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人肺癌A549细胞直接暴露可吸入物质体外试验方法的建立及应用
目的 建立人肺癌A549细胞直接暴露可吸入物质体外试验方法并进行初步的应用.方法 将二氧化氮气体用洁净空气稀释后分别配制成5.1、10.7、15.0、20.7 mg/m3,在多孔膜上生长的A549细胞放置在水平扩散染毒仓内,通过气液界面技术(ALI)暴露于不同浓度的二氧化氮气体,15 ml/min,37℃染毒1h,利用MTT和NUR试验检测细胞毒性;采集不同工况下的汽油发电机尾气,10 ml/min,37℃染毒A549细胞15 min,利用CCK-8和MTT试验检测细胞毒性.结果 细胞存活率随着NO2气体浓度的升高(5.1 ～20.7 mg/m3)显著降低(P＜0.05),并且呈剂量-效应关系(MTT拟合曲线:yMTT =0.989-0.021xNO2R2=0.84,P＜0.01;NUR拟合曲线:y NUR=1.032-0.026xNO2 R2=0.88,P＜0.01).怠速(冷启动)、53％和100％负荷下,A549细胞MTT和CCK-8存活率显著低于空气暴露组(P＜0.05).结论 体外细胞直接暴露可吸入物质方法可以应用于有害物质的体外吸入毒性研究,对工业和环境场所中的有害物质的毒性评价提供了新的技术和方法.
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1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮诱导人肺癌A549细胞凋亡
目的:研究1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对人肺癌A549细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对A549细胞中活化型半胱天冬酶-3(cleaved-Caspase-3),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),叉头框蛋白O1(FOXO1),磷酸化叉头框蛋白O1(p-FOXOI),Bel-2促细胞凋亡蛋白(Bim)表达的干预作用.结果:1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮(1.25,2.5,5,10,20 mg·L-1)能质量浓度和时间依赖性地抑制A549细胞增殖.作用12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为2.80,2.05μmol·L-.流式细胞术结果显示1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮能显著诱导细胞凋亡,随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升.Western blot检测显示,1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮上调cleaved-Caspase-3 和Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.同时会下调p-Akt和p-FOXO1的表达,上调Bim的表达.结论:1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮能够诱导A549细胞凋亡,该药理作用可能与1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt/FOXO1信号通路有关.
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南方红豆杉水提物抑制EGFR/MAPK通路诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究
目的:进一步研究南方红豆杉水提物抑制人肺癌A549细胞增殖,诱导其凋亡的机制.方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡的影响;WesternBlot技术检测其对EGFR/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响.结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量效应相关性,IC50值为2.20mg/mL.2.0、2.5、3.0mg/mL南方红豆杉水提物处理24h后凋亡率分别为20.9％,38.0％和61.7％.南方红豆杉水提物抑制磷酸化EGFR和ERK1/2的水平,促进p38 MAPK磷酸化.但对EGFR、ERK1/2和p38 MAPK的表达却无影响.结论:南方红豆杉水提物通过多靶点抑制人肺癌A549细胞增殖,抑制EGFR/MAPK信号通路诱导其凋亡是其机制之一.
关键词： 南方红豆杉 人肺癌A549细胞 凋亡 EGFR/MAPK通路 -
南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究
目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制.方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用；生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线；流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响；倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响.结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用；其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡.结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用.
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苏木醇提物对人肺癌A549细胞作用影响的研究
目的:观察苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒作用和诱导凋亡作用.方法:制备苏木醇提物按不同浓度分别同人肺癌A549细胞共同培养,MTT法检测对细胞增殖作用的影响,光学显微镜、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻分析、细胞周期分析观察不同浓度苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒和凋亡作用.结果:苏木醇提物对人肺癌A549细胞有抑制作用,并呈浓度依赖性;苏木醇提物在诱导细胞发生凋亡外还存在其他形式的细胞死亡方式并对细胞各期均有影响.
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南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究
目的 探讨南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖抑制作用；以光镜、电镜、膜联蛋白V-FITC PI( Annexin V-FITC/PI)标记法检测细胞凋亡；以蛋白印迹法分析南方红豆杉水提物对细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),c-jun氨基未端激酶1/2(JNK1/2)和生存素(survivin)蛋白表达的影响.结果 南方红豆杉水提物能抑制A549细胞的增殖；南方红豆杉水提物处理A549细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞；Annexin V-FITC/PI标记法的定量检测进一步证实了南方红豆杉水提物诱导细胞凋亡的作用；蛋白印迹检测表明南方红豆杉水提物能使survivin表达下降,对ERK1/2和JNK1/2表达无影响.结论 南方红豆杉水提物能显著抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,主要通过调节survivin蛋白的表达来实现.
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斑蝥素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的研究
目的探讨斑蝥素诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制.方法采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用;以光镜、电镜、流式细胞仪、Annexin V-FITC标记法和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析斑蝥素对bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达的影响.结果斑蝥素能抑制A549细胞的增殖;斑蝥素处理A549细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;细胞周期的G1期前有低于二倍体细胞的凋亡峰;Annexin V-FITC标记法的定量检测进一步证实了斑蝥素诱导细胞凋亡的作用;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡细胞特征;蛋白印迹检测表明斑蝥素可使Bax表达升高,bcl-2和Survivin表达下降.结论斑蝥素能显著抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,并主要通过调节Bax、bcl-2和Survivin等蛋白的表达来实现.
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非诺贝特对人肺癌A549细胞侵袭及迁移能力研究
目的 研究不同浓度非诺贝特对人肺癌A549细胞侵袭、迁移能力及其金属基质蛋白酶(MMP)分子表达的影响.方法 低、中、高剂量实验组人肺癌A549细胞给予25.0,50.0,75.0 μmol·L-非诺贝特,对照组细胞不予非诺贝特干预.以Transwell小室实验及划痕实验检测干预后人肺癌A549细胞侵袭及迁移能力;以反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法检测各组人肺癌A549细胞金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和金属基质蛋白酶-9(MMP-9)表达情况.结果 与对照组比较,实验组人肺癌A549细胞侵袭数量降低(P＜0.01),且随非诺贝特干预浓度的增加及时间延长逐渐降低(P＜0.01).对照组和低、中、高剂量实验组人肺癌A549细胞迁移率分别为(76.35 ±6.46)％,(60.53±6.14)％,(33.44±6.42)％,(27.14±5.93)％.MMP-2蛋白相对表达量为94.76±6.64,73.57±7.33,52.41±6.86,23.01±6.06;MMP-9蛋白相对表达量分别为77.64±5.96,60.31±6.17,43.26±5.73,24.61±5.13.与对照组比较,实验组人肺癌A549细胞迁移率、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白均降低(P＜0.01),且随非诺贝特干预浓度增加而降低(P＜0.01).结论 非诺贝特可抑制人肺癌A549细胞侵袭、迁移能力,且呈时间-剂量依赖性,其作用机制可能与下调MMP-2及MMP-9分子表达相关.
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Vitexicarpin诱导肺癌A549细胞凋亡和对细胞周期作用的研究
目的:研究蔓荆子黄素(Vitexicarpin)对人肺癌细胞株A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:设计长春新碱(Vineristine)阳性对照组和空白阴性对照组及不同浓度的Vitexiearpin溶液作用于A549细胞,应用细胞增殖抑制试验和流式细胞仪检测技术,观察Vitexicarpin对A549细胞增殖的影响,以及其诱导A549细胞在不同时段的凋亡情况和对细胞周期的影响.结果:Vitexicarpin浓度为10μmol/L时对A549细胞的增殖抑制率超过50%,IC50为8.21μmol/L.另外,Vitexicarpin能有效诱导A549细胞凋亡.从Vitexicarpin作用4h开始,细胞被阻滞于G2/M期.随时间增加,G1/S期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,且凋亡细胞逐渐增多.结论:Vitexicarpin能抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞发生凋亡,将细胞阻滞于G2/M期是其可能作用机制.
关键词： vitexicarpin 人肺癌A549细胞 凋亡 细胞周期 -
不溶性镍化合物对人肺癌A549细胞镍含量影响
目的 探讨不溶性镍化合物对细胞中镍含量的影响.方法 用不同浓度的水不溶性氧化镍(NiO)和二硫化三镍(Ni_3S_2)分别处理人肺癌A549细胞,用原子吸收分光光度计(AAS)检测染毒48 h后细胞内镍含量并估算其摄取率.结果 经过终浓度为0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3μg/cm~2的Ni_3S_2处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.002 4,0.077 1,0.015 7,0.226 8,0.475 4,0.7,0.988 2μg;终浓度为0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16μg/cm~2的NiO处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.003,0.07,0.108,0.255,0.628,1.543,6.571μg;相同浓度(0.5,1.0,2.0μg/cm~2)镍颗粒物处理下,Ni_3S_2处理组细胞镍含量分别为(0.077 1±0.006 6,0.157 4±0.019 0,0.475 4±0.112 1)μg/105个细胞,均高于NiO处理组(0.070 1±0.003 2),(0.108 1±0.015 9),(0.255 2±0.041 5)μg/105个细胞,各剂量组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人肺癌A549细胞对不溶性镍化合物的摄取与其染毒剂量成正比,且相同浓度下对Ni_3S_2的摄取率高于NiO.
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骆驼蓬全草提取物的抗肿瘤作用
目的 研究骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ(alcohol extractⅠ,AEⅠ)、Ⅱ(alcohol extractⅡ,AEⅡ)和水提取物(water extract,WE)对人宫颈癌细胞Hela和人肺癌A549细胞的抑制作用.方法用体外细胞培养和MTT法检测骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ、Ⅱ和水提取物对Hela和A549细胞增殖的抑制作用.结果与结论 AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞的半数抑制质量浓度分别为187.31、195.32、118.50 mg·L-1.AEⅠ、AEⅡ和WE对A549细胞的半数抑制浓度分别为243.76、225.65、123.99 mg·L-1.AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞和A549细胞均有抑制作用,其抑制作用的强度与药物质量浓度成正比,同质量浓度下WS的抑制作用强.
关键词： 骆驼蓬全草 人宫颈癌HeLa细胞 人肺癌A549细胞 肿瘤抑制率 -
斑蝥素对A549细胞增殖抑制作用的研究
目的 研究斑蝥素对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制.方法 采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析A549细胞周期及斑蝥素对细胞周期的影响.结果 斑蝥素对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G2/M期阻滞.结论 斑蝥素对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用.
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抑制CK2增加Sorbitol引起的肺癌细胞凋亡
目的：探讨抑制CK2对雷帕霉素引起的肺癌细胞凋亡的影响。方法选用人肺癌A549细胞，MTT方法检测单独利用山梨醇（ Sor－bitol）或者联合CK2抑制剂TBB对A549细胞活性的影响，Western印迹检测单独利用 Sorbitol或者联合 CK2抑制剂TBB凋亡相关蛋白 caspase－3和PARP，以及线粒体凋亡相关蛋白细胞色素C表达水平的影响。结果 MTT结果显示，Sorbitol可以显著引起A549细胞活性下降，并呈现时间依赖性和剂量依赖性。 Western印迹结果显示，Sorbitol可以引起凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved caspase－3以及细胞色素C表达水平明显上升。 MTT结果显示，联合应用CK2抑制剂可以明显增加Sorbitol，引起细胞活性降低。 Western印迹显示，与单独给予Sorbitol比较，联合应用CK2抑制剂 TBB，凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved caspase－3进一步增加。结论 CK2抑制剂TBB可提高人肺癌A549细胞对Sorbitol的敏感性。
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miR-25-3p调控CPEB4基因对人肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨miR-25-3p和CPEB4基因在人肺癌A549细胞中的表达,阐明miR-25-3p对CPEB4基因的靶向作用及其对A549细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用免疫荧光化学技术检测CPEB4在A549细胞中的表达;运用生物信息学方法对miR-25-3p和CPEB4基因的靶向配对关系进行预测;脂质体2000转染miR-25-3p模拟物以及干扰CPEB4基因的siRNA后,采用Real-time PCR检测miR-25-3p和CPEB4基因mRNA在癌细胞中的表达;Western blot法检测CPEB4蛋白在癌细胞中的表达;Transwell小室试验检测癌细胞体外的侵袭性;细胞划痕试验检测癌细胞的迁移情况.结果 A549细胞胞质内CPEB4蛋白高表达,呈绿色荧光;miR-25-3p和CPEB4基因二者靶向配对良好;过表达miR-25-3p能降低A549细胞中CPEB4基因mRNA和蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭和迁移.结论 miR-25-3p通过下调人肺癌A549细胞中CPEB4基因的表达,进而抑制癌细胞的侵袭和迁移.
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透骨草提取物对人肺癌A549细胞凋亡及其PUMA/Bcl-2/Caspase-3蛋白表达的影响
目的:观察透骨草提取物对人肺癌A549细胞PUMA(P53上调凋亡调空因子)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Caspase-3(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3)蛋白表达的影响,从凋亡诱导的角度探讨透骨草提取物抑制A549细胞增殖的作用机制.方法:将A549细胞分为实验组和对照组;吖啶橙染色观察透骨草提取物对A549细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对A549细胞PUMA、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响.结果:吖啶橙染色结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞皱缩,胞核固缩、呈边集,出现凋亡小体.免疫组化检测结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞PUMA蛋白显著高于对照组(P＜0.05),而Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05).结论:透骨草提取物对A549细胞具有凋亡诱导作用,机制与促进A549细胞PUMA蛋白表达、抑制Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关.
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六神丸对人肺癌 A549细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的：观察六神丸含药血清对人肺癌A549细胞血管内皮生长因子（ VEGF ）的影响，探讨六神丸治疗肺癌的作用机制。方法：制备不同浓度的六神丸含药血清，采用免疫组化法及逆转录-聚合酶链反应法（ RT-PCR）检测VEGF表达情况。结果：六神丸含药血清对A549细胞增殖有明显抑制作用，下调VEGF的表达，其作用与含药血清的浓度呈正相关，与DDP联合用药有协同作用。结论：六神丸能下调人肺癌A549细胞VEGF的表达，这可能是其治疗肺癌的机制之一。
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青蒿琥酯对人肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制
目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人肺癌细胞株A549增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8法检测不同质量浓度的ART对A549细胞作用24、48 h后细胞的增殖水平,Transwell小室试验检测30 μg/ml青蒿琥酯对A549细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测对A549细胞迁移能力的影响.Western blotting检测A549细胞经30 μg/ml的ART作用48 h后人抗原R(human antigen R,HuR)和MMP-9蛋白表达变化.结果:ART能够抑制人肺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性(P＜0.05).与未处理组比较,ART(30 μg/ml)处理的A549细胞穿膜的细胞数目显著减少[(47.11±8.61)vs(131.00±14.58)个,P＜0.01];A549细胞迁移距离显著缩短[(1.08±0.13)vs(2.91±0.24)mm,P＜0.01];A549细胞内HuR和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:ART能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HuR的表达有关.
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牛膝多糖硫酸酯和磷酸酯衍生物对人肺癌A549细胞的影响
目的 探讨牛膝多糖硫酸酯(s-AbPS)和磷酸酯(P-AbPS)衍生物对人肺癌A549细胞的影响及其作用机制.方法 用四甲基偶氯唑盐(MTT)法检测牛膝多糖、S-AbPS和P-AbPS对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪观察S-AbPS和P-AbPS处理A549细胞后细胞凋亡的改变.结果 S-AbPS和P-AbPS对A549细胞的增殖有抑制作用,且存在时间和剂量相关性.S-AbPS和P-AbPS的48 h抑瘤活性均较同浓度的牛膝多糖强.流式细胞仪分析显示,S-AbPS和P-AbPS均可不同程度地诱导细胞凋亡.结论 S-AbPS和P-AbPS较牛膝多糖能更有效地抑制人肺癌A549细胞的增殖,其机制可能是通过诱导A549细胞凋亡而实现.
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消癌平联合热疗对耐吉非替尼人肺癌A549细胞的抑制作用及其血管内皮生长因子表达的影响
目的:研究消癌平与热疗联合对耐吉非替尼人肺腺癌细胞株A549的抑制作用,以及对细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:以体外培养的耐吉非替尼人肺腺癌细胞株A549,用噻唑兰(MTT)检测其增殖抑制作用;用RT-PCR方法检测细胞中VEGF基因表达;用ELISA法检测细胞中VEGF蛋白含量.结果:消癌平单药抑制率为12％,高温组抑制率为12％,消癌平联合高温组抑制率为45％,差异有统计学意义(P＜0.05);消癌平单药VEGF表达为78.95％,高温组为37.02％,消癌平联合高温组为24.82％,差异有统计学意义(P＜0.05);消癌平单药VEGF蛋白含量表达为60.87％,高温组为4.78％,消癌平联合高温组为0.35％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:消癌平联合热疗可抑制A549肺癌细胞的增殖,其作用机制可能与降低VEGF蛋白表达介导肿瘤血管生成有关.
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Ku80在人肺癌中的表达水平与放疗前后表达变化的实验研究
目的：基于Ku80在辐射诱导的DNA修复中的作用，研究不同病理类型肺癌中Ku80的表达水平，并以人肺癌A549细胞接种裸鼠模型评估放疗对Ku80表达的影响。方法使用免疫组化及荧光定量PCR分别检测不同病理类型肺癌Ku80蛋白和mRNA的表达水平。将A549细胞接种到裸鼠上再以不同剂量的射线照射，并分别在24、48h后处死，用免疫组化及荧光定量PCR检测Ku80蛋白和mRNA的表达水平。结果肺癌组织表达的Ku80蛋白、mRNA水平高于正常肺组织（均P＜0.01）。在肺癌亚组中，肺腺癌和鳞癌比小细胞肺癌表达更高的Ku80蛋白、mRNA水平（均P＜0.01）。接种在裸鼠的人肺癌A549细胞经过不同剂量射线照射后Ku80 mRNA的表达增加，并具有剂量和时间依赖性。结论 Ku80在放疗引起的DNA破坏过程中起到重要的作用。肺鳞癌和腺癌的Ku80表达高于小细胞肺癌，这可能是肺鳞癌和腺癌放射敏感性逊于小细胞肺癌的原因之一。Ku80表达水平可能在预测肺癌的放射敏感性方面具有重要价值，可以成为肺癌放射增敏治疗的一个新靶点。
