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靶向沉默HuR基因增强人肝癌细胞Hep3B对多柔比星的化疗敏感性
目的：探讨沉默人抗原R（HuR）基因对人肝癌细胞Hep3B多柔比星化疗敏感性的影响及相关机制。方法脂质体包裹靶向HuR基因的短发夹RNA（shRNA）转染Hep3B细胞，real-time PCR和Western blot分别检测沉默HuR基因后HuR、MDR1 mRNA和蛋白的表达，MTT法检测沉默HuR基因后Hep3B细胞对多柔比星化疗的敏感性，流式细胞术（FCM）检测沉默HuR基因后对Hep3B细胞凋亡的影响。结果 HuR shRNA质粒转染Hep3B细胞能有效沉默HuR基因，mRNA和蛋白水平的抑制率分别为82%和75%。与未处理Hep3B细胞（Mock组）比较，沉默HuR基因的Hep3B细胞（siHuR组）对多柔比星的半数抑制浓度（IC50）显著降低[（86.36±6.54）μg/L vs.（318.56±9.89）μg/L， P＜0.05]，细胞凋亡率明显升高[（30.48±5.12）%vs.（8.86±1.35）%，P＜0.05]，MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达显著降低，比值分别为0.36±0.08和0.28±0.11，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Mock组与转染对照shRNA质粒Hep3B（Control组）的各检测指标均无统计学差异（P＞0.05）。结论沉默HuR基因可能通过抑制耐药蛋白P-gp的表达增强其对多柔比星的化疗敏感性。
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烟草烟雾提取物诱导人小气道上皮抗原R对转录因子snail表达的影响
目的 观察烟草烟雾提取物(CSE)刺激的小气道上皮中人抗原R的表达情况,探讨人抗原R对上皮间质转化(EMT)关键转录因子snail的调控作用.方法 体外培养人小气道上皮细胞(HSAEpiC)并给予CSE刺激,按CSE浓度和时间分为对照组、1％-24 h组、3％-24 h组、1％-48 h组及3％-48 h组.应用实时荧光定量PCR法、Westem blot法检测CSE刺激下人抗原R mRNA和蛋白水平.采用小RNA(siRNA)干扰技术特异性降低人抗原R表达,根据转染情况分为对照组、转染对照组及转染组,观察转染后mRNA和蛋白表达的变化,检测CSE刺激及人抗原R干扰时转录因子snail、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白及间叶细胞标志物波形蛋白表达水平变化.结果 CSE刺激后,人抗原R mRNA及蛋白水平表达均升高,1％-24 h组mRNA吸光度值从(1.12±0.04)升高到(1.26±0.05),蛋白表达量从(1.17 ±0.06)升高到(1.42 ±0.06);3％-48 h组mRNA吸光度值从(1.41±0.06)升高到(1.49±0.06);蛋白表达量从(1.35±0.08)升高到(1.42±0.06),组内前后比较差异有统计学意义(均P＜0.05).人抗原R siRNA转染后,mRNA[(0.33±0.06),(1.02±0.10)]及蛋白表达水平明显降低[(0.46±0.07),(0.97±0.06),均P＜0.01];对照siRNA转染后人抗原R表达变化无统计学意义[mRNA:(1.02±0.10),蛋白:(0.97 ±0.06),均P＞0.05].3％ CSE刺激48 h后,人抗原R(1.47±0.11)、snail(1.46±0.05)和波形蛋白(1.56±0.05)表达升高,E-钙黏蛋白(0.49±0.05)表达降低;人抗原R siRNA转染后,人抗原R(0.84±0.06)、snail(1.22±0.06)、波形蛋白(1.11±0.09)表达降低,E-钙黏蛋白表达升高(0.73±0.06,均P＜0.05).结论 CSE促进了小气道上皮细胞中人抗原R的表达;人抗原R参与了EMT关键转录因子snail的调控过程,并可能通过该作用调控EMT进程.
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人抗原R与乏氧诱导因子1α在肾细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨人抗原R(HuR)与乏氧诱导因子1α(HIF-1α)在肾细胞癌中表达的意义及二者的相关性. 方法 应用免疫组化PV-9000两步法检测2007年1月至2012年7月76例肾癌组织、20例癌旁组织、15例正常肾组织中HuR蛋白及HIF-1α蛋白的表达情况,分析HuR及HIF-1α蛋白表达与肾癌临床病理参数的关系,评价两者在肾癌中表达的相关性.Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Spearman等级相关分析、X2检验等进行相关性分析. 结果 HuR在肾癌细胞质中的阳性表达率(38.2％)明显高于癌旁组织(10.0％)和正常肾组织(13.3％),差异有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α在肾癌胞核中的阳性表达率(48.7％)明显高于癌旁组织(5.0％)和正常肾组织(0),差异有统计学意义(P＜0.05).胞质HuR表达水平与肾癌临床分期、病理类型及淋巴结转移有相关性(P＜0.05);胞核HIF-1α表达水平与肾癌临床分期、病理分级和淋巴结转移有相关性(P＜0.05).肾癌中胞质HuR表达水平与胞核HIF-1α表达水平呈正相关(P＜0.01).66例肾癌患者随访6～ 67个月,HuR胞质阴性组及HIF-1α胞核阴性组的总体生存率及平均生存时间明显优于阳性组(P＜0.05).结论 肾细胞癌组织中HuR及HIF-1α的表达水平和患者的临床病理参数及预后相关,二者有望成为肾癌诊断及预后评估的重要标志物.
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带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定
目的 构建人抗原R (HuR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能.方法 提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞,采用Western blotting分析HuR在细胞中的表达,并采用Real-time PCR检测HuR过表达对DUSPl mRNA水平的影响.结果 成功构建了重组质粒pcDNA3.l-HuR-FLAG,Western blotting显示该质粒能在NIH3T3细胞中高效表达,Real-time PCR结果表明HuR过表达可提高细胞内DUSP1基因的mRNA水平.结论 成功构建了带FLAG标签的HuR真核表达载体,该载体能在NIH3T3细胞中有效表达,并具有相应的生物学功能,为深入研究肿瘤细胞中HuR对DUSP1基因表达的调控机制奠定基础.
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激活大麻素受体1诱导的单核巨噬细胞J774A.1的迁移依赖RNA结合蛋白HuR
目的 研究大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1)在单核巨噬细胞迁移中的重要作用以及RNA结合蛋白人抗原R (human antigen R,HuR)参与其中的可能机制.方法 选用单核巨噬细胞系J774A.1,应用琼脂糖凝胶电泳和免疫荧光染色技术鉴定J774A.1中CB1以及HuR的表达;ACEA和AM281分别为CB1的药理学激动剂和拮抗剂,应用Boyden chamber法检测ACEA和AM281对J774A.1迁移活性的影响.HuR的基因干扰用于确定激活CB1诱导的J774A.1迁移功能是否依赖HuR;胞质蛋白的分离用于探究激活CB1是否能引起J774A.1胞质中HuR的富集;RT-qPCR和Western blotting法检测CB1和HuR mRNA和蛋白质的变化情况.结果 该研究证明J774A.1在基因和蛋白质水平上均表达CB1和HuR;激活CB1能够促进J774A.1的迁移(P＜0.01)并且能够被其药理学拮抗剂AM281所抑制;激活CB1诱导的J774A.1的迁移依赖HuR;激活CB1促进了J774A.1胞质中HuR的富集进一步影响了CB1的表达,由此HuR参与了激活CB1诱导的J774A.1的迁移.结论 激活CB1能够诱导单核巨噬细胞系J774A.1的迁移,且此过程依赖RNA结合蛋白HuR.
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人抗原R在肿瘤诊断治疗中的研究进展
人抗原R(HuR)是RNA结合蛋白中胚胎致死异常视觉家族的一员,可以结合并稳定在3'非翻译区(UTR)中的富含腺嘌呤和尿嘧啶的序列(AREs),调节mRNA的不稳定性.多种肿瘤细胞质中高表达HuR,并与不良预后和淋巴结转移等密切相关;抑制HuR基因表达可降低肿瘤细胞的增殖和侵袭性.HuR可通过抗凋亡、维持血管生成及逃脱机体抗肿瘤免疫机制等方面促进肿瘤细胞的生长、浸润.HuR有望成为肿瘤诊断、治疗的新靶点.
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血小板源性生长因子诱导下人抗原R对气道平滑肌细胞内转化生长因子β1表达的影响
目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)诱导下人抗原R(HuR)对气道平滑肌细胞(ASM)内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 体外培养ASM以PDGF(20 μg/L)分别在0、6、12和24h刺激ASM以诱导哮喘状态.实时荧光定量PCR检测各时间点细胞内HuR、TGF-β1mRNA水平,Western印迹法检测各时间点细胞内HuR、TGF-β1的蛋白水平.利用RNA干扰技术特异性阻断HuR表达,Western印迹法检测干扰组和对照组HuR及TGF-β1在PDGF刺激0、6和12 h的表达水平.酶联免疫吸附法检测干扰组和对照组在PDGF刺激0、6和12h后,细胞培养上清中TGF-β1的蛋白水平.将细胞依次分为对照组、对照+ PDGF 6 h组、干扰组及干扰+PDGF 6 h组,然后各组依次加入放线菌素D(10 mg/L)刺激0、4、8和12 h,检测各组TGF-β1 mRNA的半衰期.结果 PDGF刺激下HuR表达呈现明显的时间依赖性,0、6、12和24h细胞内HuRmRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.35±0.14、1.73±0.17、2.07±0.10及0.51±0.10、0.67±0.05、0.83±0.07、0.95±0.02(均P＜0.05).TGF-β1的mRNA及蛋白水平也呈时间依赖性,0、6、12和24h细胞内TGF-β1 mRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.27±0.06、1.60±0.10、1.87±0.10及0.72±0.09、0.87±0.07、1.13±0.12、1.33±0.05(6与12 h、12与24h两两比较,均P＜0.05).PDGF刺激0 h,干扰组与对照组HuR表达差异无统计学意义(P＞0.05),PDGF刺激12 h,干扰组HuR表达较对照组降低了21.9％ (P ＜0.05).对照组0、6、12 h TGF-β1蛋白相对表达量分别为0.70±0.05、0.89±0.06、1.06±0.05,而干扰组0、6、12 h TGF-β1蛋白相对表达量分别为0.67±0.09、0.77±0.03、0.89±0.05(与对照组相应时间点比较,均P ＜0.05).细胞培养上清TGF-β1含量对照组0、6、12 h依次为(773.33±16.32)、(877.97±16.03)、(3 060.34±82.53)ng/L,而干扰组0、6、12 h依次为(277.33±9.93)、(407.77±7.14)、(828.05±11.67)ng/L(与对照组相应时间点比较,均P＜0.05).放线菌素D刺激细胞,干扰组TGF-β1的RNA半衰期与干扰+PDGF 6 h组比较差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组及对照+ PDGF 6 h组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 PDGF可上调ASM内TGF-β1表达,HuR通过增加mRNA稳定性参与PDGF诱导的哮喘状态下TGF-β1的表达过程.
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猪苓多糖通过HuR调节Cyclin D1表达抑制A549细胞增殖
目的 研究猪苓多糖(polyporus polysaccharide,PPS)抑制肺癌A549细胞增殖的作用及其机制.方法 设对照组和PPS低、中、高剂量组,用MTT实验、流式细胞术检测PPS对细胞增殖的影响,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PPS对A549细胞Cyclin D1 mRNA表达水平及其稳定性的影响,用Western blotting检测PPS对A549细胞Cyclin D1蛋白、人抗原R(human antigenR,HuR)蛋白表达及对HuR蛋白胞浆及胞核内分布的影响.结果 与对照组比较,中、高剂量的PPS作用后,A549细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05),Cyclin D1 mRNA稳定性降低(P＜0.05),Cyclin D1 mRNA及蛋白表达减少(P＜0.05),HuR总蛋白没有明显变化,但胞浆HuR蛋白表达下降(P＜0.05),胞核HuR蛋白表达升高(P＜0.05).结论 PPS可抑制A549细胞增殖,其作用机制可能与改变HuR在细胞内定位,从而降低Cyclin D1 mRNA稳定性及Cyclin D1蛋白表达有关.
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人抗原R在急性肺损伤中的研究
人抗原R(HuR)广泛分布于哺乳动物体内，主要分布于细胞核，在低氧、应激、紫外线等刺激下，可与多种富含AU序列的mRNA结合，增加了mRNA的稳定性。HuR可被p38 MAPK-MK2、AMPK和PKC等多条信号通路调节，参与细胞周期、增殖、分化及炎症反应等。在肺的急性炎症反应中，HuR可以和多种炎症因子mRNA结合，如肿瘤坏死因子α、白介素19和白介素8等，影响了mRNA稳定性和蛋白表达。敲除HuR后，炎症因子的mRNA及蛋白表达量均明显减少，表明HuR在急性肺损伤中起了重要作用。
关键词： 急性肺损伤 人抗原R p38丝裂原活化的蛋白激酶 白介素8 白介素19 -
人抗原R mRNA与蛋白和环氧合酶-2蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其意义
目的 探讨人抗原R(human antigen R,HuR)mRNA与蛋白和环氧合酶-2(COX-2)蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其与卵巢浆液性癌临床病理生物学特征的关系.方法 采用RT-PCR技术、免疫组化方法分别检测中国医科大学附属盛京医院2006年1月至2008年2月收集的31例卵巢浆液性癌组织标本、22例卵巢浆液性良性瘤组织标本中HuR mRNA与蛋白和COX-2蛋白的表达,并以8例正常卵巢组织作为对照组.结果 (1)HuR mRNA在卵巢浆液性癌中表达明显高于卵巢浆液性良性瘤和正常卵巢组织(P＜0.05).HuR mRNA的表达与卵巢浆液性癌细胞分化有关(P＜0.05),与手术病理分期、淋巴结转移无关(P＞0.05).(2)HuR蛋白相对含量和胞浆表达阳性率在卵巢浆液性癌中的表达显著高于卵巢浆液性良性瘤和正常卵巢组织(P＜0.05).HuR蛋白相对含量和胞浆表达阳性率与卵巢浆液性癌细胞分化有关(P＜0.05),与手术病理分期、淋巴结转移无关(P＞0.05).(3) COX-2蛋白相对含量与卵巢浆液性癌手术病理分期有关(P＜0.05),与细胞分化、淋巴结转移无关(P＞0.05).依据31例卵巢浆液性癌中免疫组化结果半定量分析,经Spearman等级相关分析发现HuR与COX-2之间呈正相关(r =0.680,P=0.000).结论 卵巢浆液性肿瘤的发展与胞浆中HuR的过表达有一定相关性,HuR与COX-2蛋白在卵巢浆液性癌中的表达呈正相关.
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RNA结合蛋白人抗原R在人脂肪细胞分化中的作用
目的 通过检测RNA结合蛋白人抗原R(HuR)与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)、脂肪酸合成酶(FASN)、脂蛋白脂肪酶(LPL)在人脂肪细胞分化过程中的表达变化,并探讨其作用.方法 对人脂肪源性间充质干细胞进行成脂诱导分化,油红O染色观察细胞成脂情况,分别以实时定量 PCR和Western印迹检测HuR、FABP4、FASN、LPL mRNA和蛋白表达水平的变化;siRNA干扰HuR后,进一步观察细胞成脂变化和成脂相关基因的表达水平.结果 人脂肪源性间充质干细胞在成脂诱导分化过程中HuR、FABP4、FASN和LPL的mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高(均P<0.01).干扰HuR表达后,细胞成脂水平干扰组较对照组下降,FABP4、FASN、LPL mRNA表达水平无明显变化,而其蛋白表达水平均显著下调(均P<0.05).结论 HuR主要通过调节FABP4、FASN和LPL蛋白水平的变化影响成脂,促进人脂肪细胞的分化.
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青蒿琥酯对人肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制
目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人肺癌细胞株A549增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8法检测不同质量浓度的ART对A549细胞作用24、48 h后细胞的增殖水平,Transwell小室试验检测30 μg/ml青蒿琥酯对A549细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测对A549细胞迁移能力的影响.Western blotting检测A549细胞经30 μg/ml的ART作用48 h后人抗原R(human antigen R,HuR)和MMP-9蛋白表达变化.结果:ART能够抑制人肺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性(P＜0.05).与未处理组比较,ART(30 μg/ml)处理的A549细胞穿膜的细胞数目显著减少[(47.11±8.61)vs(131.00±14.58)个,P＜0.01];A549细胞迁移距离显著缩短[(1.08±0.13)vs(2.91±0.24)mm,P＜0.01];A549细胞内HuR和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:ART能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HuR的表达有关.
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HuR siRNA对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响
目的:探讨HuR siRNA对人肺腺癌A549株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制.方法:HuR siRNA瞬时转染肺腺癌A549细胞24h后,CCK-8实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting检测HuR及基质金属蛋白酶(MMP)-9基因mRNA和蛋白质表达.结果:HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA显著降低A549细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P＜0.01).结论:下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9有关.
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细胞间黏附分子-1在 ARDS 小鼠肺微血管内皮细胞内的表达变化
目的：细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1， ICAM-1）在介导中性粒细胞肺部浸润的过程中起到很大作用。在脂多糖（ Lipopolysaccharides ，LPS）诱导的急性呼吸窘迫综合征小鼠模型中，观察ICAM -1以及丝裂原激活蛋白激酶2（mitogen-activated protein kinase activated protein kinase 2， MK2）和人抗原R（human antigen R，HuR ）在小鼠肺微血管内皮细胞（ pulmonary microvascular endothelial cell ， PMVEC）内表达的变化。方法健康清洁型6～8周雄性C57BL／6小鼠，随机数字表法分为对照组和LPS组，每组5只。 LPS组腹腔注射LPS 5 mg／kg （溶于100μL的PBS中），对照组腹腔注射PBS （5 mg／kg），24 h处死全部小鼠。在LPS诱导的小鼠ARDS模型中，用Real-time PCR方法检测小鼠肺组织分离得到的PMVEC内人抗原R（ human antigen R ，HuR）、ICAM-1的mRNA表达量，用Western blot法检测总MK2、磷酸化MK2、HuR以及ICAM-1表达量的变化，利用流式细胞仪检测PMVEC表面ICAM-1的表达量及肺部浸润的中性粒细胞数量。结果 LPS组小鼠肺组织W／D较对照组高，差异有统计学意义[（6．16±0．40） vs （3．61±0．28），P＜0．05]。流式细胞术检测LPS组中性粒细胞浸润率较对照组高[（13．92±3．23）％vs （3．24±1．24）％，P＜0．05]。 LPS刺激后小鼠肺组织中ICAM-1的mRNA及蛋白表达较对照组明显增加（P＜0．05），PMVEC表面ICAM-1表达较对照组也明显增加（P＜0．05）。 MK2总量无明显变化，磷酸化MK2较对照组明显增加，HuR mRNA及蛋白总量无明显变化，但存在核质转移。结论特异性阻断或减少微血管内皮细胞中HuR的表达可使ICAM-1表达减少，从而减少中性粒细胞的浸润，减轻ARDS病理生理改变，可为临床治疗ARDS提供一个新靶点。
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肝癌组织中 HuR 和 HIF-1α的表达及其相关性
目的：观察人抗原R（ HuR）和缺氧诱导因子（ HIF）-1α在肝癌组织中的表达变化，并探讨其相关性。方法取48例肝癌组织及癌旁组织标本，采用免疫组化染色法检测肝癌组织及癌旁组织中HuR和HIF-1α蛋白的表达，采用荧光定量PCR法检测肝癌组织中HIF-1αmRNA的表达。结果肝癌组织中HuR和HIF-1α蛋白阳性表达率分别为67％和58％，显著高于癌旁组织的19％和10％（ P均＜0．01）。肝癌组织中HuR与HIF-1α蛋白的表达呈正相关（r＝0．723，P＜0．01）。 HuR蛋白高表达者中HIF-1αmRNA的表达较HuR蛋白低表达者显著上调（P＜0．05）。结论肝癌组织中HuR和HIF-1α蛋白表达上调且呈正相关关系，HuR可能增强HIF-1αmRNA的稳定性，从而促进其表达。
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猪苓多糖通过调节HuR介导bcl-2表达诱导T24细胞凋亡
目的 研究猪苓多糖(polyporus polysaccharide,PPS)对膀胱癌T24细胞凋亡的作用及其机制.方法 T24细胞常规培养后加入不同剂量PPS,利用Hoechst染色、流式细胞术检测PPS对细胞凋亡的影响,利用qRT-PCR检测PPS对T24细胞bcl-2 mRNA表达水平及其稳定性的影响,通过Western Blot法检测PPS对T24细胞bcl-2蛋白、人抗原R(human antigen R,HuR)蛋白的表达及对HuR蛋白胞浆及胞核内分布的影响.结果 与对照组比较,中、高剂量的PPS作用24 h后,T24细胞凋亡明显增多(P＜0.05),bcl-2 mRNA稳定性降低(P＜0.05),bcl-2蛋白及mRNA表达减少(P＜0.05),总HuR蛋白没有明显变化,但胞浆HuR蛋白表达下降(P＜0.05),胞核HuR蛋白表达升高(P＜0.05).结论 PPS可诱导T24细胞凋亡,其作用可能与影响HuR在细胞内定位,降低bcl-2 mRNA稳定性及减少bcl-2蛋白表达有关.
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人抗原R与血管内皮生长因子-C在非小细胞肺癌中的表达及意义
背景与目的 血管内皮生长因子-C(VEGF-C)是介导淋巴管生成的重要分子,参与了肿瘤淋巴道转移的过程.人抗原R(HuR)是早发现的RNA结合蛋白之一,可增加多种生长因子、细胞因子mRNA的稳定性,从而上调蛋白质表达.本研究的目的是探讨HuR在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与VEGF-C表达、肺癌临床病理学特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法(SP法)检测81例NSCLC组织和15例肺良性病变组织中HuR和VEGF-C的表达情况.结果 免疫组织化学显示:81例NSCLC的HuR胞浆阳性表达率、HuR胞核阳性表达率、VEGF-C阳性表达率分别为45.7%(37/81)、82.7%(67/81)和70.4%(57/81),与肺良性病变组织比较均有显著性差异(P＜0.05).胞浆HuR表达水平与淋巴结转移、分化程度和pTNM分期密切相关(P＜0.05),但与患者的性别、年龄、肺癌组织学类型无明显关系(P＞0.05).胞浆HuR高表达(P＜0.05)而不是胞核HuR高表达(P＞0.05)与VEGF-C的表达呈正相关.结论 胞浆HuR和VEGF-C在肺癌组织中的表达与肿瘤进展有关.HuR可能参与了肿瘤细胞VEGF-C的表达调控.
关键词： 人抗原R 血管内皮生长因子-C 非小细胞肺癌 免疫组织化学 -
pEGFP-HuR真核表达载体的构建及热休克刺激后细胞内定位的改变
目的 构建人抗原R(HuR)的绿色荧光真核表达载体,初步探讨其生物学功能.方法 克隆构建pEGFP-HuR(绿色荧光蛋白HuR)真核表达载体,并使用脂质体转染的方法将pEGFP-HuR转染入NIH 3T3细胞,Western blotting(WB)检测其表达,并给予热休克处理,利用荧光显微镜观察其在细胞内定位及与应激小体的共定位情况.结果 pEGFP-HuR真核表达载体构建成功,转染入细胞后,利用WB技术及荧光显微镜技术均能观察到其在细胞内高表达,并主要定位于细胞核内,给予热休克处理后,HuR向胞外移出并形成颗粒状小体,与应激小体的主要成分G3BP1蛋白存在共定位.结论 HuR主要定位于细胞核内,给予热休克处理后,HuR向胞外移动并与应激小体形成共定位,提示HuR定位的改变可能在应激时具有重要意义.
