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食管癌P-糖蛋白和p53蛋白协同表达的意义
联合化疗对延长恶性肿瘤患者的生存期有积极的临床意义,而肿瘤细胞的耐药性又是肿瘤化疗失败的常见原因和难解决的难题之一.近年来对食管癌的多药耐药(multidresisanc.MDR)基因及其产物P-糖蛋白(P-glycoproten.P-gp)和p53蛋白在食管癌中的表达单项研究已有报道[1,2].关于P-gp和p53蛋白表达关系研究报道甚少,我们应用免疫组化方法检测P-gp和p53在食管癌中的表达.并探讨两者之间及与食管癌各种预后指标关系.
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经皮冠状动脉介入治疗术后患者的氯吡格雷抵抗与药物相关代谢基因多态性的相关性研究
目的：联合分析氯吡格雷药物代谢相关基因CYP2C19、ABCB1、PON1单核苷酸多态性位点与经皮冠状动脉介入治疗术后患者氯吡格雷抵抗发生及其血小板聚集抑制率之间的关系。方法回顾性研究2015年4至12月入住上海交通大学医学院附属仁济医院心内科且进行介入治疗的299例患者。采用血栓弹力图测定患者（ ADP ）诱导的血小板聚集抑制率，采用数字荧光杂交测定CYP2C19（rs4244285与rs4986893）、ABCB1（rs1045642）、PON1（rs662）位点的基因型。根据患者血小板聚集抑制率的大小分为氯吡格雷抵抗（CR）组（17例）和非氯吡格雷抵抗（NCR）组（282例）及氯吡格雷低反应（CLR）组（54例）和非氯吡格雷低反应（CLR）组（245例）。根据CYP2C19（rs4244285与rs4986893）分为快代谢型（EM）、中间代谢型（IM）、慢代谢型（PM）。 CR组的年龄（71.1±11.1）岁高于NCR组（65.02±10.51）岁，且差异有统计学意义（t＝2.559，P＜0.05）。结果 CYP2C19的PM组与EM＋IM组相比血小板聚集抑制率下降且有统计学意义（Z＝－2.065，P＝0.039）且此差异并不由年龄引起（Z＝0.405，P＞0.05）。 PON1（rs662）位点的基因多态性与CR（χ2＝0.175，P＝0.916）、CLR （χ2＝1.589，P＝0.452）的发生及血小板聚集抑制率水平不具有相关性（ Z＝－0.030，P＝0.976）。ABCB1（rs1045642）与CR（χ2＝1.722，P＝0.423）、CLR（χ2＝0.176，P＝0.916）的发生及血小板聚集抑制率水平不具有相关性（Z＝－0.331，P＝0.741）。结论 CYP2C19弱代谢型与氯吡格雷诱导的血小板聚集抑制率下降具有相关性；ABCB1（rs1045642）、PON1（rs662）位点的基因多态性与氯吡格雷抵抗不具有相关性。同时，在CYP2 C19弱代谢型患者上也不会加重其血小板聚集抑制率的降低。
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液泡膜-ATP酶与P-糖蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨液泡膜-ATP酶(Vacuolar-H+-ATPase,V-ATPase)与P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)在结肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测80例结肠癌组织、20例结肠腺瘤组织和10例正常结肠黏膜组织中V-ATPase与P-gp蛋白的表达,分析它们的相关性及其与结肠癌患者的临床病理特征和预后的关系.结果 V-ATPase和P-gp蛋白在结肠癌组织中阳性表达率(72％和80％)高于结肠腺瘤组阳性表达率(40％和35％)及正常结肠黏膜组阳性表达率(20％和20％),差异均有统计学意义(均P＜0.05).结肠癌组织中V-ATPase蛋白表达与P-gp蛋白表达呈正相关(r=0.567,P＜0.01),V-ATPase蛋白和P-gp蛋白的表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度有关(均P＜0.05).V-ATPase蛋白高表达结肠癌患者的5年生存率低于低表达者(P=0.023),5年复发率高于低表达者(P=0.024).结论 V-ATPase在结肠癌组织中表达上调,与结肠癌的侵袭和转移有关,V-ATPase蛋白高表达患者的预后不良.
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胆道恶性肿瘤组织耐药相关蛋白P-gp和GST-π表达临床意义的探讨
目的:探讨耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S转移酶(GST-π)在胆道恶性肿瘤组织中的表达及其与临床病理参数的相关性.方法:采用免疫组化SP法检测60例胆道恶性肿瘤组织中P-gp和GST-π的表达.结果:60例胆道恶性肿瘤组织P-gp阳性表达率为88.3%,GST-π阳性表达率为93.3%.肿瘤高、中分化组织P-gp和GST-π阳性表达率分别为79.3%和86.2%,均低于低分化组织的96.8%和100.0%,P值均<0.05;局部浸润组织P-gp和GST-π阳性表达率分别为96.4%和100.0%,均高于无局部浸润组织的81.3%和87.5%,P值均<0.05;淋巴转移组织P-gp和GsT-π阳性表达率分别为97.0%和100.0%,均高于无淋巴转移的77.8%和85.2%,P值均<0.05.结论:P-gp和GST-π在胆道恶性肿瘤组织中呈高表达,联合检测P-gp和GST-π对指导临床化疗药物、制定合理的个体化疗方案和判断预后有着重要的意义.
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SW480侧群细胞分选及其ABCG2的检测
目的:分选结肠癌细胞株SW480中的侧群细胞,检测ABCG2的表达情况,并探讨两者的关系.方法:用流式细胞仪分选SW480中的侧群细胞和非侧群细胞,并检测它们的细胞周期;用细胞免疫化学、激光共聚焦和流式细胞仪检测SW480中的ABCG2表达情况.结果:SW480中存在侧群细胞,比例为2.29%,其大部分细胞处于静止期,S、G2和M期细胞仅占16.14%,而非侧群细胞增殖期比例相对较高,S、G2和M期细胞占34.05%;SW480中存在ABCG2+细胞亚群,比例约为10%,处于低分化状态.结论:SW480中的侧群细胞具有相对静止的干细胞特性,ABCG2+细胞亚群具有低分化的特性.联合两种方法,分选癌侧群细胞中的ABCG2+细胞,将有可能进一步纯化癌干细胞,为今后分离癌干细胞提供实验基础.
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原发性卵巢癌多药耐药性及其与预后相关性的研究
目的:检测PGP、GST-π、Topo-Ⅱ和LRP在原发性卵巢癌组织中的表达状况,为卵巢癌术后化疗方案的选择和预后判断提供新的有价值的参考指标.方法:采用免疫组化技术检测80例卵巢癌组织中PGP、GST-π、Topo-Ⅱ和LRP的表达,评价其与卵巢癌临床病理参数的关系和预后.结果: PGP、GST-π、Topo-Ⅱ、LRP在卵巢癌组织中阳性表达率分别为57.5%、58.8%、76.3%和73.8%,均高于良性肿瘤和正常组织对照组,P<0.05.临床分期Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ/Ⅳ期中,PGP的表达率为40.7%和66.0%(P<0.05),GST-π的为40.7%和67.9%(P<0.05),Topo-Ⅱ的为66.7%和81.1%(P>0.05),LRP的为55.6%和83.0%(P<0.05).随分化程度由高到低,PGP的表达率为57.9%、62.1%和53.1%(P>0.05),GST-π的为36.8%、55.2%和75.0%(P<0.05),Topo-Ⅱ的为52.6%、79.3%和87.5%(P<0.05),LRP的为84.2%、69.0%和71.9%(P>0.05).PGP阳性与阴性组中位生存期为36和48个月(P=0.001 7),GST-π为36和41个月(P=0.010 3),Topo-Ⅱ为37和39个月(P=0.381 1),LRP为37和55个月(P=0.002 1).影响卵巢癌生存因素分别为临床分期和PGP、GST-π、LRP的表达.临床Ⅲ/Ⅳ期的患者相对死亡风险度为Ⅰ/Ⅱ期患者的9.460倍,PGP、GST-π、LRP阳性患者相对死亡风险度分别是阴性表达患者的2.049、2.452和2.609倍.结论:原发性卵巢癌存在多药耐药,联合检测有助于遴选术后化疗药物,并预测患者的生存和预后.
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P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白1在脑室内注射红藻氨酸癫(癎)动物模型皮质内的表达
目的 研究P-糖蛋白(PGP)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)在脑室内注射红藻氨酸(KA)(癎)动物模型皮质内的表达.方法 脑室内注射KA 6、24 h及1周后处死动物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法,观察PGP和MRP1在皮质的表达.结果 KA注射24 h后PGP mRNA(1.58±0.14)和免疫阳性细胞(19.36±1.64)在皮质表达显著增加,与空白对照组(mRNA 0.73±0.06,免疫阳性细胞8.21±0.79)比较差异有统计学意义(P＜0.05),1周后PGP mRNA(0.92±0.09)和免疫阳性细胞(8.42±0.84)表达下降至对照组水平;注射KA后MRP1表达逐渐升高,24 h后MRP1 mRNA(1.72±0.15)和免疫阳性细胞(26.36±2.32)表达显著增加,与空白对照组(mRNA 0.87±0.07,免疫阳性细胞10.88±0.96)比较差异有统计学意义(P＜0.05),1周后MRP1 mRNA(1.57±0.12)和免疫阳性细胞(24.51±2.27)表达仍高于空白对照组(P＜0.05).结论 KA诱发的癫(癎)动物模型皮质内PGP、MRP1表达增强,可能参与了癫(癎)耐药的发生.
关键词： P糖蛋白类 多药耐药相关蛋白质类 癫(癎) -
多药转运蛋白对匹罗卡品癫(癎)大鼠模型脑内拉莫三嗪浓度的影响
目的 观察多药转运蛋白[P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)和多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance associated protein,MRP)]对匹罗卡品慢性癫(癎)大鼠模型海马内拉莫三嗪浓度的影响,探讨PGP和MRP在难治性癫(癎)多药耐药机制中的作用.方法 建立匹罗卡品慢性癫(癎)动物模型,在模型大鼠海马内安置微透析探针,腹腔注射拉莫三嗪(10mg/kg)后于不同时间点收集透析液,并用高效液相色谱检测其中的药物浓度.通过微透析探针局部分别给予PGP拮抗剂维拉帕米和MRP拮抗剂丙磺舒,观察维拉帕米和丙磺舒对模型鼠海马内神经元细胞外液拉莫三嗪浓度的影响.结果 维拉帕米明显升高了癫(癎)大鼠海马细胞外液拉莫三嗪的药物浓度,在给药后60、90、120、150 min(0.65±0.11、0.84±0.09、0.70±0.09和0.58±0.08)与模型组(0.41±0.10、0.50±0.04、0.39±0.09和0.30±0.06)比较差异有统计学意义(F=5.01、8.61、10.23、7.89,P<0.05),丙磺舒也提高了海马内拉莫三嗪的浓度,给药后90、120、150 min(0.75±0.09、0.58±0.10和0.49±0.07)与模型组比较差异有统计学意义(F=6.58、4.56、4.75,P<0.05).结论 PGP和MRP均能够限制拉莫三嗪通过癫(癎)大鼠血脑屏障,从而降低了海马内拉莫三嗪的药物浓度,上述机制可能参与了难治性癫(癎)耐药的发生.
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戊四氮点燃大鼠脑内P-糖蛋白和缺氧诱导因子1α的表达及相关性
目的 研究戊四氮点燃大鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)和缺氧诱导因子1α(Hif-1α)的表达变化和表达部位,探讨二者之间的关系.方法 反复腹腔注射戊四氮(40 mg/kg)制备大鼠点燃模型或注射PBS作对照.点燃后不同时间点处死动物.用免疫组织化学染色方法检测P-gp和Hif-1α的表达变化,用双标免疫酶组织化学染色法确定P-gp和Hif-1α的表达部位.结果 对照组的P-gp和Hif-1α零星分布在毛细血管内皮细胞,点燃组P-gp和Hif-1α分布在海马和皮质神经元的细胞膜,均以点燃后4 h的表达高(P-gp:1.09±0.20;Hif-1α:1.12±0.19,F=2.83,P＜0.05),且分布方式相似.结论 癫(癎)反复发作可以诱导脑内神经元表达P-gp和Hif-1α,二者可能具有相关性.
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塞来昔布对慢性颖叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响
目的 探讨环氧合酶-2抑制药塞来昔布对慢性颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响,以及核因子-κBp65和P-糖蛋白与颞叶癫癎发病机制的关系,以为环氧合酶-2抑制药用于抗癫癎药物辅助治疗提供实验依据.方法 采用大鼠海马CA3区微量注射海人酸的方法制备颞叶癫??动物模型,免疫组织化学染色和Western blotting法观察塞来昔布治疗后大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达变化.结果 与对照组相比较,颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65、P-糖蛋白表达水平,以及核因子-κBp65核移位现象明显增加(均P<0.05);经塞来昔布治疗后,海马组织中核因子-κKBp65、P-糖蛋白表达水平及核因子-κBp65核移位现象显著改善,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 核因子-κBp65和P-糖蛋白在颞叶癫癎慢性期表达上调、核因子-κBp65核移位现象增加,有可能是难治性癫癎发生与发展的分子生物学机制之一.环氧合酶-2抑制药塞来昔布通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马CA3区核因子-κBp65和P-糖蛋白表达水平,抑制核因子-κBp65核移位,终降低炎性反应,逆转多药耐药而发挥抗癫癎作用.
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左乙拉西坦添加治疗难治性部分陛癫癎的疗效及其与多药耐药基因的相关性研究:随机双盲安慰剂对照临床试验
目的 探讨左乙拉西坦添加治疗难治性部分性癫痢的临床疗效及其与多药耐药基因1(MDRI)的相关性.方法 30例诊断明确的难治性部分性癫癎患者按照随机双盲安慰剂对照研究方法,分别予抗癫癎药物左乙拉西坦添加治疗和安慰剂治疗,初始剂1 g(2次/d),2周后增至2 g(2次/d),再2周后增至3 g(2次/d),维持治疗12周后逐渐减量,进入减量/开放期.评价患者治疗期(16周)每周癫癎发作频率与回顾性基线期比较降低的百分比及发作频率减少50%的有效率.聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测患者基因型.结果 30例患者中27例完成临床试验.基因型检测共检出CC基因型16例,左乙拉西坦添加治疗组(治疗组)9例(完全控制1例、显效3例、有效2例,发作频率减少50%的有效率为66.67%),安慰剂组7例(仅1例有效,发作频率减少50%的有效率为14.29%),组间比较差异具有统计学意义(Z=-2.013,P=0.042);CT+TT基因型11例,治疗组9例(完全控制1例、显效2例、有效4例,发作频率减少50%的有效率为77.78%),安慰剂组2例.治疗组CC基因型与CT+TT基因型患者疗效比较,差异无统计学意义(Z=-0.193,P=0.888).结论 左乙拉两坦作为难治性部分性癫癎患者的添加治疗药物临床效果良好,其主要药理学机制可能与左乙拉西坦是非多药耐药基因1编码的P-糖蛋白底物有关.
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2型糖尿病患者血浆抵抗素和炎性细胞因子水平的变化及临床意义
目的 研究2型糖尿病(DM)患者血浆抵抗素及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的变化,探讨其与DM及胰岛素抵抗的关系.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定57例2型DM患者[按体质量指数分为非肥胖组(DM1)25例和肥胖组(DM2)32例]及40例正常对照者(NC)血浆抵抗素、TNF-α、IL-6浓度,同时测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 DM1组和DM2组比对照组血浆抵抗素水平(16.6±5.8)mg/L、(25.1±9.5)mg/L vs(12.2±3.4)mg/L,TNF-α水平(60.67±17.33)ng/L、(82.42±35.51) ng/L vs(43.25±12.91) ng/L,IL-6水平(81.25±15.62)ng/L、(108.63±31.02)ng/L vs(61.30±16.82)ng/L明显升高(P＜0.05～0.01),且DM2组的抵抗素、TNF-α、IL-6水平高于DM1组(P＜0.05).相关分析发现血浆抵抗素水平与HOMA-IR、BMI、FINS、TNF-α、IL-6呈正相关(r值分别为0.415,0.564,0.665,0.315,0.454,P值均＜0.01);TNF-α水平与HOMA-IR、BMI、FINS呈正相关(r值分别为0.459,0.326,0.308,P值均＜0.01);IL-6与HOMA-IR、BMI、FINS呈显著正相关(r值分别为0.395,0.375,0.279,P值均＜0.01).结论 2型DM患者血浆抵抗素、TNN-α、IL-6水平升高,与肥胖有关,三者相互作用,参与糖尿病及胰岛素抵抗的发生发展.
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P糖蛋白参与机体正常的药物代谢、分布及转运功能的研究进展
P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)由人类多药耐药基因-1(MDR-1)编码,是一种能量依赖性外排泵,可将其作用底物排出细胞外.人P-gp不仅存在于肿瘤细胞而且在肾脏、肝脏、小肠和大肠、脑、睾丸、肾上腺及怀孕子宫等正常组织中也有表达.这种组织分布情况提示P-gp在机体将异生化合物及代谢物质排泄到尿液和胆汁以及肠腔, 并且阻抑其在脑组织的积聚中发挥着重要的作用.P-gp在药物代谢中所起的作用包括在肾脏中的尿液排泄机制,在肝脏中的胆汁排泄机制,口服生物有效性的吸收屏障和决定簇以及作用于血脑屏障限制药物在脑组织中的积聚.
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P-糖蛋白170与糖皮质激素耐药关系的研究进展
近年来研究者们已经在一些肿瘤、免疫性疾病中发现,多药耐药基因产物P-糖蛋白170(permeability-glycoprotein,P-gp170)与糖皮质激素耐药有关.鉴于大多研究认为P-gp170是广泛存在于细胞膜表面的一种药物转运泵,在药物未与靶受体结合之前即与药物结合,将药物转运出细胞外而造成耐药,故研究P-gp170介导的激素耐药具有重要的意义.该文就P-gp170及其与糖皮质激素耐药关系的研究进展作一简要综述.
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胰岛素抵抗的人肝癌细胞HepG2对多柔比星的敏感性
目的:观察胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)的人肝癌细胞对抗癌药物多柔比星(adriamycin,ADM)的敏感性,并探讨其抗药机制.方法:采用5×10-6 moL/L胰岛素诱导(36和48 h)人肝癌细胞HepG2建立HepG2/IR细胞模型,并用盐酸吡格列酮(pioglitazone hydrochloride, PH)逆转HepG2/IR细胞的IR状态.MTT法检测HepG2/IR细胞对ADM的敏感性,FCM检测P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表达水平,实时荧光定量RT-PCR检测多药耐药基因1(multiple drug resistance 1, MDR1)mRNA的表达.结果:HepG2/IR细胞对ADM的敏感性降低(P<0.05),MDR1 mRNA的表达量分别是HepG2细胞的1.62倍(胰岛素诱导36 h)和5.21倍(胰岛素诱导48 h),P-gp蛋白的阳性表达率分别提高了47.50%(胰岛素诱导36 h)和189.05%(胰岛素诱导48 h).PH可逆转HepG2/IR细胞MDR1/P-gp的表达增加以及逆转细胞对ADM的抗药性.结论:胰岛素诱导的人肝癌细胞HepG2/IR可通过增加MDR1/P-gp的表达,使细胞对抗癌药物产生抗药性.
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葡萄籽多酚体外逆转胆囊癌细胞株GBC-SD多药耐药作用的研究
目的:研究葡萄籽多酚(GSP)逆转胆囊癌先天性耐药细胞株GBC-SD耐药的作用,寻找高效低毒的耐药逆转剂.方法:选择GBC-SD为研究对象,MTT比色法测定各化疗药物的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR测定MDR1 mRNA的变化,流式细胞仪检测P-gp蛋白和细胞内阿霉素浓度的变化.结果:①无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP处理后各化疗药物的IC50值均明显降低(P＜0.05),能明显逆转GBC-SD的多药耐药性;②无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞MDR1 mRNA表达(P＜0.05);③无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞P-gp蛋白表达(P＜0.05);④GSP增加GBC-SD细胞内ADM药物浓度(P＜0.05).结论:GSP能部分逆转先天性耐药细胞株GBC-SD多药耐药性,作用机制为下调GBC-SD细胞MDR1 mRNA及P-gp蛋白表达.
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不同蛋白激酶C同工酶亚型对卵巢癌细胞耐药性的影响
目的:检测不同的蛋白激酶(PKC)同工酶亚型在人卵巢癌耐药细胞中的表达和功能,探讨它们与P-糖蛋白(P-gp)介导的多药耐药性之间的关系.方法:采用免疫荧光及免迹印迹方法检测PKCα和PKCβI在人卵巢A2780细胞和A2780/ADM耐药细胞中的表达,免疫印迹法检测P-gp的表达,并用流式细胞仪测定细胞内柔红霉素(DNR)及罗丹明123(Rh123)的荧光强度.结果:在A2780/ADM细胞中,PKC与P-gp的表达较A2780细胞增高,PKCβI表达在两者间无明显改变;在A2780/ADM中DNR及Rh123的荧光强度较A2780中降低.A2780/ADM细胞与抗PKCα抗体共同卵孕育后细胞内DNR含量上升,与十字孢碱(SP)作用后细胞内Rh123泵出减少,积聚量升高.结论:PKCα可能在P-gp介导的人卵巢癌细胞多药耐药中起重要作用.
关键词： 卵巢肿瘤 蛋白激酶类 P糖蛋白类 多药耐药性相关蛋白质 流式细胞术 -
膀胱移行细胞癌中多药耐药基因的表达及其与细胞凋亡的关系
目的: 探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中P-gP基因的表达及其与细胞凋亡的关系.方法: 用免疫组化SP法和TUNEL法检测83例BTCC组织P-gP的表达及细胞凋亡指数(AI).结果: 83例BTCC组织中P-gp阳性率为71.1%,AI为1.433 5±0.386 3;P-gP阳性表达在病理分级、临床分期及预后中差异无显著性(P0.05),AI随着病理分级和临床分期而增高,差异有显著性(P<0.05),AI复发组高于无复发组(P<0.05).结论: 检测P-gp可指导BTCC的化疗药物选择,AI增高与BTCC的进展有关,P-gp、AI高表达预后及疗效差.
