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轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因( AC)n(AT)x Ty多态性分析
目的 探讨轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的相关性.方法 选取2009年2月至2010年7月深圳市宝安区人民医院89例已知基因突变类型的轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和110名中国汉族人群健康对照者.抽取所有个体外周静脉血,抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列,经DNA测序确定(AC)n(AT)xTy序列的多态性,分析(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的关系.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和健康对照者间(AC)n(AT)xTy多态性单倍型频率的比较,以及同一单倍型患者的不同突变类型发生率间的比较采用x2检验.结果 在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区存在9种(AC)n(AT)xTy多态性序列,分别是(AC)2(AT)7T7、(AC)2 (AT)8T5、(AC)3 (AT)7T5、(AC)2 (AT)9T5、(AC)2 (AT)8T9、(AC)3 (AT)8T5、(AC)2(AT)10T3、(AC)2(AT)7T5和(AC)2(AT) 11T3,其中(AC)2 (AT)7T7和(AC)2(AT)8T5是常见单倍型.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的(AC)2(AT)7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型频率分别为38.8％( 69/178)、11.8％( 21/178)、9.0％( 16/178),显著高于健康对照组的24.1％(53/220)、5.4％ (12/220)、3.2％ (7/220),差异有统计学意义(x2=9.966、4.371、6.093,P＜0.05)；(AC)2 (AT)9T5单倍型频率为10.1％(18/178),显著低于健康对照组的33.2％ (73/220),差异有统计学意义(x2=29.691,P＜0.01)；而(AC)2 (AT)8T5单倍型频率在患者组和健康对照组分别为25.3％ (45/178)和29.1％ (64/220),差异无统计学意义(x2 =0.718,P＞0.05).在(AC)2 (AT)7T7单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-II-654(C→T)的突变率分别为59％( 10/17)和29％(5/17),差异无统计学意义(x2=2.982,P＞0.05)；在(AC)2( AT)8T5单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-Ⅱ-654(C→T)的突变率分别为29％(4/14)和57％ (8/14),差异无统计学意义(x2=2.333,P＞0.05).结论 β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区的(AC)2 (AT) 7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型与轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血存在连锁不平衡.在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者中,携带( AC)2( AT)7T7单倍型和(AC)2(AT) 8T5单倍型患者的主要致病突变分别为codon41/42 (-TTCT)和IVS-II-654(C→T).
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温州地区汉族人群β地中海贫血患者β珠蛋白基因突变分析
目的 针对温州地区汉族人群β地中海贫血患者进行β珠蛋白基因的突变分析,寻找温州地区引起该病的主要致病突变位点,为开展温州地区β地中海贫血的遗传咨询、产前诊断和预防计划提供有价值的资料.方法 抽取66例经临床诊断为β地中海贫血患者的静脉血,提取DNA,采用PCR扩增,纯化后直接测序,与标准序列进行Blast分析,并对部分变异采用克隆证实.结果 在收集的66例病例中,经诊断确认44例散发β地中海贫血,经PCR产物直接测序分析发现9种基因变异类型,3种属于中国人常见突变类型(IVS-2-654、CD_(41/42)-TTCT和TATA box nt-28),2种属于少见类型异常血红蛋白(CD_(47)、CD_(66)),2种为新发现变异(-24T→C,CD_(26A)→G同义突变),另外存在2个已知的单核苷酸多态性位点(exon1 59,IVS-2-665).结论 温州地区汉族人群珠蛋白基因突变类型具有一定的特殊性,发现了罕见的变异类型和新的突变位点,该研究为在本地区开展产前诊断和遗传咨询提供了参考借鉴资料.
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酶联免疫吸附测定法和血液学分析法筛查缺失型α-地中海贫血的比较研究
目的 评价并比较酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胎胚型ζ-珠蛋白链和传统的血液学分析法在诊断缺失型α-地中海贫血(地贫)中的临床诊断价值.方法 以双盲试验对287份珠海市妇幼保健院门诊需做血红蛋白(Hb)分析的血样同时采用ELISA法和血液学分析法分别检测--SEA携带者和α-地贫表型,并以基于聚合酶链反应(PCR)技术作为诊断标准,对两种方法筛查--SEA携带者的敏感度、特异度、准确性进行评估并比较其诊断--SEA携带者的临床应用价值.结果 ELISA法诊断--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确性、阴性预测值和阳性预测值分别为95.0%、100.0%、97.9%和96.5%及100.0%,显著高于血液学分析法的74.4%、96.4%、86.1%、83.5%和90.9%,P均＜0.01).ELISA法不但能有效地检出--SEA携带者,而且还能鉴定出--SEA合并β-地贫特征或异常Hb的个体,且不受缺铁的干扰,但其对HbH病和α-地贫-2和αT-地贫基因携带者的诊断价值不及血液学分析法(P均＜0.05).结论 ELISA法对--SEA携带者,特别是--SEA/αα的诊断价值优于传统的血液学分析法,加之该法简便快速、经济实用且易自动化,故非常适合于(--SEA)α-地贫的大样本人群遗传筛查和临床样品的常规检测.
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中国人群中少见β地中海贫血家系的分子遗传学特征分析
目的 探讨在中国人群中发现的1个少见β地中海贫血家系的分子遗传学特征.方法 采用标准的血液学分析技术检测先证者及家系成员红细胞参数,包括RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC和RDW,进行表型诊断.利用SPIFE快速自动电泳分析系统检测其血红蛋白组分Hb A、Hb A2和Hb F.采用RDB技术检测β地中海贫血基因突变,并进一步进行克隆测序及家系分析,明确突变位点.结果 先证者及其父亲红细胞参数呈典型的小细胞低色素改变,MCV和MCH均降低,MCV分别为79.1 fl及63.1 fl,MCH为19.9 pg及20.9 pg;而先证者母亲的MCV及MCH均正常.先证者及其父亲Hb A2增加,分别为5.66%及5.60%,提示其为轻型β地中海贫血基因携带者.进一步的基因分析表明,先证者在一个β珠蛋白基因同时发生CD41/42(-TTCT)和转录区+40～+43缺失突变,诊断为β41/42、CAP/βA基因型的轻型地中海贫血患儿,其父母基因型分别为β41/42、CAP/βA 和βA/βA.结论 先证者在一个β珠蛋白基因同时发生CD41/42(-TTCT)和转录区+40～+43缺失突变,β41/42、CAP/βA基因型的发现丰富了中国人群β珠蛋白基因突变研究数据,有助于β地中海贫血的起源和演变的研究.
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云南省地中海贫血基因携带者及患者α和β珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断
目的 调查云南省地中海贫血(地贫)患者和地贫基因携带者中,α和β珠蛋白的基因突变谱与产前基因诊断.方法 收集2009年7月-2011年7月云南省中部、西部、南部、北部、东部等5个地区的10 033例孕前咨询夫妇、孕妇及22例贫血患儿.受检者的基本信息、血红蛋白电泳、血常规和基因诊断结果,由云南省出生缺陷与遗传病研究重点实验室汇总后输入Excel软件数据库中保存.采用单管多重跨越断裂点PCR技术和PCR-反向斑点杂交试剂盒,对血液学表型筛查阳性的1077例地贫基因携带者或患者的DNA分别进行α或β珠蛋白基因常见突变类型检测；采用DNA测序技术对基因突变检测阴性病例的DNA进行α或β珠蛋白基因编码区测序,获得α和β珠蛋白基因的突变谱.对地贫高风险胎儿进行产前基因诊断.结果 (1)1077例血液学筛查表型阳性者中,检出347例α地贫患者或地贫基因携带者,对其中的119例进行α珠蛋白基因缺失和突变谱检测,共检测出5种α珠蛋白基因缺失和突变,其中104例为东南亚缺失型(--SEA)、右缺失型(-α3.7)、非缺失型(αCSα)、左缺失型(-α4.2)4种常见的α珠蛋白基因缺失突变和点突变携带者；14例为双重杂合子的血红蛋白(Hb)H病和重型α地贫患者；1例α地贫基因携带者中检测出了罕见的α2珠蛋白基因内含子的插入缺失突变α301-24_301-23 indel.(2)1077例血液学筛查表型阳性者中,检出730例β地贫患者或地贫基因携带者,对其中的297例β地贫患者或地贫基因携带者进行β珠蛋白基因缺失和突变谱检测,共检测出16种β珠蛋白基因突变,其中包含7例少见异常血红蛋白病患者的β珠蛋白基因突变,1例β地贫患者中检出Codon 5(-CT)突变.(3)对3例α地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,其中检出1例Hb Bart水肿综合征胎儿,基因型为--SEA/--SEA；1例轻型α地贫,基因型为αCSα/αα；另外1例胎儿未检出α珠蛋白基因缺失和突变.对6例β地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,其中检出1例重型β地贫胎儿,基因型为CD17(A→T)/-28(A→G)；3例胎儿为杂合子携带者；另外2例胎儿基因型正常.孕妇自愿对2例重型地贫胎儿终止妊娠；其余7例继续妊娠,在胎儿出生6 ～ 12个月后进行随访,婴幼儿无贫血或发育迟缓的表现.结论 云南省地贫患者和地贫基因携带者中α和β珠蛋白基因突变谱特殊,其中β珠蛋白基因突变存在较多的多样性.在孕妇中筛查地贫基因携带者,对高风险胎儿进行产前基因诊断是有效的重型地贫预防措施.
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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织细胞红蛋白的表达
目的 探讨细胞红蛋白(eytoglobin,CYGB)在7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-isehemie brain damage,HIBD)脑内的表达变化.方法 健康7日龄SD大鼠70只,按简单随机抽样法随机取50只制备HIBD模型作为HIBD组,再随机分为HIBD后0、4、12、24和48 h组,每组10只;假手术组10只,只分离左颈总动脉,不结扎,也不放入缺氧箱;另10只不做任何处理作为对照组.假手术组术后即断头取脑,对照组同时取脑,HIBD组在相应时间点取脑.采用免疫组织化学法和Western印迹法从蛋白水平分析CYGB在脑组织中的分布及表达特点. 结果 (1)免疫组织化学染色显示CYGB主要表达于大脑皮质、丘脑和海马神经元的胞浆,HIBD组CYGB表达数量及染色强度均高于对照组,其中缺氧24、48 h组表达强.(2)Western印迹结果显示,HIBD后0、4、12、24和48 h CYGB平均吸光度分别为261.5土5.0,263.0土5.4,464.3±6.8,522.8±11.2,512.9±7.9,明显高于假手术组(117.6±7.0)及对照组(116.6±9.0),P<0.01.其中缺氧0和4 h组明显高于对照组(P<0.01);缺氧12 h组的表达明显高于缺氧0、4 h组(P<0.01);缺氧24、48 h组明显高于缺氧12 h组(P<0.01);缺氧0、4 h组间,缺氧24、48 h组间差异无统计学意义(P>0.05). 结论 7日龄新生大鼠HIBD后脑内CYGB表达明显增强,并且随着缺氧缺血发展呈现时相性变化,提示其可能在脑缺氧缺血的适应性调节过程中起重要作用.
关键词： 珠蛋白类 缺氧缺血 脑 大鼠 Sprague-Dawley -
脑红蛋白基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑中的表达
目的探讨缺氧缺血性脑损伤脑中脑红蛋白基因的表达及变化. 方法随机将出生7 d的Wistar大鼠48只分成6组,其中实验组在手术后制成脑损伤模型,并且在血流阻断1、5、15、30、60 min取脑;对照组为假手术组,术后即取脑.设计脑红蛋白基因引物,提取脑组织总RNA,合成RT-单链cDNA做PCR反应.以Stata统计软件包的One-way单因素方差分析进行数据统计处理. 结果设计的新生大鼠脑红蛋白 cDNA序列引物及扩增脑红蛋白编码区部分序列,其所得引物可靠、扩增产物与设计相符.检测中可见:实验组脑红蛋白mRNA的表达在缺血1 min时(A值:1.236)即快速增加达高峰,与对照组(A值:0.641)相比,差异有非常显著性(P<0.01);5 min时(A值:1.170)仍然保持在高水平(P<0.01);15 min时(A值:0.498)迅速降低,与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);此后脑红蛋白mRNA又见缓慢增高(30 min时脑红蛋白mRNA A值:0.642; 60 min时A值:0.617),与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05). 结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑红蛋白mRNA表达增强,提示脑红蛋白可能在脑缺氧的适应性调节过程中起了重要作用.
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细胞红蛋白对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用
目的 探讨细胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的神经保护作用. 方法 健康7日龄新生Sprague-Dawlay大鼠随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+氯化高铁血红素(Hemin)组和HIBD+锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)组.HIBD组、HIBD+ Hemin组及HIBD+ ZnPP组大鼠分别腹腔注射0.5 ml生理盐水、Hemin(50 mg/kg)及ZnPP(50 mg/kg),12h后结扎并剪断左侧颈总动脉,缺氧2h,制成HIBD动物模型.建立模型后0、24、48 h免疫组织化学法检测各组大鼠海马及皮质中CYGB的表达情况,每组10只.HE染色观察建立模型后48 h的大鼠脑组织病理变化,每组8只.称重法检测建立模型后72h新生大鼠脑含水量,每组8只.建立模型后28 d采用Morris水迷宫实验检测海马学习记忆功能变化,每组10只.组间差异比较采用方差分析,组间两两比较使用Bonferroni法. 结果 (1)大鼠脑组织CYGB的表达水平:用平均灰度值(与蛋白表达水平成反比)表示.在0h,HIBD+ Hemin组和HIBD组皮质CYGB的平均灰度值分别为166.7±5.1和207.1±5.1,低于假手术组(232.3±3.4),而HIBD+ ZnPP组(234.9±4.5)高于假手术组(P＜0.05).随时间的增加,各HIBD组CYGB的平均灰度值递减,至48 h时,CYGB的平均灰度值HIBD+Hemin组低(126.0±2.6),其次是HIBD组(150.9±4.5)和HIBD+ ZnPP组(163.7=6.3),高是假手术组(232.1±5.8),差异均有统计学意义(P均＜0.01).CYGB在海马组织的表达变化与皮质一致.(2)各组脑组织病理变化:建立模型后48 h,HIBD组、HIBD+ Hemin组和HIBD+ ZnPP组新生大鼠脑组织可见典型的脑梗死和出血,HIBD+Hemin组梗死灶明显较HIBD+ZnPP组小,出血减轻.(3)脑组织含水量变化:建立模型后72 h,HIBD组和HIBD+ZnPP组左侧脑组织含水量分别为(86.5±0.4)％和(87.3±0.3)％,明显高于右脑[(85.6±0.2)％和(85.9±0.2)％],差异有统计学意义(t分别为12.57和11.32,P均＜0.01).(4)海马学习记忆功能变化:水迷宫实验中,5d总平均逃逸潜伏期HIBD+ ZnPP组长[(76.7±29.8)s],其次是HIBD组[(71.0±30.5)s]和HIBD+ Hemin组[(46.7±34.0)s],短为假手术组[(38.3±30.3)s],差异均有统计学意义(P均＜0.05).(5)远期脑组织病理变化:建立模型后34 d,脑组织萎缩率HIBD+ ZnPP组高[(34.07±6.75)％],其次是HIBD组[(29.73±6.53)％],再次是HIBD+Hemin组[(18.33±4.52)％],均高于假手术组[(1.55±1.32)％],差异均有统计学意义(P均＜0.01).HIBD组及HIBD+ZnPP组大鼠脑组织可见锥体细胞层变薄,大片神经元缺失,HIBD+Hemin组仅见少量神经元缺失. 结论 CYGB的高表达可减轻HIBD脑组织近期及远期的病理损伤,保护远期的海马学习记忆功能.
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甲异靛体外对珠蛋白基因表达作用的研究
目的探讨甲异靛体外对外周血培养红系细胞的珠蛋白mRNA相对含量的影响,为临床治疗β地中海贫血提供理论依据.方法采用二步法液体培养外周血红系细胞和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,研究了6例正常人和11例β地中海贫血患儿外周血体外培养红系细胞在不同浓度甲异靛作用下,以α珠蛋白mRNA为内对照,测定γ和β珠蛋白mRNA的相对含量.结果(1)甲异靛对所有外周血体外培养红系细胞的β/α mRNA比值变化均无影响.(2)经不同浓度甲异靛诱导后正常人外周血体外培养的红系细胞的γ/α mRNA升高0.31～0.45倍,非α/α mRNA升高0.21～0.32倍,三种不同浓度之间差异无显著性;β地贫患儿γ/α mRNA升高0.33～1.17倍,非α/α mRNA升高0.25～0.89倍,2.5 μmol/L和5 μmol/L两种浓度之间差异无显著性,10 μmol/L浓度甲异靛对γ/α mRNA和非α/α mRNA的比值变化比上述两种浓度显著增高. (3) 10 μmol/L甲异靛对β地贫患儿外周血体外培养红系细胞的γ/α mRNA和非α/α mRNA的比值的提高显著高于正常人,其他两种浓度下差异无显著性.结论甲异靛在体外培养的外周血红系细胞中提高γ/α mRNA和非α/α mRNA的比率,对β地中海贫血的治疗具有潜在应用价值.
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hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值
目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标.
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大鼠急性视网膜缺血节细胞死亡时脑红蛋白的表达
目的 研究大鼠视网膜急性缺血中视网膜节细胞(RGCs)死亡时脑红蛋白(Nsb)的表达.方法 实验研究.采用特异性结扎大鼠视网膜动脉的方法造成视网膜急性缺血模型,按照结扎时间不同(0、15、30、60 min)分为A、B、C、D组,每组10只大鼠,均以左眼为实验眼.每组随机选取3只大鼠视网膜用于免疫印迹法检测,4只大鼠视网膜做HE染色节细胞计数及免疫组化染色荧光强度分析,3只大鼠做免疫电子显微镜观察.采用单因素方差分析对不同结扎时间Ngb蛋白定量及RGCs数目进行统计学分析,采用KSD-t检验进行两两比较.结果 视网膜完全结扎后,A、B、c、D组Ngb蛋白表达量分别为1.439±0.014、2.023±0.134、1.416±0.030及1.073±0.064;RGCs计数结果分别为4368±124、4296 ±96、4132±104、3973±115,组间比较差异有统计学意义(F=79.548,10.191,P<0.05).B组表达高,之后逐渐降低,C组接近正常,此时与A组比较RGCs数量开始减少,D组Ngb的表达已明显低于A组,与A组比较RGCs数量进一步减少.在视网膜各层中,Ngb的表达以RGCs层为高,其次为内丛状层与外丛状层.RGCs中Ngb主要分布在胞质,C组线粒体外室和线粒体嵴也发现有Ngb表达,而内核层及外核层细胞的胞质内始终未见Ngb的表达.结论 Ngb在大鼠RGCs急性缺血死亡时表达快速升高,主要表达于RGCs的胞质内,与RGCs的生存状态关系密切.
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脑红蛋白参与视网膜病变的研究进展
脑红蛋白(NGB)是在大脑中发现的一种新携氧球蛋白,是血红素蛋白家族的新成员.近来研究发现NGB在视网膜内的含量是大脑内的100倍,其在视网膜内广泛表达,主要位于内外丛状层及感光细胞内节段.NGB的主要功能包括:参与视网膜组织供氧、抗缺血缺氧损伤、抗氧化应激、抗细胞凋亡等.视网膜是体内相对耗氧量大的组织,NGB对于维持视网膜的正常功能起到重要作用.通过总结NGB在视网膜内的分布及其作用,并结合退行性视网膜病变的发病原因及发病机制,可以推断NGB在退行性视网膜病变中发挥一定的作用.
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广东地区地中海贫血致病基因的基因型及β珠蛋白基因多态性研究
目的 了解近年来广东地区人群中α、β珠蛋白基因的基因型分布,并对β珠蛋白基因的单核苷酸多态性(SNP)进行研究,为更准确地进行地中海贫血的遗传诊断提供理论依据.方法 利用单管多重PCR检测3种α缺失型地中海贫血,采用反向杂交(RDB)/PCR技术检测αCS、αQS、αWS3种α非缺失型及中国人常见的18种β珠蛋白的基因突变,对454份广东籍受检者标本进行地中海贫血基因分型,对其中的142份标本进行变性高效液相色谱(DHPLC)分析和β珠蛋白全基因测序,分析广东地区人群β珠蛋白基因SNP.结果 在438例基因分析确诊的地中海贫血患者中,α、β、αβ复合型地中海贫血分别为246、164和28例.246例α地中海贫血患者中,检出αα/--SEA197例、αα/-α3.7 20例、αα/-α4.2 9例.164例β地中海贫血中,152例(92.7％)为杂合子,以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28和CD17为主；8例(4.9％)为复合杂合子,4例(2.4％)为纯合子.DHPLC结合测序筛查β珠蛋白基因与RDB诊断结果一致,并发现9种SNP,其中IVS-Ⅰ-13 G＞A、IVS-Ⅱ-310 T＞C未见报道.在检测标本中,有4种SNP频率较高,73.2％的患者同时合并其中3种SNP (rs713040、rs10768683、rs1609812).结论 在α地中海贫血中,主要以αα/-SEA基因型为主；β地中海贫血以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28、CD17为主要突变类型；β地中海贫血复合杂合子、纯合子及αβ复合型地中海贫血的频率较高.DHPLC结合β珠蛋白全基因测序可以快速、有效地检出常见β地中海贫血突变型.rs713040、rs10768683、rs7480526、rs1609812在筛查人群中频率较高.
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脂质体转染反义寡核苷酸对重型β-地中海贫血红系细胞α-珠蛋白的调控作用
目的 研究脂质体转染反义寡核苷酸(ASON)对重型β-地中海贫血(β-地贫)患者红系细胞α-珠蛋白基因的调控作用,为基因治疗β-地贫提供新的思路.方法 将前期实验筛选获得的高效抑制α-珠蛋白基因表达的ASON以佳浓度作用于体外培养的重型β-地贫患者红系细胞,并没空白对照组,经实时荧光定量RT-PCR分析ASON组和空白对照组中红系细胞α、β、γ-珠蛋白基因表达情况,观察ASON对相应珠蛋白基因表达的影响,通过高效液相色谱法(HPLC)检测ASON作用后血红蛋白水平,并经透射电子显微镜(电镜)观察ASON作用前后红系细胞内α-珠蛋白肽链沉积情况,了解ASON对β-地贫患者红系细胞内过剩α-珠蛋白肽链的影响.结果 实时荧光定量RT-PCR结果显示ASON组α-珠蛋白基因mRNA表达(9.04±0.29)较空白对照组(24.23±0.29)减低(P<0.01),α/(β+γ)珠蛋白比例失衡得到改善[ASON组、空白对照组分别为(0.79±0.02)、(2.26±0.06),P<0.01];HPLC检测表明ASON作用后α-珠蛋白基因表达下调,HbA2和HbF表达增加;透射电镜结果证实ASON作用后革型β-地贫患者红系细胞内过剩的α-珠蛋白肽链沉积减少,特别是在早期幼稚红细胞中,在空白对照组中沉积物无明显变化.结论 高效ASON可抑制体外培养的重型β-地贫患者红系细胞α-珠蛋白基因表达,有助于改善珠蛋白基因α/(β+γ)比例失衡,并减少过剩α-珠蛋白肽链在红系细胞内的沉积,为基因治疗β-地贫提供新的思路.
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携氧珠蛋白家族及其法医学研究进展
长期以来,血红蛋白(hemoglobin,Hb)与肌红蛋白(myoglobin,Mb)这两种复杂的蛋白质以其独特的折叠方式,被认为是脊椎动物中仅有的两种携氧珠蛋白.
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神经珠蛋白在脑缺血中的作用及其机制
神经珠蛋白(neuroglobin,Ngb)是一种特异性表达于脑组织的携氧球蛋白,参与能量代谢、线粒体功能以及细胞存活和增殖的信号通路调节.在生理条件下,Ngb以亚铁脱氧六配体形式存在,具有较强的氧亲和能力.缺血缺氧时,脑组织内的Ngb表达上调,并通过与其下游的多种蛋白相互作用,对损伤脑组织起着保护作用.
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紫外线对HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达的影响
目的观察紫外线照射对人角质形成细胞系HaCaT细胞表达结合珠蛋白的影响.方法用逆转录-聚合酶链反应法检测长波紫外线UVA、中波紫外线UVB照射后HaCaT细胞各时相结合珠蛋白mRNA表达水平.结果 UVA 12 J/cm2照射后HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达明显升高.照射后20 min结合珠蛋白mRNA表达已开始升高,6 h达第一高峰,48 h出现第二高峰.照射后2 h、4 h、6 h、24 h、48 h组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)UVB 30 mJ/cm2照射HaCaT细胞后结合珠蛋白mRNA表达也出现时相变化:4 h达第一高峰,48 h出现第二高峰.照射后20 min、2 h、4 h、6 h、12 h、48h、72 h组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论紫外线UVA、311nm UVB上调HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达,随照射时间,结合珠蛋白mRNA表达呈时相变化.
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儿童5种多基因遗传病与结合珠蛋白遗传多态的关系
目的 探讨福州地区5种儿童多基因遗传病(变应性鼻炎、哮喘、特发性性早熟、单纯性肥胖症、特发性矮小症)的发病与结合珠蛋白(Hp)遗传多态的关系. 方法 应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,分离患者血清中Hp,分析5种患者群体的Hp基因频率和基因型分布,并对5个群体间进行差异比较. 结果 Hp1基因频率分别为:变应性鼻炎0.387,哮喘0.400,特发性性早熟0.193,单纯性肥胖症0.317,特发性矮小症0.254,正常组0.284.Hp0-0型频率分别为:3.85,0.08,3.85,6.84,3.33,2.40.Hardy-Weinberg遗传平衡分析,除了矮小症群体为非平衡群体外,其他群体均为平衡群体. 结论 Hp遗传多态与变应性鼻炎、哮喘、特发性性早熟、单纯性肥胖症的发病相关.
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血清学标志物在乳腺癌诊治中的临床研究进展
目前乳腺癌已成为危害女性健康的第一大恶性肿瘤，且发病率逐年上升［1］。当前诊断乳腺癌的常用检查方法有乳腺超声检查、钼靶、M RI、穿刺活检等，但因其主观性大及有创性，存在较大的局限性；血清肿瘤标志物检测则因简便、无创、客观和便于连续观测等方面的优势而得到广泛认可［2］。其中乳腺癌相关血清标志物有：CA153、CA27‐29、CEA、IC‐T P、c‐erbB‐2、BCA225等［3，4］，而1996年被美国肿瘤学会（American Society of Clinical Oncology ，AS‐CO）推荐应用于临床的血清乳腺癌标志物只有CA153、CEA 、BCA225等［3］，虽然其对于乳腺癌在临床上的诊治有一定的实践指导意义，但因特异性、敏感性的缺陷，在临床上应用价值有限，因此寻找有价值的乳腺癌血清标志物成为临床上的一个难题。本文结合国内外新研究报道，就近年来血清标志物在乳腺癌的早期诊断、病情监测及预后等方面的相关临床研究进展作一综述。
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地中海贫血的临床表现与鉴别
地中海贫血是一组遗传性血液性疾病,它是由于一种或多种血红蛋白中珠蛋白链基因缺陷所造成的疾病[1].其临床表现是由于以下两方面引起的,首先,由于α或β珠蛋白链生成减少导致成人血红蛋白主要成分合成不足,同时导致小细胞低色素性贫血,即平均红细胞体积和平均红细胞血红蛋白量下降;其次,由于其中一种珠蛋白链合成减少,导致正常情况下与其组合的另一种珠蛋白链相对过量,而相对过剩的珠蛋白并未形成正常球蛋白的肽链,而是相互积聚形成不稳定的四聚体,并在红细胞中沉淀,使红细胞生成受损或产生溶血[2].
