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DiI示踪标记固定脑组织内神经元及其突起的方法
目的:对DiI标记固定大脑皮质内神经元及其突起的技术进行改进,使操作更简单、便捷,效果更为高效、理想.方法:将DiI颗粒植入已固定小鼠大脑胼胝体,然后将标记后的脑组织放入4％多聚甲醛固定,于室温下避光孵育1～2周.结果:这种标记方法可以很直观地显示出大脑皮质神经元及其突起的精细结构,其中包括树突棘.结论:DiI示踪标记法可以用于标记固定脑内的神经元及其突起和树突棘,效果令人满意.
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双胸蚓溶栓酶对体外培养的WISTAR胎鼠大脑神经元突起生长的影响
目的:探讨双胸蚓溶栓酶对神经元突起的影响及其作用机制.方法:应用神经元细胞体外培养技术观察了1～10d内在不同剂量双胸蚓溶栓酶作用下的Wistar胎鼠大脑神经元突起的生长发育过程.结果:不同剂量双胸蚓溶栓酶对神经元突起的数量和长度以及轴索的形态与增长均有影响.结论:双胸蚓溶栓酶对体外培养的胎鼠大脑神经元突起的生长发育有促进作用.
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秋水仙素诱导的神经元突起溃变对Aβ分泌的影响
目的 研究秋水仙素诱导的体外培养新生小鼠大脑皮层神经元突起溃变对β-淀粉样蛋白(amyloid beta-protein,Aβ)分泌的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 体外无血清培养新生小鼠大脑皮层神经元,采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定,选择培养4 d的神经元进行实验;通过细胞形态学观察和四唑盐(MTT)比色实验,筛选和确定秋水仙素(colchicine)合适的造模浓度;用ELISA法检测秋水仙素组和溶媒对照组Aβ在不同时间点的分泌量;用RT-PCR测定β淀粉样前体蛋白(APP)、早老素1(PS1)和β位点APP内切酶(BACE)基因的表达.结果 细胞形态学观察结果表明,终浓度为0.5 mg·L-1的秋水仙素作用4 h后,神经元突起明显缩短而胞体形态无变化,同时MTT比色实验测得其吸光度与对照组比差异无显著性,胞体活性没有受到明显影响.ELISA法实验结果表明,神经元突起溃变后,Aβ分泌量在4、8 h时升高,与溶媒对照组相比差异有显著性.RT-PCR法表明,APP、PS1和BACE mRNA在4、8 h时的表达量较溶媒对照组增加,差异有显著性.结论 秋水仙素诱导的神经元突起溃变可增加Aβ分泌,其可能与增加APP,PS1和BACE基因表达有关.
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CRMP2在大鼠海马神经元中的表达分布及对神经元突起生长的影响
目的 探讨脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)在大鼠海马神经元中的表达分布及对神经元突起生长的影响.方法 CRMP2及其模拟磷酸化质粒CRMP2-S522D、CRMP2-T555D,转入体外培养的SD大鼠海马神经元,转染72 h后,采用免疫印迹法和免疫荧光染色分析CRMP2、CRMP2-S522D、CRMP2-T555D在神经元中的分布差异以及对神经元突起分枝和突起长度的影响.结果 CRMP2及CRMP2-T555D在神经元胞体和突起均有分布,CRMP2-S522D则主要分布于胞体.CRMP2-T555D对神经元的突起长度和分枝数均没有明显影响;CRMP2-S522D对突起数目没有明显影响,但可以显著降低突起长度.结论 CRMP2的不同磷酸化形式在大鼠海马神经元中存在分布差异,并对神经元的突起长度产生影响.
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分子化合物C93355对小鼠海马神经元突起的抑制作用
目的:研究小分子C93355对神经元突起生长的影响及其可能的机制.方法: 培养新生小鼠海马神经元,采用免疫细胞化学染色分析神经元突起的生长, Western blot 检测C93355对非典型蛋白激酶C (aPKC)的磷酸化影响.结果: 小分子C93355抑制海马神经元突起的生长,降低aPKC的磷酸化.结论: 小分子C93355可能通过抑制aPKC的磷酸化而调节神经元突起的生长.
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星形神经胶质细胞对PC12细胞生长发育的影响
在神经系统的生长发育过程中，星形胶质细胞对神经元生长发育的作用是一项重要的研究课题。本文以体外培养的SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞与PC12神经元按不同细胞数目比例(50：1～1:1)共同培养，并用其制备的条件培养液培养PC12细胞，用快速灵敏的MTT比色法测定PC12神经元的细胞活力，用光学相差显微镜观察PC12细胞形态学变化。结果显示，星形胶质细胞条件培养液可增强PC12细胞活力(MTT测定的 OD值由0.255±0.012提高到0.510±0.036，P<0.001，且细胞折光性较对照组强)，却不能促使PC12神经元突起的生出。将星形胶质细胞与PC12细胞按30：1～1：1的比例共同培养时，既可提高PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长；如按50：1～40：1的比例共同培养时，只观察到提高PC12细胞折光性和光晕，而无促使其突起生长发育的作用。本文结果提示，PC12神经元细胞活力的提高与星形胶质细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关，而PC12神经元突起生长发育可能是和与星形胶质细胞的直接接触以及二者的细胞数且比有关。
