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以认知功能障碍为首发症状的齿状核红核苍白球路易体萎缩症一家系的临床、基因特点
目的 报道1个以认知功能障碍为首发症状的齿状核红核苍白球路易体萎缩症(dentatorubral-pallidoluysian atrophy,DRPLA)的家系,分析其临床、基因特点.方法 收集该家系患者的临床资料.对先证者及其余4名健康家系成员进行肌萎缩蛋白-1(atrophin-1,ATN1)基因5号外显子CAG重复序列检测.将先证者的PCR产物进行TA克隆测序.结果 该家系共有患者5例,成年发病4例,儿童发病1例.先证者以认知功能障碍为首发症状,其余成年患者则以共济失调为首发症状.1例2岁发病的患者表现为肌阵挛性癫痫.PCR反应产物直接测序显示先证者DNA链CAG拷贝数为61次,而TA克隆检测发现患者存在61和64次两种不同CAG拷贝数.结论 DRPLA存在显著的临床异质性,个别患者可以认知功能障碍为首发症状,ATN1基因的CAG重复次数检测对于诊断DRPLA非常重要,我国患者可能也存在体细胞嵌合现象.
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大鼠急性视网膜缺血节细胞死亡时脑红蛋白的表达
目的 研究大鼠视网膜急性缺血中视网膜节细胞(RGCs)死亡时脑红蛋白(Nsb)的表达.方法 实验研究.采用特异性结扎大鼠视网膜动脉的方法造成视网膜急性缺血模型,按照结扎时间不同(0、15、30、60 min)分为A、B、C、D组,每组10只大鼠,均以左眼为实验眼.每组随机选取3只大鼠视网膜用于免疫印迹法检测,4只大鼠视网膜做HE染色节细胞计数及免疫组化染色荧光强度分析,3只大鼠做免疫电子显微镜观察.采用单因素方差分析对不同结扎时间Ngb蛋白定量及RGCs数目进行统计学分析,采用KSD-t检验进行两两比较.结果 视网膜完全结扎后,A、B、c、D组Ngb蛋白表达量分别为1.439±0.014、2.023±0.134、1.416±0.030及1.073±0.064;RGCs计数结果分别为4368±124、4296 ±96、4132±104、3973±115,组间比较差异有统计学意义(F=79.548,10.191,P<0.05).B组表达高,之后逐渐降低,C组接近正常,此时与A组比较RGCs数量开始减少,D组Ngb的表达已明显低于A组,与A组比较RGCs数量进一步减少.在视网膜各层中,Ngb的表达以RGCs层为高,其次为内丛状层与外丛状层.RGCs中Ngb主要分布在胞质,C组线粒体外室和线粒体嵴也发现有Ngb表达,而内核层及外核层细胞的胞质内始终未见Ngb的表达.结论 Ngb在大鼠RGCs急性缺血死亡时表达快速升高,主要表达于RGCs的胞质内,与RGCs的生存状态关系密切.
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成年大鼠脑损伤后神经前体细胞增殖分化的调控
目的:液压冲击性脑损伤后成年大鼠神经前体细胞出现增殖及分化,探讨外源性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,bFGF)和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)对其增殖及分化的调控.方法:制作液压冲击性脑损伤模型,bFGF,NT-3及人工脑脊液(artificialcerebrospinalfluid,aCSF)分别于伤后灌注侧脑室1,3,7和14 d.免疫组织化学方法动态检测5溴脱氧尿苷(5'Bromodexyuridine,BrdU)及胶质纤维酸性蛋白/5溴脱氧尿苷(Gial fibrillary acidic protein/5'Bromodexyuridine,GFAP/BrdU,双标免疫染色)的表达.结果:同aCSF组相比较,应用bFGF于伤后3～14 d明显促进BrdU阳性细胞、GFAP+/BrdU+-双阳性细胞和GFAP-/BrdU+-单阳性细胞增多(P均＜0.05);NT-3于伤后3～7 d减少BrdU阳性细胞和GFAP+/BrdU+双阳性细胞增多(P均＜0.05),而对GFAP-/BrdU+单阳性细胞无明显影响(P＞0.05).结论:bFGF促进液压冲击性脑损伤后成年大鼠神经前体细胞增殖,而NT-3抑制其增殖,促进其向非星形胶质细胞分化.
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滋补肝肾中药对大脑中动脉闭塞大鼠脑勿动蛋白A表达的影响
目的:观察滋补肝肾中药对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑内勿动蛋白A的影响,探讨中药促进神经发生的作用途径.方法:实验于2004-09/2005-01在山东省医学分子生物学重点实验室完成.30只大鼠随机分为药物组、模型组、假手术组,每组10只.用Tamura法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,于造模成功后6天药物组给予中药复方复健片水溶液10 g/kg灌胃,复健片主要成份为何首乌、草决明、桑寄生、海马、淫羊藿等,由山东鲁信药业有限公司生产.其余两组分别灌胃给予同等量生理盐水2周,1次/天.原位杂交法观察大脑中动脉闭塞大鼠脑内勿动蛋白-A的表达,并对切片进行图像分析,测定染色平均灰度.结果:30只Wistar大鼠纳入结果分析.模型组给药1周后大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为122.60±10.96,药物组为104.07±14.00,两组比较差异有显著性(P＜0.01);2周后模型组大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为132.48±7.77,药物组为98.09±10.33,两组比较差异有显著性意义(P＜0.01).同组1周与2周比较差异均无显著性(P均＞0.05).假手术组大鼠脑内勿动蛋白染色平均灰度为130.96±1.23,与药物组比较差异显著(P＜0.01),与模型组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:中药复方复健片可显著抑制大脑中动脉闭塞大鼠脑内勿动蛋白A的表达,从而促进缺血性卒中神经发生.
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脑缺血再灌注后生长相关蛋白和勿动蛋白基因表达与神经行为功能的关系
背景:生长相关蛋白(GAP-43),勿动蛋白A(Nogo-A)与中枢神经损伤后的再生修复有密切关系,但其基因表达与神经行为功能的关系研究较少.目的:观察大鼠脑缺血再灌注后GAP-43和Nogo-A基因表达与神经行为功能的关系.设计:随机对照的基础实验研究.地点和对象:本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性SD大鼠36只,体质量230～280 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.干预:以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型.应用Bederson神经功能评分法评定脑缺血再灌注后神经行为功能的恢复,原位杂交技术检测脑组织GAP-43 mRNA和Nogo-A mRNA的表达.主要观察指标:脑缺血再灌注后神经行为功能,脑组织GAP-43 mRNA和Nogo-A mRNA的表达.结果:脑缺血再灌注后神经功能评分于再灌注2～14 d降低,与缺血再灌注2 h比较,差异有显著性意义.在皮质区和纹状体区,脑缺血后GAP-43 mRNA表达(阳性细胞数/视野).于再灌注12 h和2 d出现"双峰"升高现象,以后逐渐降低,再灌注14 d,恢复至假手术组水平.No-go-A mRNA表达(阳性细胞数/视野).也于12 h和2 d出现"双峰"增高,但于再灌注7 d降至假手术组水平.结论:GAP-43 mRNA表达增高和Nogo-A mRNA表达早期升高、晚期下降,可能有助于脑缺血损伤后的神经功能恢复.
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帕金森病病因蛋白质:α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的影响
目的:α-突触核蛋白是帕金森病的病因蛋白质之一,α-突触核蛋白与酪氨酸羟化酶具有相互作用.制备一个基因重组酪氨酸羟化酶,探讨α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的影响.方法:实验于2004-05/11在北京老年医学研究所神经生物研究室完成.将携带人酪氨酸羟化酶cDNA的基因重组质粒pGEX-TH转化BL21(DE3)细菌使其表达谷胱甘肽S转移酶-TH为标签的融合蛋白质,用谷胱甘肽-琼脂糖4B亲和层析法纯化基因重组酪氨酸羟化酶,用高压液相色谱(HPLC)法分析酪氨酸羟化酶活性,将α-突触核蛋白添加至酪氨酸羟化酶的酶促反应体系中.观察基因重组型酪氨酸羟化酶制备生成物特点,以及α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的作用.结果:①基因重组酪氨酸羟化酶约占菌体可溶性蛋白组分的1%,纯化的酪氨酸羟化酶在SDS-PAGE上表现为单一条带,可催化L-酪氨酸发生羟化反应生成L-多巴.②随α-突触核蛋白浓度递增,酪氨酸羟化酶活性有不同程度的下降.结论:原核表达方法可制备纯化度较高的人基因酪氨酸羟化酶,α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性具有抑制作用.
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脑梗死患者脑小动脉平滑肌细胞表型转化与血管修复的相关性
目的:观察两种血管收缩功能相关蛋白在脑梗死患者小动脉血管平滑肌细胞 (vascular smooth muscle cell,VSMC)中免疫组织化学表达变化,以期了解脑小动脉病变中 VSMC的表型转化及细丝蛋白在表型转化中的意义,指导临床小动脉硬化型脑卒中的准确防治. 方法:选取尸解脑标本,分为脑梗死组及对照组;免疫组化显示脑小动脉α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白的表达变化,并进行定量分析. 结果:对照组α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白表达强度 (PU)分别为 53.50± 2.00和 34.21± 2.36;梗死组为 57.40± 2.43和 36.10± 1.51,与对照组相比 F值为 15.273和 4.592, P值为 0.001和 0.046,梗死组阳性表达强度增高,差异有统计学意义. 讨论:硬化小动脉中膜数目减少.内膜下 VSMC显著增生,并可能同时存在合成及收缩表型 VSMC,分别代偿性的高表达细丝蛋白及α平滑肌肌动蛋白,以维持血管构型及收缩能力.
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早期脑损伤新生大鼠脑白质神经蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖表达及意义
目的 观察宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质Neurocan和Versican表达情况.方法 40只受孕母鼠随机分为对照组(n=10)和脂多糖组(n=30),给予受孕18 d的脂多糖组孕鼠脂多糖(血清型055)380 μg/kg,连续2 d腹腔注射;对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水.每组随机选取幼鼠各60只,于0,1,7,14,21,28 日龄各处死10只仔鼠,HE染色法检测脑组织病理变化,荧光定量RT-PCR方法测定Neurocan和Versican相对表达量.结果 对照组孕鼠无死亡及提前分娩,共娩出活产足月仔鼠124只;脂多糖组中孕鼠5只死亡,6只提前分娩,剩余19只共娩出活产足月仔鼠132只,死亡24只.与对照组比较,0,1,7,14,21,28日龄脂多糖组新生大鼠脑白质Neurocan mRNA和Versican mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 宫内感染致脑损伤后,脑白质区Neurocan和Versican的表达明显上调.
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肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用GDNF促进大鼠脊髓损伤后功能恢复
目的:肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用胶质源性神经营养因子(GDNF)恢复大鼠脊髓损伤的功能.方法:将成年大鼠分为脊髓半切洞损伤组 (A组)、脊髓半切洞损伤+肋间神经转位脊髓神经根桥接组(B组)、脊髓半切洞+肋间神经转位脊髓神经根桥接+胶质源性神经营养因子(C组).手术后应用联合行为评分(CBS).感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查,测定脊髓功能恢复情况.结果:3组CBS得分A组>B组 >C组,SEP和MEP潜峰时,均A组>B组>C组,统计分析均有显著差异性(P<0.05).结论: 肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用胶质源性神经营养因子能促进损伤脊髓功能的恢复.
