞 LG mRNA呈强阳性表达.(3)妊娠早期绒毛组织与经hCMV 感染后的妊娠早期绒毛组织,共同于体外连续培养10 d,妊娠早期绒毛组织保持了正常的形态学特征;不同浓度hCMV感染后的妊娠早期绒毛组织的形态均发生了不同程度的变化,合体滋养细胞表面微绒毛水肿、粗面内质网扩张,细胞滋养细胞多见,溶酶体增生及毛细血管腔扩张.结论 (1)hCMV感染妊娠早期绒毛组织的早期,hCMV可在绒毛组织细胞中完整复制,IEP72-IEP86可长期存在于感染后的绒毛组织中.(2)hCMV感染妊娠早期绒毛组织,可引起绒毛组织细胞的超微结构变化.
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Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖
目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.
关键词： 膜蛋白质类 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 成纤维细胞 细胞分裂 -
结缔组织生长因子在进行性肌营养不良中的表达
目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在进行性肌营养不良(PMD)中的作用.方法使用Duchenne型肌营养不良(DMD)8例、Becker型肌营养不良(BMD)2例、先天性肌营养不良(CMD)6例患儿的肌肉活检标本,借助免疫组织化学、双免疫荧光方法及Western印迹分析检测CTGF的免疫表达和定位.结果免疫组织化学和双免疫荧光法显示CTGF在正常肌肉的血管处明显表达;免疫组织化学法和 Western印记分析均显示在PMD的萎缩肌肉中CTGF的免疫反应明显增强,所有病变肌肉组织中,CTGF在再生纤维的膜、胞浆及胞核中、巨噬细胞及巨噬细胞浸润的坏死纤维中强烈表达,也免疫定位在非再生纤维的肌纤维膜、肌内膜及肌束膜的结缔组织中;双免疫标记显示在肌内膜及肌束膜的大多数激活的成纤维细胞表达CTGF;但年长的CMD患儿的晚期纤维化中CTGF弱表达或无表达.结论结果表明CTGF可能参与了PMD的发病过程,肌肉内的CTGF可能在肌纤维再生和肌肉纤维化的病变过程中起重要作用.
关键词： 肌营养不良 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 -
蛋白尿负荷幼鼠肾组织核转录因子κB、致纤维化因子及纤维连接蛋白核酸表达的研究
目的探讨幼年大鼠持续蛋白尿致肾损伤的不同时间点肾组织NF-κB亚单位P65/Rel-A及凝血酶敏感蛋白(TSP-1)、转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN) mRNA动态表达的趋势.方法 3周龄幼年Wistar雌性大鼠80只,分为BSA组(40只)和对照组(40只), 采用BSA诱导制备蛋白负荷肾病模型;考马斯亮蓝比色测大鼠尿蛋白;HE染色评价肾组织常病理变化;原位杂交检测P65/Rel-A、TSP-1、TGF-β1及CTGF mRNA表达;Northern blot检测FN mRNA表达.SPSS10对实验数据进行统计学处理.结果 (1)BSA组大鼠至3～4周蛋白尿达大量蛋白尿程度,肾间质炎症细胞浸润,肾小管蛋白管型形成,间质水肿,间质区加宽.(2)BSA组各级肾小管上皮细胞P65/Rel-A mRNA于细胞核的表达强度趋于增加,第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.33±0.20、2.76±0.12、2.96±0.19、 3.76±0.18(F=37.34,P<0.01).(3) BSA组 TSP-1 mRNA表达第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.60±0.28、3.39±0.41、2.77±0.08、2.71±0.13,于第2周时达高峰(F=11.14,P<0.01).(4)伴随蛋白尿的加重,BSA组TGF-β1及CTGF的mRNA于各级肾小管上皮细胞表达趋势进行性增强,与对照组比较及自身各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.01).(5)Northern blot结果提示,BSA组FN mRNA于第2周明显上调,至第4周是对照组的3.6倍,是第1周的2.7倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论大量持续蛋白尿过程中肾组织NF-κB信号途径活化,TSP-1、TGF-β1、CTGF的异常表达,肾间质FN的合成和异常集聚,可能是促进肾间质进一步损伤的机制之一.
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心力衰竭幼鼠心肌结缔组织生长因子的表达及药物干预研究
目的 研究心力衰竭(heart failure,HF;简称心衰)幼鼠心肌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达及苯那普利的调节作用.方法 采用腹主动脉缩窄术建立幼鼠HF模型,术后6周经高频超声筛查将符合心衰标准的幼鼠随机分为HF组和苯那普利治疗组,另设假手术组.苯那普利治疗组灌胃给药4周,术后10周时行高频超声、心肌重量分析、免疫组化和逆转录-聚合酶链反应分别检测心肌功能、心室重构程度、心肌CTGF表达.结果 10周时于3组中各随机抓取15只幼鼠进行检测.与假手术组比较,HF组左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、室间隔舒张末期内径(IVSTd)、室间隔收缩末期内径(IVSTs)、左室后壁舒张末期厚度(LVPWTd)、左室后壁收缩末期厚度(LVPWTs)、左心室相对质量(LVRW)、右心室相对质量(RVRW)均升高(P＜0.01),而短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)降低(P＜0.01),CTGF免疫阳性细胞增多,CTGF mRNA表达亦高[(0.609±0.065)vs(0.117±0.011),P＜0.01].苯那普利组与HF组相比LVESD,IVSTd,IVSTs,LVPWTd,LVPWTs,LVRW,RVRW降低(P＜0.01),FS、EF升高(P＜0.01),CTGF免疫阳性细胞减少,CTGF mRNA表达下降[(0.441±0.053)vs(0.609±0.065),P＜0.01].结论 HF幼鼠心肌CTGF表达明显上调,苯那普利可部分抑制HF心肌CTGF的表达,从而抑制HF时心室重构的发生,改善心脏功能.
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结缔组织生长因子与转化生长因子及Smad信号通路在兔角膜创伤愈合中的作用
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子β1(TGF-β1)在兔角膜创伤愈合过程中的表达和对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的Smad信号传导通路作初步研究.方法 选择Albino纯种白兔26只,随机分为4组:(1)空白对照组:2只兔(4只眼),未做任何处理.(2)单纯角膜创伤组:又分术后2、6 h,1、3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).(3)TGF抗体组:颞侧球结膜下注射15.5μg TGF抗体,又分为3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).(4)Smad4抗体组:颞侧球结膜下注射20μg Smad4抗体,又分为3、7、21 d亚组,每个亚组2只兔(4只眼).实验眼首先行直径3 mm、包含约0.05 mm实质层的板层角膜切除术,然后TGF抗体组术眼球结膜下注射TGF-β1抗体,Smad4抗体组术眼球结膜下注射Smad4抗体,用免疫组织化学和Mrna原位杂交方法分别检测CTGF、TGF-β1、纤维粘连蛋白(FN)在术后2、6 h、1、3、7、21 d的表达和Ⅰ型胶原、CTGF Mrna在术后6 h、3、7、21 d的表达及角膜纤维细胞活化增生情况.结果 (1)正常兔眼角膜未发现CTGF蛋白和Mrna的表达.TGF-β1蛋白在正常角膜上皮中有表达.(2)术后6 h角膜纤维细胞开始活化,创伤后TGF-β1在上皮和实质中的表达显著增加,同时CTGF Mrna表达上调;术后3 d TGF-β1蛋白、CTGF及Ⅰ型胶原Mrna的表达到高峰;术后7 d,3者在上皮中表达明显,TGF-β1蛋白在实质中表达减少;术后21 d,绝大多数纤维细胞恢复到伤前状态,CTGF蛋白和Mrna在上皮中偶见表达.(3)TGF抗体使实质中的TGF-β1、CTGF、FN表达减少,同时下调上皮中CTGFmRNA的表达.(4)Smad4抗体抑制实质层TGF的表达,而对CTGF表达无影响.结论 创伤能引起TGF-β1蛋白、CTGF蛋白及Mrna的表达增加,Ⅰ型胶原和FN蛋白合成增加.TGF-β1促进角膜纤维细胞活化,上调CTGF的表达;CTGF主要调节Ⅰ型胶原和FN生成,从而影响角膜伤口愈合和瘢痕形成;这两种调节作用可能不通过Smad通路传导.
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反义寡核苷酸对转化生长因子β2刺激的人眼球筋膜囊成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化形成中的作用.方法 对照实验研究.应用二甲基四氮唑盐(M1Tr)法检测脂质体对人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTF)活性的影响;用脂质体包裹CTGF的反义寡核苷酸(ASODN)处理经转化生长因子β2(TGF-β2)刺激的HTF,然后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫细胞化学法检测纤维连接蛋白(Fn)的合成,用RT-PCR和免疫印迹法检测CTGF的表达.结果 3个不同浓度组的脂质体作用HTF后,其吸光度(A)值分别为0.178±0.069、0.196±0.071、0.141±0.036,与正常对照组(0.202±0.073)比较,差异无统计学意义(F=1.65,P＞0.05);单纯的TGF-β2刺激组(T组)与加入了脂质体的TGF-β2刺激组(D组)分别从基因和蛋白水平比较CTGF和Fn的表达,差异无统计学意义(t=0.90,2.32,0.75,2.11;P＞0.05);转染12 h后CTGF与Fn的Mrna水平比较,脂质体介导的CTGF反义寡核苷酸治疗组(A组)的相对灰度RI值明显高于脂质体介导的CTGF正义寡核苷酸对照组(S组)和D组(F=15.25,19.73;P＜0.05);CTGF与FN的蛋白表达水平与Mrna表达水平相一致.结论 CTGF的ASODN能够抑制TGF-β2对HTF表达CTGF和Fn的刺激作用.
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腺病毒E1A蛋白与慢性阻塞性肺疾病发病机制的研究进展
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)是一种常见的呼吸系统疾病，呈进行性发展，严重影响人们的劳动能力和生活质量，其发病机制尚不甚清楚。大量研究表明：腺病毒潜伏感染可能通过气道炎症反应、氧化应激、气道重塑及细胞凋亡等机制参与慢性阻塞性肺疾病发生、发展。通过对这些因素的研究，有助于慢性阻塞性肺疾病的早期预防及治疗。
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人巨细胞病毒IE1蛋白功能研究新进展
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种常见的疱疹病毒.在HCMV感染细胞内,表达早且丰富的是即刻早期蛋白1(IE1),后者可以影响病毒和细胞启动子的活性,调控HCMV基因表达的时序性,并通过多种途径影响细胞凋亡,还与体内葡萄糖调控蛋白78的表达密切相关.此文对近年来关于IE1蛋白功能研究的新进展做一综述.
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糖皮质激素及NAC对腺病毒E1A蛋白上调IL-8及ICAM-1的抑制作用
目的 探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用.方法 构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组).用TNF-α刺激、DXM以及NAC干预细胞,用ELISA检测炎症因子IL-8蛋白的表达,流式细胞术检测ICAM-1的表达.结果 E1A+组在10 μg*L-1的TNF-α作用前后细胞IL-8蛋白浓度分别为(48.49±0.27)ng*L-1和(22 841.75±12.92)ng*L-1,明显高于E1A-组作用前的(1.67±0.07)ng*L-1和作用后的(3 576.04±3.20)ng*L-1,两组相比差异有统计学意义(P<0.01).与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导下IL-8的高表达,差异有统计学意义(P<0.01).E1A+组在10 μg*L-1的TNF-α作用前后细胞ICAM-1蛋白浓度(荧光强度)分别为17.12±3.32和35.12±3.19,均高于E1A-组作用前0.59±0.09和作用后29.72±3.32,两组相比差异有统计学意义(P<0.01).与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导的ICAM-1的表达,差异有统计学意义(P<0.01).结论 E1A蛋白能够增加TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1蛋白的表达.DXM和NAC能够明显拮抗TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1的蛋白表达,具有较强的抗炎作用.腺病毒E1A蛋白对NAC及DXM的抗炎作用无明显拮抗作用.
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LY333531下调大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子表达
目的探讨LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分对照组,糖尿病组及LY333531给药组(10 mg/(kg·d),灌胃.8周后观察各组体重、肾重、肾重/体重、24 h尿白蛋白排泄率(AER)及肾组织蛋白激酶C(PKC)活性的变化,行PAS染色肾小球病理形态学观察及CTGF免疫组化.结果 LY333531给药组大鼠体重明显高于模型组(P<0.05),肾重、肾重/体重、AER及肾小球面积(AG) 、肾小球容量(VG) 及系膜区面积(AM) 明显低于糖尿病组(P<0.05,P<0.01);模型组肾组织PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/ PKCc明显高于对照组(P<0.05, P<0.01);LY333531给药组PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/ PKCc明显低于模型组(P<0.05).模型组肾小球CTGF表达明显高于对照组(P<0.01),LY333531对其有明显抑制作用(P<0.05).结论 LY333531对糖尿病肾脏有明显保护作用,机制可能与抑制肾组织CTGF过度表达有关.
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乙肝病毒X蛋白对肝星状细胞的增殖及其表达 TGFβ1和 CTGF的影响
目的研究乙肝病毒X蛋白（HBx）对肝星状细胞（HSC）增殖的影响及其可能的分子机制。方法运用分子生物学方法构建稳定表达 H BV X 基因的 HL-7702肝细胞株（L02/x ）。RT-PCR、Western blot 鉴定L02/x细胞 H BV X基因的稳定表达。将HSC细胞分别与L02/x、转染空质粒和未转染的肝细胞共培养36 h ，分别命名为HSC/x、HSC/ctr和HSC/NC。CCK-8法检测各组HSC增殖，Real-time PCR法检测在HSC增殖中起重要作用的 TGFβ1和 CTGF基因在各组HSC中的mRNA表达。结果 RT-PCR和Western blot结果显示，L02/x细胞中有 HBV X基因mRNA和蛋白的表达。CCK-8法检测显示，HSC/x的增殖（0．7377±0．0142）显著高于HSC/ctr（0．4970±0．0085）和HSC/NC（0．4913±0．0186），差别具有统计学意义（P＜0．01）。Real-time PCR显示，HSC/x细胞中的 TGFβ1和 CTGF mRNA相对表达量（3．1461±0．0705，2．9829±0．0315）均显著高于HSC/ctr（1．0046±0．0040，1．0222±0．0627）和HSC/NC（1．0000±0．0000，1．0000±0．0000），差别具有统计学意义（P均＜0．01）。结论肝细胞中表达的 HBV X基因可以上调 HSC细胞 TGFβ1和 CTGF基因的表达，促进共培养的 HSC增殖。
