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兰州百合的快速繁殖及多倍体诱导
为了获得优质品种的兰州百合多倍体,采用鳞片外植体诱导兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)试管苗,通过正交实验筛选兰州百合快速繁殖培养基,并对兰州百合鳞茎进行了秋水仙素诱导多倍体的试验研究,还进一步对兰州百合多倍体及二倍体进行了植物抗逆性指标测定.结果表明:兰州百合鳞片能成功诱导出小鳞茎的佳培养基为MS+ PP333 2.0 mg/L+ BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ KT 2.0 mg/L,诱导兰州百合多倍体的佳条件为鳞茎于0.1％秋水仙素溶液浸泡24 h,诱导出的四倍体相比二倍体SOD、POD酶活升高,MDA、脯氨酸含量升高,预示多倍体可能具有较好的抗逆性.
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一例急性秋水仙碱中毒的护理体会
秋水仙碱又名秋水仙素,主要用于治疗或预防急性痛风发作和抗肿瘤治疗.由于秋水仙碱的治疗剂量与中毒剂量接近[1],服药后30 min-2 h血药浓度达峰值[2],因此超剂量或长期使用即可导致中毒,病死率高.我科收治一例急性秋水仙碱中毒患者,护理体会报道如下.
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秋水仙素诱导的神经元突起溃变对Aβ分泌的影响
目的 研究秋水仙素诱导的体外培养新生小鼠大脑皮层神经元突起溃变对β-淀粉样蛋白(amyloid beta-protein,Aβ)分泌的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 体外无血清培养新生小鼠大脑皮层神经元,采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定,选择培养4 d的神经元进行实验;通过细胞形态学观察和四唑盐(MTT)比色实验,筛选和确定秋水仙素(colchicine)合适的造模浓度;用ELISA法检测秋水仙素组和溶媒对照组Aβ在不同时间点的分泌量;用RT-PCR测定β淀粉样前体蛋白(APP)、早老素1(PS1)和β位点APP内切酶(BACE)基因的表达.结果 细胞形态学观察结果表明,终浓度为0.5 mg·L-1的秋水仙素作用4 h后,神经元突起明显缩短而胞体形态无变化,同时MTT比色实验测得其吸光度与对照组比差异无显著性,胞体活性没有受到明显影响.ELISA法实验结果表明,神经元突起溃变后,Aβ分泌量在4、8 h时升高,与溶媒对照组相比差异有显著性.RT-PCR法表明,APP、PS1和BACE mRNA在4、8 h时的表达量较溶媒对照组增加,差异有显著性.结论 秋水仙素诱导的神经元突起溃变可增加Aβ分泌,其可能与增加APP,PS1和BACE基因表达有关.
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秋水仙碱通过阻滞TGF-β1/Smads通路抑制胰腺星状细胞生物学行为的研究
目的:观察秋水仙碱对TGF-β 1诱导的胰腺星状细胞增殖、凋亡活性的影响,探讨秋水仙素对抗慢性胰腺炎纤维化的可能分子机制.方法:实验分对照组和实验组,对照组不加秋水仙碱,实验组根据情况加入秋水仙碱和/或TGF-β 1.实验组利用秋水仙碱干预TGF-β 1诱导胰腺星状细胞,MFF法检测细胞增殖能力,免疫荧光法检测胰腺星状细胞活化状态,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot检测Tβ1R、Smads表达变化.结果:与对照组相比,TGF-β 1可诱导胰腺星状细胞增殖(P＜0.05),降低凋亡率(P＜0.05);而秋水仙碱作用24 h后胰腺星状细增殖明显减低(P＜0.05),凋亡明显增加(P＜0.05);抑制细胞的增长呈剂量依赖性.RT-PCR和Western blot检测显示秋水仙碱成功阻断TGF-β 1/Smads通路的活化.结论:秋水仙碱抑制TGF-β 1诱导的胰腺星状细胞增殖,促使胰腺星状细胞凋亡,其机制可能与抑制TGF-β 1/Smads通路的活化有关.
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外周血染色体G带方案优化以及药物同步实现高分辨率的研究
目的 评价临床实验室外周血淋巴细胞培养对染色体制备的影响,并建立高分辨染色体制备的方法.方法 测量经秋水仙素分别处理1.75 h(常规方法)、1.5h、1.25 h和1h的外周血淋巴细胞的转化率及染色体分辨率情况,比较各实验组与常规方法是否存在差异.进行药物同步实验,计算细胞转化率,分析细胞染色体分辨率情况,比较药物同步方法与常规方法之间的差异.结果 秋水仙素作用时间可减少至1.25 h,即可保证转化率及提高高分辨率染色体比例;药物同步方法可制备高分辨染色体,但存在转化率低、显带困难、实验效果不稳定等缺点.结论 优化了外周血染色体分辨方案;建立了一套药物同步获得高分辨率染色体的方法,为提高小片段染色体异常病例的检出率提供基础.
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一种染色体G显带的改良方法
目的探讨提高染色体G显带效果的方法.方法操作步骤同常规方法,改良处为调整固定液的比例和秋水仙素的处理时间等.结果常规组400～600条分裂相占52%,分散良好率68%;改良组400～600条,分散相占75%,分散良好率86%,两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论改良方法获得的染色体分裂相多,分散良好,长短适中;Giemsa染色显示带纹清晰.
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离体培养条件下伊犁贝母四倍体诱导及筛选
目的 选育四倍体伊犁贝母Fritillaria pallidiflora Schrenk新种质,为高产、高生物碱含量的伊犁贝母育种打下基础.方法 以鳞茎诱导出的不定芽为材料,将其接入含有2%二甲基亚砜、不同浓度秋水仙素的液体MS培养基诱导四倍体,利用处理后不定芽表型变化及染色体计数筛选鉴定四倍体伊犁贝母.结果 成功获得了染色体加倍的伊犁贝母新材料,其中以含秋水仙素400 mg/L浸泡24 h效果佳,四倍体诱导率达到33.3%,四倍体植株与二倍体对照相比,二者在表型性状、显微结构上有明显区别.结论 四倍体植株体型大、生长优势明显,离体条件下利用不定芽诱导多倍体是伊犁贝母倍性育种的一条有效途径.
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青蒿同源四倍体的诱导
目的 诱导青蒿四倍体,筛选出佳诱变条件.方法 采用两种方法 对材料进行诱变.幼苗浸泡法:秋水仙素溶液浸泡青蒿幼苗,药液浓度和浸泡时间以及处理温度呈梯度设置;萌动种子浸泡法:秋水仙素溶液浸泡青蒿萌动种子,药液浓度呈梯度设置.然后对所得幼苗根尖染色体镜检,结合植株外形和气孔保卫细胞的特征,确定其诱变率.结果 幼苗浸泡法中,以15℃下,0.2%秋水仙素处理96 h为宜,诱变率30%.萌动种子浸泡法中,以25℃下3～5 mg/L秋水仙素处理120 h为宜,诱变率45%～96%.结论 萌动种子浸泡法优于幼苗浸泡法.
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药用植物多倍体的研究概况
本文在查阅了大量文献并结合实际工作经验的基础上,着重介绍了近些年来药用植物多倍体诱导所取得的新成果,列举了47种多倍体药用植物的研究状况.并对当前药用植物多倍体研究中所采用的诱导方法、诱变剂类型、药用植物的特征、鉴定方法等做了介绍.
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秋水仙素离体诱导金银花多倍体及倍性鉴定
目的:获得金银花四倍体植株.方法:离体条件下应用秋水仙素浸泡法和混合培养法对金银花愈伤组织进行了不同浓度和时间的处理.结果:以0.1％秋水仙素浸泡15 h诱导效果佳,诱变率为30.5％.茎尖染色体压片表明,四倍体染色体数为2n =4x=36,二倍体对照为2n =2x=18.获得的金银花四倍体与二倍体植株相比,四倍体植株形态特征变化明显,植株变粗壮,叶片变厚,颜色变深,茎基部粗壮,生长势变缓.气孔、保卫细胞明显增大,气孔密度明显减小.结论:秋水仙素浸泡法可以作为金银花多倍体的诱导方法.
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金铁锁多倍体诱导的初步研究
目的:采用多倍体育种技术对金铁锁进行多倍体诱导试验,以期获得金铁锁多倍体植株.方法:在组织培养条件下,利用秋水仙素作为诱导剂,对二倍体组培苗进行诱导,比较不同预培养时间和不同处理浓度、不同处理时间下秋水仙素对金铁锁进行染色体加倍的诱导效果.结果:金铁锬茎段在分化培养基上预培养3d后,再在附加有40 mg/L秋水仙素的分化培养基中处理2d的诱导效果佳,其变异率达到19.05％.金铁锁多倍性植株“同质化”处理的佳次数为5次.对获得的经形态观察初筛的变异植株根尖进行染色体计数后发现,变异植株根尖细胞染色体为2n=4X=56,为四倍体.未加倍的植株染色体为2n=2X=28,为二倍体.观察中也发现有少数变异植株根尖同时存在有28和56条染色体的细胞,为嵌合体.结论:利用组织培养结合秋水仙素的方法,在短期内可获得较多纯合的金铁锁多倍体植株.
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侧脑室注射秋水仙素诱导大鼠脑巢蛋白的表达
目的探讨侧脑室注射秋水仙素后大鼠脑巢蛋白(nestin)的表达情况.方法 40只成年SD大鼠侧脑室注射秋水仙素10 μg/μl,分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d和14 d处死动物.用nestin和胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)标志物免疫组织化学方法观察nestin的表达.结果秋水仙素注射后的3 d、5 d和7 d在尾壳核、胼胝体、外侧隔和嗅结节岛出现nestin阳性细胞,且呈GFAP免疫阳性,以尾壳核的反应为明显.在尾壳核nestin阳性细胞在秋水仙素注射后的第3 d开始出现,术后5d反应区域面积和单位面积的nestin阳性细胞密度达到大值,然后逐渐减少;非注射侧的nestin应区域面积和阳性细胞数均较注射侧少;术后14d组nestin阳性细胞缺失.结论秋水仙素可诱导脑的胶质细胞一过性表达nestin,其表达的意义和机制有待进一步研究.
关键词： 巢蛋白 胶质细胞纤维酸性蛋白 秋水仙素 脑 大鼠 -
细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察
目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4～48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线.结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制.结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用.
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染色体罗伯逊异位伴习惯性流产2例
[例1]女性,34岁.婚后自然流产4次.到我室要求作染色体检查.早孕期间无不良物质接触史,无病毒感染史.双方弓型虫检查为阴性;男方精液检查正常,无烟酒嗜好,无慢性病及不良物质接触史,非近亲婚配.双方兄弟姐妹均已生育,无流产史及畸胎史.夫妇双方按常规抽取外周血1mL,分别接种于F10+小牛血清培养基中,置于37℃温箱培养72h,收集细胞前3h加秋水仙素,使细胞生长终止在中期,然后低渗,固定,制片,G显带吉氏染色,显微镜下计算30个细胞,分析3个核型.结果为:45,xxt(15;22),(15qter→15q11::22p11→22qter).其丈夫核型为46,xy,家族其他成员拒绝作染色体检查.
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直接低渗和秋水仙素同时处理在浆膜腔积液检查中的应用
浆膜腔积液中染色体检查是临床早期诊断和鉴别诊断恶性积液的有效方法。受林梓家等［1］的启示，对各种浆膜腔积液采用直接低渗和秋水仙素同时处理的方法，反复摸索处理时间及用量，得到满意的结果，应用于149例积液染色体制备，现报道如下。
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人外周血淋巴细胞染色体标本的制备研究
1960年，Moorhead 等建立了一套比较完整的外周血体外培养和染色体制备方法，该技术能够清晰的显示染色体数目和结构上的变化，对于常见遗传性疾病的快速诊断，提高人口素质具有十分重要的作用，对我国优生优育工作意义重大［1］。但该技术对细胞的培养时间较长，使得实验易受温度、pH 、溶血和凝血等因素影响而导致失败［2］。为了临床上能高效、快速、准确地诊断遗传性疾病，有学者已经报道了该技术的一些心得体会［3‐5］。本研究立足于获得高质量的人外周血染色体标本和提高实验教学的可操作性，对该技术的4个影响因素进行了优化，现将研究结果报道如下。
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血清中秋水仙素萃取方法的优化
目的:优化血清中秋水仙素的萃取方法.方法:分别以0.1mol·L-1磷酸溶液、生理盐水、pH9.0氨基丁三醇缓冲液作为吸附体系考察pH值对氧化铝吸附效果的影响;通过改变洗脱液中甲醇的比例来考察极性的改变对洗脱效果的影响;观察秋水仙素水解物对色谱分离效果的影响.结果:在碱性环境中氧化铝对秋水仙素有较好的吸附效果;5%甲醇洗脱液有较理想的解吸附效率;所建立色谱条件,对秋水仙素和2个主要水解物有很好的分离度.结论:本试验所建立的氧化铝吸附法适用于血清中秋水仙素的萃取,对秋水仙素药物浓度检测方法的建立具有借鉴意义.
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外周血染色体制作方法改进
目的:探讨外周血淋巴细胞染色体新的制作方法.方法:在同一种淋巴细胞的培养液中,加入不同浓度的秋水仙素,观察不同浓度及不同时间制作染色体的效果.结果:人和鼠的外周血淋巴细胞培养24 h、48 h均可获得染色体,以秋水仙素终浓度为0.06 μg/ml和0.012 μg/ml,培养48 h收集细胞时,染色体数目多、形态结构较好.结论:适量的秋水仙素与血液一起培养外周血淋巴细胞,制备染色体的方法是可行的.
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大鼠肝细胞中黏弹性的研究
采用微管吮吸技术测定了大鼠肝细胞的黏弹性,并进一步研究了秋水仙素(Col)和细胞松弛素D(CD)以及两者混合作用后对于细胞黏弹性的影响.结果表明:在用CD、Col以及CD、Col混合处理细胞后发现细胞的黏弹性系数仅明显下降.微管系统对于弹性系数K1的影响可能要大于微丝对K1影响.而微丝于弹性系数K2的影响可能要大于微管对K1的影响.另外微管和微丝之间的交互作用可能对正常肝细胞和癌细胞中黏弹性的差异有一定的作用.
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32例矮小患者染色体异常分析
对象与方法 1996年至2007年间因矮小或矮小伴随其它症状到本院遗传室就诊的患者,年龄2～32岁,排除明显的21三体以及软骨发育方面的疾病.其中6岁以下患者3例,均以生长发育迟缓就诊,1例伴先心病,1例头小,鼻扁塌;6岁至18岁21例,以身材矮小,伴原发闭经就诊居多,部分患者肘外翻,有1例伴有典型的小头,面部异常,甲状腺素检测异常(促甲状腺激素增高,游离T3增高),智力低下就诊;18岁以上8例,主要以月经不正常或原发闭经就诊,年龄大的1例表现为矮小,外观具有典型的特纳氏综合征特征.患者在无菌操作下抽取静脉血1.5 mL,肝素抗凝,接种于外周血培养液中,37℃培养72 h.加入秋水仙素后继续培养2h后收获,常规制片,60℃烤片过夜,胰酶法G显带,必要时加做C带和N带,每例标本计数20个分裂相,分析5个核型,异常者加倍计数分析.
